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研究記事

生都平木処方が、PI3K/AKTシグナル伝達および腸内細菌群調節を通じてラットにおけるロペラミド誘発便秘に対する治療効果

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DOI：

10.3791/70470

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2026年5月12日

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1Shenzhen Traditional Chinese Medicine Hospital, 2Guangzhou University of Chinese Medicine,, 3Shenzhen Luohu Hospital of Chinese Medicine

この記事について

サマリー

本研究は、盛都平木公式がラットの便便を緩和し、糞便水分量と腸の推進力を高めることを示しています。これらの効果は、PI3K/AKT経路の活性化、AQP3およびAQP8のアップレギュレーション、腸内細菌叢の構成の調節に関連しています。

要約

便秘は一般的な消化器系の疾患であり、現在の治療法にはしばしば限界があります。盛都平木の方(SDPF)は、伝統中国医学に由来する改良された製剤で、便秘の治療に臨床的に用いられていますが、その作用機序はまだ明確ではありません。本研究では、UPLC-Q/TOF-MS解析を用いてSDPF中の188化合物を特定し、そのうち50が決定的に確認されました。動物実験では、SDPF処理により腸の推進力が大幅に向上し、便中の水分量が増加し、最初の黒便までの時間が短縮されました。ネットワーク薬理学および分子ドッキング解析により、PI3K/AKT経路の関与が示唆され、その後、この経路のアップレギュレーションおよび直腸におけるAQP3およびAQP8の発現増加が観察されることで検証されました。さらに、16S rRNA遺伝子配列解析により、SDPFは ラクトバチルス や バクテロイデス などの有益菌を増加させつつ、炎症に関連する細菌を減らすことで腸内細菌叢の恒常性を回復することが明らかになりました。総じて、SDPFはPI3K/AKT経路を調節し腸内細菌叢を調節するメカニズムを通じて、便秘を効果的に緩和します。

概要

便秘は、排便の頻度が少ない、いなみ、硬便を特徴とする広範な消化器疾患であり、世界人口の約20%に影響を及ぼし、社会経済的な大きな影響を及ぼします。慢性便秘は痔、肛門裂孔、糞便詰まりなどの身体的合併症を引き起こすだけでなく、不安やうつ病などの心理的苦痛にも寄与し、患者の生活の質を著しく低下させます。浸透圧下剤や食物繊維補給などの従来の治療法は、効果が限定的で副作用の可能性や依存リスクがあるため、しばしば最適とは言えない結果をもたらします。伝統中国医学(TCM)は、漢方薬や鍼灸を用いて、気の流れと内臓恒常性を回復させることで腸の運動を調整するホリスティックなアプローチを提供します。しかし、標準化されたプロトコルや機構の明確さの欠如が、より広範な臨床採用を制限しています。新たな研究は、腸内細菌叢の調節やバイオアクティブTCM由来化合物などの新規介入の可能性を強調しており、これらは副作用を最小限に抑えつつ腸機能の相乗効果を高める可能性があります5。したがって、中医学の原理と現代の薬物療法を組み合わせたエビデンスに基づく統合療法の開発は、便秘管理を革新する可能性を秘めています。

スロートランジット便秘(STC)は基礎研究における重要な病理モデルであり、人間の便秘の特徴である運動性障害である著しい遅延結腸通過を効果的にシミュレートします。これは便秘の分子メカニズムを解明するための「デコーダー」として機能し、研究者が直腸組織7、腸神経系8、カハル9の間質細胞、主要なシグナル伝達経路10の病理学的変化を直接調べることを可能にします。これにより、臨床研究の対象外の細胞および分子異常と巨視的症状をつなぐことが可能です。.国際的には、STCラットモデルの開発に確立された方法が主に化学的誘導アプローチ12であり、特にロペラミド(神経活動を抑制しアセチルコリン放出を抑制し、5〜7日以内に遅延輸送を一貫して誘導する末梢オピオイド受容体作動薬)や、病因模倣戦略13(長期高用量刺激性下剤投与など)が含まれ、これは大腸神経障害やメラノーシスを引き起こす。 およびその後の下剤依存性の結腸慣性。したがって、STCラットモデルは便秘の複雑な病因を垣根る窓を提供するだけでなく、基本的な機構的知見と臨床応用をつなぐ重要な橋渡しとしても機能します。

