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研究記事

慢性根尖性歯周炎におけるP. gingivalis/F. nucleatumは、TLR4/MyD88/NF-κB経路を通じて妊娠短縮と関連しています

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DOI:

10.3791/70793

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2026年5月15日

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1Department of Cariology and Endodontics, The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, The Affiliated Stomatology Hospital of Xinjiang Medical University, 2Development and Related Diseases of Women and Children Key Laboratory of Sichuan Province, 3Stomatology Disease Institute of Xinjiang Uyghur Autonomous Region, Xinjiang Medical University, 4Department of Endodontics, Urumqi Stomatological Hospital, 5Department of Obstetrics and Gynecology, The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University

この記事について

サマリー

慢性根尖性歯周炎に関連する口腔病原体(P. gingivalis、 F. nucleatum)は、マウスCAPモデルおよびヒト栄養芽感染アッセイを用いて評価されます。妊娠短縮は胎盤炎症活性化とともに観察され、TLR4/MyD88/NF-κBシグナル伝達と一致します。細菌DNAは胎盤・血管組織で検出可能であり、血液形成の関連や潜在的な介入標的を支持します。

要約

自然早産(sPTB;37週未満の出産)は新生児死亡率の主要な原因であり、子宮内感染がかなりの割合の症例に関与しています。新たな証拠は、 ジジガルスポルフィロモナス や フソバクテリウム・ヌクレアタム などの口腔病原体が妊娠不良と関連していることを示しています。しかし、慢性根尖性歯周炎(CAP)と妊娠リスクを結びつける機構的経路は完全には定義されていません。妊娠中のC57BL/6Jマウスでは、根管治療による接種と細菌懸濁液を用いた尾静脈チャレンジモデル(1 × 108 CFU/mL)によってCAPが確立されました。qPCRで妊娠期間、胎盤組織病理、炎症マーカー、細菌DNAシグナルを評価しました。同時に、ヒト栄養圏には P. gingivalis または F. nucleatum (MOI = 50、24時間)曝露され、TLR4/MyD88/NF-κB軸の活性化と一致する炎症シグナル伝達を調べました。対照群と比較して、CAP関連群は妊娠期間短縮(中央値19.5日対20.5日)を示し、胎盤炎症性指標の増加(IL-1βおよびTNF-αの上昇を含む)および炎症性損傷と一致する組織病理学的特徴を示しました。qPCRはさらに、胎盤および血管組織に細菌のDNAシグナルが存在することを示しました。栄養膜アッセイでは、 F. nucleatum は P. gingivalisよりも強い炎症促進反応を引き起こし、NF-κBリン酸化の増加と関連しています。これらの発見は総合的に示唆されており、CAP関連の口腔病原体がTLR4/MyD88/NF-κBシグナル を通じて 胎盤炎症を促進し、感染関連妊娠リスク軽減の潜在的な標的として口腔-胎盤の微生物軸を支持する可能性を示唆しています。

概要

自然早産(sPTB)とは、妊娠20週から37週の間に医療的介入なしに起こる分娩を指します。重要な世界的な公衆衛生上の懸念として、sPTBの発生率は先進国で約5%〜9%、資源制限地域では12%〜18%の範囲です。早産とその合併症は5歳未満の子どもの主要な死亡原因であり、年間約100万人の新生児死亡を占めています。生存者はしばしば呼吸困難症候群などの即時的な合併症と、脳性麻痺や発達遅延などの長期的な後遺症の両方を経験し、家族や社会に大きな経済的負担を強いる7,8。

sPTBの病因は多因子的であり、子宮収縮機能障害、子宮頸部不全、内分泌障害、胎盤障害、子宮内感染など、母体、胎児、環境要因の相互作用を反映しています。子宮内感染は主要な原因とされており、早産症例の約30%〜40%を占めると推定されています10,11。病原体は上行経路(例:子宮頸膣経路)または血源経路を通じて羊膜腔に侵入し、宿主の免疫応答を活性化し、炎症促進サイトカイン(例:IL-6、TNF-α)やプロスタグランジンの放出を促進し、分娩を誘発する12。栄養圏は母体と胎児の界面の重要な細胞構成要素であり、免疫耐性および抗菌防御に寄与します13。