聖都平木方(SDPF)は、白 捽 (白少)、 長酸 (江皇)、リ ゾマ・シボティ( 唐溝)、 東方のセグスベッキア (西仙草)、 そして中国のクレマチス ・オスベック(魏霊仙)を含み、伝統中国医学理論に由来する改良された病院用調製剤であり、長年にわたり当科で関連疾患に使用されてきました。当院の予備的な臨床観察では、SDPFが便秘症状の緩和に役立つ可能性があることが示唆されています(未発表のデータ)。研究により、PI3K/AKTシグナル伝達経路が大腸の運動性調節に関与していることが示されています14。腸内細菌叢とその代謝物が腸内神経および平滑筋の活動を調節することで重要な役割を果たす可能性があります15。しかしながら、正確な規制メカニズムは完全には解明されていません。私たちは、PI3K/AKT経路と腸内細菌叢が共に結腸運動性を調節するための重要な軸を形成することを提案します。TCM製剤が結腸運動障害に与える治療効果は、PI3K/AKT経路の調節および腸内細菌叢軸の再バランスと関連している可能性があると仮説されています。本研究は、PI3K/AKT経路と腸内細菌叢が大腸の運動性において重要な相互依存軸として機能するという新しい統合仮説を提唱し検証することで、このギャップを埋めます。本研究の主な目的は、SDPFが遅い移動性便秘に与える治療効果が、この軸の二重調節を介して媒介されているかどうかを明らかにすることです。具体的には、ラットモデルを用いて、SDPFが主要なPI3K/AKTシグナル伝達タンパク質、腸内微生物叢の構成の変化、そして大腸運動機能に与える影響を調査しました。この複合的なメカニズムを明らかにすることで、本研究は私たちの知る限り、マイクロバイオータ-PI3K/AKT軸がTCMを用いた介入の統一標的となる実験的証拠を提供し、大腸運動障害の治療におけるより包括的な分子基盤を提供します。

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プロトコル

すべての実験手順は、国立衛生研究所2011年改訂版『実験動物のケアと利用に関する指針』に従って実施され、山東中医薬大学倫理審査委員会(福祉倫理ライセンス番号:SDUTCM20250421238)によって承認されました。

SDPFの準備
薬草混合物は、 Radix Paeoniae Alba(白少)20g、 Curcuma longa (江黄)10g、 Rhizoma Cibotii (塘溝)10g、 Siegsbeckia orientalis L.(Xixiancao)30g、 クレマチス・chinensis Osbeck (Weilingxian)30gで構成されています。この組み合わせ比率は臨床経験に基づいて決定されました。この化学式は、まず脱イオン水に1:9(g/mL)の固体と液体の比率で30分間浸し、その後60分間沸騰させることで抽出されました。得られた溶液はすぐにガーゼでろ過し、4,500× g で5分間遠心分離して上清液を採取しました。残渣は同じ条件(1:9比率、脱イオン水)で2回再抽出され、各抽出ごとに沸騰時間を30分短縮しました。3回の抽出から得られた上澄液は結合され、濃縮され、5〜7日間真空凍結乾燥されてSDPF粉末となり、その後冷蔵保存されてさらに利用されました。

SDPFの構成要素分析
固体試料を準備するために、適切な量の均質化物質を2 mLの遠心分離機管に移し、70%メタノール1 mLの水と3 mmのステンレス鋼ビーズを混ぜ、自動グラインダーで3分間処理し、その後10分間の渦巻き処理を行いました。液体試料は純粋なメタノールで希釈され、10分間渦巻きさせられました。その後、すべてのサンプルは12,000 × gで4°Cで10分間遠心分離され、得られた上清液は0.22μmフィルターでろ過されました。計測分析前に、2-クロロフェニルアラニン(内部標準、100 μg/mL)をろ液に組み込み、最終濃度1 mg/Lにしました。クロマトグラフィー分離は、C18カラム(1.8 μm × 2.1 mm × 100 mm)を装備し、30°Cで維持し、流量0.3 mL/minで実施されました。移動相は水中の0.1%の甲酸(A)と純粋なアセトニトリル(B)から成り立っていました。注入量は2μLに設定され、オートサンプラーは4°Cに保たれました。 質量分析検出は、以下の条件下で正イオン化モードと負イオン化モードの両方で実施されました:ヒーター温度325°C、シースガス45任意単位、補助ガス15arb、スイープガス1arb、電気噴霧電圧3.5kV、毛細管温度330°C、SレンズRFレベル55%。データは100〜1500mのm/z範囲で、120,000の解像度でフルスキャンMSモードで取得され、MS/MSの断片化はデータ依存取得モード(dd-MS2、TopN=5)で60,000解像度で高エネルギー衝突解離を用いて行われました。