口腔内の微生物、例えばPorphyromonas gingivalisやFusobacterium nucleatumは、sPTB関連の炎症過程に関与していることが示されており、これは細菌血症や炎症メディエーターの拡散を通じて関与している可能性があります14。これらの種は確立された歯周病原体であり、歯周炎とsPTBの関連は疫学および臨床研究で報告されています 15,16,17。特に、P. gingivalisおよびF. nucleatumは慢性根尖性歯周炎(CAP)18,19でも頻繁に検出されていますが、CAPと妊娠不良の関係は比較的研究が少なく、関連する生物学的経路も完全には定義されていません。Harjunmaaらは2015年に、頂端歯周炎と妊娠期間短縮および低出生体重との関連を初めて報告しました。同じコホートの追跡研究では、胎盤への直接的な細菌移動を支持せず、全身性炎症が根尖性歯周炎と妊娠転帰の妥当な関連を示す可能性を示唆しました22。この解釈に一致し、放射線検査で確認された頂点歯周炎は早産低体重出産のリスク増加と関連しています23。持続的な隠匿感染として、CAPは慢性的な低度全身炎症や微生物成分への血液性曝露を通じて妊娠リスクに寄与する可能性があります(24,25)。したがって、口腔・胎盤の炎症経路の理解を深め、感染関連妊娠リスクの予防戦略を策定するために、CAPと妊娠関係のさらなる明確化が必要です。

最近の研究では、炎症関連早産におけるTLR4/MyD88/NF-κBシグナル伝達軸の関連性が強調されています。Robertsonらは、炎症誘発性早産におけるTLR4を治療標的として特定し、動物モデルで予防効果を報告しました26。Pengらはさらに、miR-199a-3pがHMGB1/TLR4/NF-κB経路の抑制を通じて頸部上皮炎症を軽減することを示した。さらに、Shenらは糖尿病妊娠ラットにおけるシリンジンの抗酸化および抗炎症効果を記述し、TLR4/MyD88/NF-κB経路の調節が観察された改善に関与していることが示されています28。これらの発見は、TLR4/MyD88/NF-κB連鎖炎症シグナル伝達が感染関連経路に寄与し分娩に影響を与えるメカニズム的枠組みを支持しつつ、病原体の文脈に応じて複数の先天免疫受容体が並行して作用する可能性を認めています。

本研究では、補完的なin vitrotrotrophoblastアッセイおよびin vivoマウスモデルを用いてCAP関連妊娠効果を評価しています。栄養圏モデルは病原体誘発性炎症シグナルの制御された調査を可能にし、妊娠マウスCAPモデルは生理学的妊娠条件下で細胞応答と生物レベルの妊娠表現型を結びつけます。尾静脈挑戦モデルを含み、補完的な血液原性曝露経路を提供し、口腔感染環境で観察される炎症活性化パターンが、細菌成分が母体循環に到達した際に再現されるかどうかを評価する。具体的には、P. gingivalisおよびF. nucleatumへの栄養芽細胞曝露を用いて、サイトカイン応答およびTLR4/MyD88/NF-κB軸の活性化をプロファイリングし、動物実験では妊娠期間、胎盤炎症、頸動脈分岐および胎盤組織における細菌DNA信号のqPCR検出を評価します。qPCRは生存可能性や細胞の定在ではなく細菌DNAの存在を示すため、母体と胎児の界面における微生物の存在に関する解釈は慎重なままです。さらに、種の違いや制御された実験曝露が直接的な臨床翻訳を制限する可能性があり、ヒト関連の環境での検証の必要性を強調しています。

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プロトコル

すべての動物実験は、新疆医科大学第一附属病院動物研究倫理委員会(承認番号:IACUC-20231121-13)が定めた倫理指針および、国立衛生研究所(NIH)の実験動物のケア・利用に関するガイドライン(2011年版)に従って厳格に実施されました。さらに、本研究はARRIVEガイドラインに従って実施されました。すべての備品(試薬、消耗品、機器、ソフトウェア)およびそれに対応する製造者情報およびカタログ番号は、再現性を促進するために 材料表 に記載されています。