動物実験
72匹のオスのスプラグ・ドーリーラット(生後6週、初体重180〜200g;RRID:IMSR_JAX:000664)はSPF条件(24 ± 1 °C、12時間の明暗サイクル)で収容され、食事と水が自由に利用されました。順応1週間後、体重に基づいて無作為に6群(n=12/グループ)に分けられました:(1) 空置対照群(正常生理食塩水)、(2) 便秘モデル群(10 mg/kg ロペラミド塩酸塩)、(3) 低(SDPF-L)-、(4) 中用量(SDPF-M)-、(5) 高用量(SDPF-H)群(それぞれ6、9、12 g/kg)、および(6) 陽性対照群(モサプリドクエン酸塩2 mg/kg)。SDPFは蒸留水で3、4.5、6 g/mLの濃度で懸濁液として新たに製製され、経口ガベージで固定容量2 mL/kgで投与され、それぞれ6、9、12 g/kgの投与量に相当します。塩酸ロペラミドは蒸留水中で5 mg/mL濃度で懸濁液として新たに調製され、経口ガベージで2 mL/kg(10 mg/kg相当)で投与されました。1週間の順応後、(2)–(6)群でロペラミド塩酸塩の経口ガベージを1日1回、1週間にわたり便秘を誘発しました。白い対照群には同等量の生理食塩水が投与されました。その後の1週間、グループ(3)–(5)のラットは経口ガベージによるSDPF治療を1日1回、陽性対照群(6)は同時にモサプリドシエン酸塩(2 mg/kg)を投与し、グループ(2)–(6)のラットは便秘モデルを維持するためにロペラミド水塩酸塩(10 mg/kg)を1日1回投与し続けました。空の対照群は引き続き生理食塩水を投与しました。処理期間終了時には、すべてのラットは一晩断食され、水は自由に提供されました。その後、動物は腹部内注射のペントバルビタールナトリウム(体重40 mg/kg)で麻酔されました。足の反射がなくなったことが確認された深部麻酔の後、ラットは頸椎脱臼によって安楽死させられました。その直後、直腸組織が迅速に採取されました。組織学的および免疫組織化学的解析のために、組織セグメントを4%のパラホルムアルデヒドに固定しました。タンパク質発現解析のために、組織サンプルは液体窒素でスナップ冷凍され、-80°Cで保存され、その後使用されました。

最初の黒い便
最初の黒い便の排泄までの時間は、1グループあたり3匹のラットで記録されました。実験前は、すべてのラットは12時間の断食状態で水を自由に利用していました。各動物はその後、10 mL/kg体重の量で準備されたインク懸濁液(活性炭5%とアラビア樹脂5%)を胃内投与し、投与時間が正確に記録されました。ガヴェージの後、ネズミは個別に個別のケージに入れられ、自由に食べ物と水を得られました。各ラットから最初の黒い便の出現を注意深く観察・記録し、腸の通過時間を計算しました。

糞便水の含有量
モデル確立に成功し、処理終了時に各ラット群(n=6)から2時間以内に排出された新鮮な糞便サンプルを採取し、あらかじめ計量された乾燥EPチューブに入れました。糞の湿った重さがすぐに記録されました。その後、サンプルは乾燥オーブンに移され、60°Cで36時間乾燥されました。初期乾燥期間の後、サンプルは計量されオーブンに戻され、重量測定は2時間ごとに繰り返し行われ、一定の重量が得られるまで(完全な脱水状態を示す)。糞便中の水分含有率は以下の式で計算されました。

糞便水分含有量(%) = [(湿潤重量 - 乾燥重量) / 湿潤重量] × 100%

腸推進率
12時間の断食期間(水を自由に利用)した後、各グループのラット(n = 6)に5%活性炭と5%アラビア樹脂を含むインク懸濁液(10 mL/kg)を胃内投与しました。25分後、動物たちは5%クロラール水和物の腹腔内注射で麻酔されました。腹部は組織採取前に75%エタノールで拭き取り消毒され、その後四肢を解剖ボードに固定しました。腹腔は外科用ハサミで慎重に露出され、幽門から回盲部接合部までの腸管が切除されました。分離された腸は滅菌のフィルターペーパーでまっすぐに整えられ、2つの測定値が記録されました。(1)小腸の全長、(2)インクの前面が移動した距離です。その後、腸推進比は以下の式で計算されました。