1. 細菌培養

Porphyromonas gingivalisおよびFusobacterium nucleatumの参照株(株識別子は材料表に記載)は嫌気性条件下で扱われました。一次培養は、還元前コロンビア産天培地に設置され、37°Cで48時間無酸素(85% N₂、10% H₂、5% CO₂)で培養されました。実験用調製剤として、単一の十分に分離されたコロニーを40 mLの脳心臓注入ブロスに接種し、同一の嫌気条件下で中間ログ相成長(OD660 = 0.6–0.8)まで培養しました。酸素曝露を最小限に抑えるため、接種および輸送工程は嫌気性ワークステーション内で、還元された培地とツールを用いて実施されました。細菌濃度は、同じ培養条件下でOD660ベースの定量と株特異的OD–CFU標準曲線を用いて、動物曝露時に1 ×10 8 CFU/mLに標準化されました。校正曲線は、少なくとも3つの独立した校正を用いた嫌気性寒天プレートでの連続希釈およびコロニーカウントによって確立されました。栄養芽細胞感染研究では、検証済みの列挙法を用いて細菌懸転液を定量化し、抗生物質不使用の完全培養培地で希釈して、共培養直前に指定された感染多重度(MOI)を達成しました。

2. 動物の収容とグループ化

特定無病原体C57BL/6Jマウス(n = 90、メス60、オス30)は、6〜7週齢の管理された環境(22°C±2°C、湿度60%±10%、12時間の光サイクル)で飼育され、 自由 に食物と水を得られました。1週間の順応後、マウスは6つの実験群(n=15/グループ)に無作為に割り当てられました:正常対照群(NC)、 P. gingivalis 併入CAP(AP)、 F. nucleatum 併入CAP(AF)、正常生理食塩水尾静脈注入(VN)、 P. gingivalis 尾静脈注入(VP)、 F. nucleatum 尾静脈注入(VF)。割り当てバイアスやケージ効果を最小限に抑えるために、ランダム化とケージ割り当てが記録されました。

3. CAPモデルの確立

すべての手術は無菌条件下で行われました。麻酔はペントバルビタールナトリウム(1.62 mg/30 g体重)とアトロピン硫酸塩(12.5 μg/30 g)の腹腔内投与により誘発され、足筋離脱反射の欠如により十分な麻酔深度が確認されました。マウスは体温を保つために温めパッドの上に仰向けで配置され、口を優しく開けて両側上顎第一大臼歯を安定的に確認できるようにしました。拡大鏡の下で、両側上顎第一大臼歯の歯髄室を無菌の丸いバーで開け、その後無菌の微小機器で冠状歯髄組織を除去しました。根管の開口部は小型の歯内管ファイル(サイズ06–10)を用いて特定され、穿孔リスクを最小限に抑えるために過度な力を避けつつ、開通を促すために優しく調整されました。チャンバーは無菌生理食塩水(または無菌PBS)で洗浄され、接種前に無菌ペーパーポイントで乾燥させられました。

細菌接種は標準化された懸濁液を用いて1×108 CFU/mLで実施されました。投与量の再現性を高めるため、供給量は1歯あたり2μL(約2 ×10 5 CFU)で操作的に固定され、チャンバー入口に設置された校正済みマイクロピペットチップで供給されました。同じ懸濁液で浸した滅菌吸収性の紙点をパルプチャンバーに入れ、局所的な露出を維持しました。排出は紙の先端の濡れた目に見えることと口腔内への漏れがないことで確認されました。接種後、チャンバーは目に見える液体が残らなくなるまで自然乾燥させ、その後光硬化した歯科用接着剤で密封(20秒)、その後光硬化した流動性樹脂複合樹脂を用いた修復(20秒)されました。シールの完全性は目視検査と優しい探査によって確認されました。隙間や早期の損失を示す修復物は直ちに再封印されました。術後の鎮痛とモニタリングは、施設の動物ケアの指針に従って提供されました。

2週間後、CAPの設立を確認するために根尖周囲レントゲン撮影が行われました。成功した定着は、明確な根尖放射透過性と、慢性根尖炎症および骨破壊に適合する周囲の骨変化によって定義されました。交尾は感染/モデル確立から2週間後に開始されました。