腸推進率(%) = (インク移動距離 / 総腸長) × 100%

HE染色
対照群、モデル群、SDPF-M群、Mos群(n=3群あたり)では、直腸検体を採取し、ヘマトキシリンおよびエオシン(HE)染色のために処理しました。標本は4%パラホルムアルデヒドに固定され、段階化されたエタノールで脱水され、パラフィンブロックに埋め込まれました。厚さ4〜5μmの薄片を製製し、従来のヘマトキシリンおよびエオシン染色を受ける前にガラススライドに貼り付けました。手順はキシレンを用いた脱脂から始まり、その後エタノール濃度を徐々に下げて再水和しました。核はヘマトキシリンに5〜8分間曝露して染色しました。1%酸性アルコールで分化し、0.2%アンモニア水でブルーイングした後、細胞質と細胞外マトリックスをエオシンで1〜2分間カウンター染色しました。最後に、染色された断片を脱水・クリアし、顕微鏡観察用のカバースリップで取り付けました。このアプローチにより、絨毛や骨頂の構造、上皮細胞の状態、固有椎板内の炎症浸潤の有無など、腸粘膜の形態を詳細に評価することが可能となりました。

KEGG経路とGO濃縮解析
SDPFの既に確立された化学プロファイルを活用し、SwissTargetPredictionプラットフォームを用いて各成分のタンパク質標的のシリコ予測を行いました。便秘に関連する推定標的はフィルタリングされ、DAVID 6.8データベースを用いて機能的注釈を施し、有意性カットオフはP < 0.05でした。得られた遺伝子セットはその後、生物的プロセス、分子機能、細胞構成要素における役割を明らかにするためにGO分類が行われました。これらの標的が疾患の病因に関与していることをさらに明らかにするため、これらの標的はKEGG経路にマッピングされ、便秘の発症と発症に有意に富む複数のシグナル伝達カスケードが明らかになりました。

「コンポーネント-ターゲット-経路」ネットワークの構築
Cytoscape(バージョン3.6.1)では、SDPFの化学成分、それに対応する便秘治療標的、関連する濃縮経路を体系的に統合することで、「成分-標的-経路」ネットワークを構築しました。このグラフィカルモデル内では、複合物の円、ターゲットの三角形、経路の長方形という3つのデータ型を表すために異なるノードジオメトリが用いられました。これらのノード間の接続強度はエッジ重み付けによって定量化され、複雑で多層的な薬理学的相互作用を全体的に把握しました。

分子ドッキング
分子ドッキング解析では、シクロクルクミン、アルビフローリン、クロロゲン酸、ケルセチンの4つの生物活性化合物がリガンド分子として選ばれ、その構造はPubChemデータベースから対応するCASレジストリ番号でダウンロードされました。タンパク質受容体を調製するために、UniProtの知識ベースを参照して標的タンパク質PI3KおよびAKTを確認し、その後RCSBタンパク質データベースから三次元構造を取得しました。これらのタンパク質および化合物構造はDiscovery Studio 2019で処理され、水素原子が添加され、電荷が割り当てられ、原子の種類が定義されました。さらに、受容体上の潜在的な結合ポケットも同定されました。準備済みの配位子と受容体はその後、ドッキングシミュレーション用にPDBQT形式で保存されました。ドッキング手順は以下の構成で実施されました:ポーズクラスター半径0.5、ランダムリガンド構造10の生成、精緻化10の配置。ドッキングラン完了後、候補複合体は予測される結合自由エネルギーに基づいて評価・順位付けされました。最終的に最もエネルギー的に有利な結合ポーズが選定され、PyMOLを用いて主要な分子間相互作用を示すために可視化されました。

免疫組織化学
対照、モデル、SDPF-Mの処理コホートから採取した4μmの厚さに切断されたパラフィン埋め込み直腸検体は、まずパラフィン除去と段階的に水和されました。抗原部位は、pH6.0に調整したシトレートバッファーでスライドを加熱することでマスクを除去しました。内因性ペルオキシダーゼを抑制するために、組織は3%の過酸化水素溶液で処理され、その後通常のヤギ血清で培養されて非特異的抗体結合を低減しました。切片は4°Cで一晩インキュベートされ、リン酸化PI3KおよびAKTを標的とした一次抗体が投与されました。PBSでインキュベートされた並行セクションがネガティブコントロールとして機能しました。徹底的な洗浄の後、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ結合の二次抗体を適用し、反応時間を制御するために顕微鏡観察のもとでDAB染色体を用いて免疫染色を開発しました。最後に、組織はヘマトキシリンで軽くカウンターステインされ、グレードアルコールで脱水され、クリアされてマウントされました。p-PI3Kおよびp-AKTの発現レベルは、実験群を盲検にした2人の独立した研究者によって質的に評価され、グループ間の違いを示すために代表画像が選ばれました。

ウェスタンブロッティング
ラットの直腸組織サンプルは、冷やしたリン酸塩緩衝生理食塩水で2回洗浄した後、適切な量のRIPA溶解バッファーで氷上で10分間均質化しました。均質化後、混合物は15,000 × gで遠心分離され、上澄液は分析のために保持されました。タンパク質の定量はビシンコニン酸法を用いて行われました。その後、サンプルはSDSローディングバッファーと結合され、95°Cで5分間のインキュベーションで変性処理されました。同等のタンパク質量はSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離され、孔径0.45μmのポリビニリデンジフッ化物膜に電気転写されました。移植後、膜は自然乾燥させた後、5%無脂肪ドライミルクでTBSTで1時間室温でブロックしました。このステップの後、膜はTBSTで洗浄され、その後AQP3(RRID: AB_2837708)およびAQP8(RRID: AB_605941)を標的とした一次抗体とともに4°Cで一晩インキュベートされました。翌日、TBSTで追加洗浄した後、適切なホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ結合二次抗体で室温で1時間インキュベートしました。免疫反応性バンドは最終的に画像診断システムを用いて検出・捕捉されました。

免疫蛍光
免疫蛍光染色手技は、対照、モデル、SDPF-M処理ラットの直腸組織切片に対して次のように実施されました。クライオセクション後、組織を4%パラホルムアルデヒドに固定し、0.1%トリトンX-100で透過させ、非特異的結合を防ぐために適切なブロッキングバッファーでブロッキングしました。切片は4°CでAQP3およびAQP8に対する一次抗体の混合物で一晩インキュベートされ、その後、結合していない抗体を洗い流し、室温暗闇で1時間、二次抗体の混合物(特にAlexa Fluor 594(赤)に結合したヤギ抗ウサギIgG(赤)でAQP3を標識し、ヤギ抗マウスIgGをAlexa Fluor 488(緑)に結合してAQP8を標識しました。二次抗体培養およびその後の洗浄後、細胞核はDAPIでカウンター染色され、スライドは水性マウントメディウムでカバースリップされ、蛍光顕微鏡または共焦点顕微鏡による画像取得と可視化が行われました。

糞便微生物叢の16S rRNAシーケンス
各実験群(n = 8)に対して、市販の土壌DNA抽出キットを用いてラットの糞便から細菌ゲノムDNAを分離し、すべての手順は供給者のプロトコルに厳密に従いました。16S rRNA遺伝子のV3–V4超可変領域を標的としたPCR増幅は、プライマーペア338F/806Rを用いたサーマルサイクラーで実施されました。アンプリコンシーケンスはIllumina MiSeqプラットフォーム上で製造元のガイドラインに従って実施され、稀薄曲線の飽和度を達成し信頼性の高い微生物多様性解析を確保するための十分なシーケンス深度を生成しました。シーケンス完了後、生リードは品質フィルタリングされ、アダプターで除去され、TrimmomaticとFLASHで統合されました。高品質配列はその後、UPARSEを用いて97%の類似度閾値で運用分類単位(OTU)にクラスタリングされ、潜在的なキメラ配列はUCIMEで特定・除去されました。代表配列の分類学的割り当ては、RDP分類器を用いてSILVA参照データベースに対して、信頼度70%の閾値で実施されました。微生物群集内のアルファ多様性を評価するために、Mothurソフトウェアパッケージ(v.1.30.2)を用いてChao1リッチネス推定器とシャノン多様性指数を算出しました。ベータ多様性解析では、グループ間の組成的差異を可視化するために主座標解析が行われました。異なる実験条件下で一意かつ共有されるOTUの分布を示すベン図が作成されました。コホート間で差異的な存在量を持つ分類群の同定は線形判別解析効果量を用いて行われました。最後に、PICRUSt2を用いて微生物群集機能の予測プロファイリングを行い、KEGG正書学注釈から機能的潜在能力を推定しました。