4. 尾静脈注入モデルの確立

細菌懸濁液は、滅菌生理食塩水で1×108 CFU/mLの濃度で調製されました。マウスは拘束され、尾を1〜2分間温めて側側の尾脈を拡張させました。注射は、細かいゲージの針(通常29〜30 G)を斜めに外側尾静脈に斜めに挿入し、浅い角度(約10〜15°)で行われました。正しい静脈注射の位置は、中心部に血が閃き、抵抗が低く滑らかに注入されたことで確認されました。挿入に失敗した場合は抵抗の増加や皮下血泡の形成が示され、その場合は点滴を停止し、短時間の再加熱後により近位部で繰り返し投与されました。マウスは3日間連続で毎日注射を受けました(1回あたり100μL)。3日後、女性は男性と同居し、翌朝に膣プラグの検査が行われました。膣プラグの確認(GD 0.5)後、妊娠15日目まで3日ごとに注射(マウス1回あたり100μL)投与されました。

5. 妊娠マウスモデルの確立

メスとオスのマウスは、2:1(メス:オス)の比率で、毎晩20:00から共に飼育されました。翌朝8時に膣プラグまたは精子陽性膣塗抹検査が行われた場合は妊娠日数(GD)0.5とされました。各マウスごとに、初期体重、産前体重、産後体重、妊娠期間、新生児出生体重、子孫数、死産数を記録しました。以前の研究29,30に基づき、GD 18.5以前に起こった出産はマウスにおいて操作的に早産と定義されました。妊娠短縮は出産期間内に起こる可能性があるため、妊娠結果は真の早産と妊娠短縮表現型の区別に注意を払って解釈されました。

6. サンプル採取と処理

妊娠15日目に、各グループに3匹の妊娠マウスをランダムに選抜し胎盤および血管採取(NC/AP/AFおよびVN/VP/VF)を実施しました。ペントバルビタールナトリウム(体重30グラムあたり1.62 mg)および硫酸アトロピン(体重30 gあたり12.5 μg)の腹腔内注射による麻酔後、眼窩後出血 で 血液サンプルを採取しました。マウスは呼吸、心拍、角膜反射の欠如により死亡が確認されるまで、二酸化炭素チャンバーで安楽死させられました。二酸化炭素の供給は、施設の動物福祉指針に沿った段階的な充填方式を踏襲しました。頸動脈の分岐および胎盤組織は、交差サンプル汚染を減らすため、無菌器具を用いて迅速に採取しました。胎盤組織は2つの部分に分けられ、一方は−80°Cで保存され、もう一方は10%中性緩衝ホルマリンに24時間固定され、その後段階的にエタノール脱水とパラフィン埋め込みが行われました。残りのマウスは1日の体重、妊娠期間、子数、新生児出生体重などをモニタリングしました。

7. 細胞培養と処理

ヒト栄養層細胞株HTR-8/SVneoは、RPMI 1640培地に10%熱不活化胎児用牛血清を37°Cで5% CO₂で培養しました。感染実験では、対数成長段階のHTR-8/SVneo細胞(1×10、6細胞)を6ウェルプレートにシードし、一晩密着させました。細菌チャレンジの前に、共培養時の抗菌性の持ち帰りを防ぐため、抗生物質フリーの完全培地に交換されました。P . gingivalis または F. nucleatum の細菌懸濁液はMOI=50で添加され、各ウェルは完全な培養培地を用いて最終体積2.5mLに調整されました。プレートは24時間インキュベートされました。上清液は24時間後に採取され、サイトカイン測定前に短時間遠心分離で破片を除去しました。接着細胞は滅菌PBSで2回洗浄され、非接着細菌を除去した後、以下のワークフローに従って直ちにRNAまたはタンパク質抽出のために処理されました。

8. マウス胎盤の組織学的解析

胎盤組織は10%中性緩衝ホルマリンに24時間固定され、パラフィン埋め込み、厚さ4.5μmで切片されました。胎盤の形態を調べるために、定期的なヘマトキシリンおよびエオシン(H&E)染色が行われました。免疫組織化学的染色では、陽性部位に褐色の沈着を生成する染色原性ペルオキシダーゼ基質を用いて抗原局在を可視化し、その後ヘマトキシリンで対色処理しました。陰性対照は一次抗体を非免疫血清に置き換えて実施しました。

再現性と透明性を高めるために、免疫組織化学的評価ではあらかじめ指定された半定量的スコアリング手法が用いられました。染色強度は0(なし)、1(弱)、2(中等度)、3(強)と評価され、陽性細胞の割合は0(<5%)、1(5–25%)、2(26–50%)、3(51–75%)、または4(>75%)と評価されました。免疫反応性スコアは、各フィールドの強度とパーセンテージスコアを掛け合わせて算出されました。各胎盤に対して、比較可能な解剖学的領域から重複しない高出力フィールドが少なくとも5つ取得されました。採点はグループ割り当てを盲検された2人のオブザーバーによって独立して行われ、意見の相違は共同レビューで解決されました。

9. マウス頸動脈分岐部および胎盤における細菌DNA信号の定量的リアルタイムPCR検出

組織DNAはシリカラムベースの組織DNA抽出ワークフローを用いて抽出されました。組織溶解液は12,000 × g 、20–25°Cで遠心分離で5分間精製され、上清液はシリカ柱に塗布され、12,000 × gで遠心分離して20–25 °Cで1分間DNA結合を行いました。 洗浄手順はワークフローに従って行われ、各洗浄後に12,000 × g で20〜25°Cで1分間遠心分離が行われました。 最終的なドライスピンは12,000 × g で20〜25°Cで2分間行われ、残留エタノールを除去しました。DNAは20–25°Cで2分間のインキュベーション後、50μLのエリュションバッファーで溶出され、12,000 × g で20–25°Cで1分間遠心分離して採取されました。 細菌ゲノムDNAは、ワークフローで特に必要とされない限り、同じ結合/洗浄/乾燥スピン/洗脱遠心分離パラメータを用いたシリカカラムベースの細菌DNA抽出ワークフローで抽出されました。

DNA濃度と純度は微小体核酸定量器を用いて測定し、完全性はアガロースゲル電気泳動で評価されました。適格なDNAサンプルは、後回の分析のために–20°Cで保存されました。標的細菌遺伝子は 補足表1に記載されたプライマーを用いて増幅・クローニングされ、補 足表2 および 補足表3に詳述されたPCR条件が記載されています。増幅された標的バンドは精製され、 補足表4 の仕様に従ってクローニングされ、適切な大腸菌DH5α細胞に変換されました。組換えプラスミド含有株を検証し、挿入配列の正確さを確保し、プラスミドDNAを抽出して標準的な調製を行いました。標準曲線は、標的細菌遺伝子断片を含む連続希釈されたプラスミド標準にqPCRを行うことで生成されました。頸動脈分岐および胎盤サンプル中の P. gingivalis 16Sおよび F. nucleatum 16Sの細菌DNAシグナルは、リアルタイムPCRで定量的に検出され、標準曲線を用いてCt値からDNAコピー数を算出しました。反応系とプログラムは、それぞれ 補足表5 および 補足表6に詳述されています。qPCRは生存可能性や細胞の定在ではなく細菌のDNAシグナルを示すため、母体と胎児の界面における微生物の存在に関する解釈は慎重なままです。

10. マウス血清サンプルおよび細胞培養上清液における炎症因子のELISA検出

すべての試薬と試料は試験前に室温に平衡されていました。TNF-αおよびIL-1βの血清レベルはマウスELISAワークフローで測定され、細胞培養上清液中のTNF-αおよびIL-1βレベルはキット手順に従いヒトELISAワークフローで測定されました。標準と試料は重複井で測定され、各プレートごとに標準曲線が作成されました。技術的重複は平均され、生物的複製ごとに1つの値を得られました。

11. その他の分子生物学解析

qRT-PCRでは、フェノール・クロロホルムを用いたRNA抽出ワークフローを用いて培養細胞から全RNAを抽出しました。相分離後、水相は12,000 × g で4°Cで10分間遠心分離し、RNAを沈殿・洗浄・再懸濁させました。RNA濃度は核酸分析装置を用いて測定され、RNAの完全性はアガロースゲル電気泳動で評価されました。逆転写によりcDNAが生成され、定量的リアルタイムPCRを用いてTNF-αおよびIL-1βのmRNAレベルを定量しました。プライマー配列は 補足表7に、反応混合物は 補足表8、反応プログラムは 補足表9に記載されています。

ウェスタンブロッティングでは、マウスの胎盤組織や栄養膜細胞からのタンパク質溶解液を、12,000 × g で4°Cで15分間遠心分離して清算し、定量化した後、SDS-PAGEにかけた後、膜移植および蛍光イメージングワークフローを用いた抗体ベースの検出を行いました。タンパク質負荷は1レーンあたり30μgと設定されました。図に示されたすべてのブロットで、分子量マーカーを含む元の未削り膜画像が保持され、DOI: 10.57760/sciencedb.28254で入手可能です。特に指定がない限り、「n」は生物学的複製(個別の動物または独立した細胞培養)を指し、技術的リピートは品質管理のために用いられ、生物学的複製の代わりにはなりません。