統計
すべての統計解析はSPSS 23.0およびGraphPad Prism 8.0を用いて実施されました。データは平均標準偏差(SD)±表示されています。データ分布の正規性はShapiro–Wilk検定を用いて評価されました。2つのグループの比較には、正規分布データには独立サンプルのStudent氏t検定が、正規分布でないデータにはMann–Whitney U検定が用いられました。3グループ以上の比較では、正規分布データには一方向分散解析(ANOVA)とTukeyの事後検定が用いられ、正規分布でないデータにはKruskal–Wallis検定に続いてDunnの事後検定が用いられました。マイクロバイオーム解析では、線形判別解析効果サイズ(LEfSe)を用いてデフォルトの閾値(LDAスコア> 2.0)を用いて差異的な豊富度の分類群を特定し、ベンジャミニ–ホッホバーグ偽発見率(FDR)法を用いて複数検査補正を適用しました。マイクロバイオームの統計解析はMothur(v.1.30.2)、LEfSe(オンラインツール、Huttenhowerラボ)、およびPICRUSt2(v.2.5.0)を用いて実施されました。p値が0.05未満であれば統計的に有意とされました。

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結果

SDPF抽出と凍結乾燥
SDPFは、5種類の薬用植物からなる多方薬草の配合です: Radix Paeoniae Alba(白少)、 Curcuma longa (江皇)、 Rhizoma cibotii (塘溝樹)、 Siegesbeckia orientalis L.(Xixiancao)、および Clematis chinensis Osbeck(Weilingxian)(図1A)。混合物は精製水で抽出され、さらなる分析のために凍乾粉末にされました(図1B)。

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ディスカッション

慢性便秘は、腸内細菌叢の不安定、神経筋機能の障害、腸分泌の変化が複雑な相互作用を伴う多因子性疾患です。これらの症状は6か月以上続き、患者の生活の質を著しく低下させます19。便秘は、遅滞通過型、正常型、排便障害、混合型など、いくつかのサブタイプに分類できます。慢性便秘の正確な病因は完全には解明されていませんが、一般的には腸内細菌異常、消化管神経伝導障害、骨盤底筋機能障害、脳腸軸異常など複数の要因の相互作用に起因するとされています21。現在の西洋医学の管理は主にプロキネティック剤、下剤、浣腸の使用を中心に行っています。しかしながら、長期的な薬物療法はメラノーシス大腸症、電解質障害、胃の損傷、薬剤耐性の増加などの副作用と関連し、しばしば満足のいく治療効果をもたらさないことがあります。本研究は、ロペラミド誘発便秘ラットモデルにおいて、化学プロファイリング、ネットワーク薬理学、分子結合、実験...

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開示事項

著者には利益相反を主張するものはありません。

謝辞

資金提供:本研究は深圳科学技術プログラム(助成金番号)によって支援されました。JCYJ20220531092203007)。

ラット便秘モデルの確立において、山東中医薬大学の屈麗群博士に技術的指導をいただき、深く感謝しています。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
自動グラインダーサンプル研削用の高スループット組織ホモジナイザーJXFSTPRP-48
LC-MSシステムサーモフィッシャー・サイエンティフィックQ アクティブHF LC-MSシステム超高性能液体クロマトグラフィーなど;質量分析システム
質量分析計サーモフィッシャー・サイエンティフィックQ アクティブHF高分解能オービトラップ質量分析計
C18コラムアジレント・テクノロジーズゾルバックス・エクリプス・プラスC18(2.1 & 100 mm、1.8 & mu;m)化合物分離のための逆相カラム
イメージングスキャンシステムGEヘルスケアイメージクオント LAS 4000ゲルおよびブロットイメージングシステム
サーモサイクラー応用バイオシステム(サーモフィッシャー・サイエンティフィック)GeneAmp PCRシステム9700PCR増幅装置
土壌DNA抽出キットオメガ・バイオテックD5625糞便・土壌サンプルから微生物DNA抽出用のキット

参考文献

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