12. 統計分析

統計解析は統計解析ソフトウェアを用いて行われ、図はグラフ作成ソフト( 材料表に記載)で作成されました。正規分布の連続データは平均±標準偏差として提示され、適切な事後検定を用いた一方向ANOVAで解析されました。一方、正規分布でないデータは中央値(四分位範囲)として表現され、Kruskal–Wallis検定を用いて適切なペアワイズ比較で解析されました。統計的有意の閾値はP < 0.05、P < 0.01、P < 0.001に設定されました。特に指定がない限り、「n」は生物学的複製を示し、技術的複製(例:重複ELISA井戸)は生物的複製ごとに1つの値を得るために平均化されました。

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結果

P . gingivalis や F. nucleatum の感染は、マウスにおける妊娠短縮や血清炎症促進サイトカインの増加と関連しています
母体の体重変化、新生児の転帰、妊娠期間の基本統計は 表1 および 図1にまとめられています。母体体重の軌跡および新生児の状態はグループ間で有意な差はありませんでした(一方元ANOVA、P > 0.05; 図1A–F)。NC群の妊娠期間は20.50(20.13、20.50)、AP群とAF群はそれぞれ19.50(19.38、20.00)および19.50(19.38、20.13)でした。NCと比較して、APおよびAFは妊娠期間が短く、NCとAPの間に統計的に有意な差がありました(Kruskal–Wallis test, P < 0.05;

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ディスカッション

近年、口腔の健康と妊娠結果の密接な関連が示唆され、慢性根尖性歯周炎(CAP)と妊娠不良転帰、特に早産関連表現型との 関連性への注目が高まっています。システマティックレビューによると、現在の臨床エビデンスは依然として限られていて不均一ですが、全体としては母体根尖歯周炎と妊娠不良との正の関連を支持し、より質の高い前向き研究の必要性を強調しています。この文脈に沿って、放射線検査で検出されたCAPは産後コホート32における低出生体重早産と関連しています。さらに、臨床研究では、胎盤への細菌の直接移動ではなく、根尖感染と出生の帰帰関係において全身炎症が妥当な媒介者である可能性が示唆されています。33。

この背景のもと、本研究では補完的なin vivoマウスモデルとin vitrotrophoblastアッセイを統合し、CAP関連口腔病原体が妊娠短縮お...

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開示事項

著者たちには宣言すべき利害関係がありません。

謝辞

この研究は四川省女性・子ども発生・関連疾患基金重点研究所(助成金番号)の支援を受けました。FYYFEJB2025002)。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
Chromogenic Peroxidase Substrateアジレント・ダコK3468IHC用のクロモジェニックペルオキシダーゼサブストレート
Defibrinated sheep blood, sterileThermo Fisher (Remel)R54012血液寒天（5％）の添加物
Dental X-ray unit / radiography systemプランメカIntra (モデル)CAP確認のための歯髄掌部X線写真
DNeasy Blood & Tissue KitQIAGEN69504組織/細菌からのシリカカラムDNA抽出
E. coli DH5α Competent CellsTaKaRa9057プラスミド標準構築のための形質転換
Eosin Y solution, alcoholicシグマ・アルドリッチ（メルク）HT110132H&E染色
Fetal Bovine Serum (FBS), qualified, AustraliaGibco（Thermo Fisher Scientific）10099-141完全培地への補足
Flowable resin composite3MFiltek Supreme Flowable 6010シーリング後の修復; 光硬化
Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum reference strainATCC25586嫌気培養; CAPおよび尾静脈曝露
GraphPad PrismGraphPad SoftwarePrism 9（バージョン）統計分析および図の生成
Hematoxylin solutionシグマ・アルドリッチ（メルク）HHS32H&E反染
HTR-8/SVneo human trophoblast cell lineATCCCRL-3271インビトロ感染アッセイ
Human IL-1β/IL-1F2 Quantikine ELISA KitR&D Systems（Bio-Techne）DLB50細胞上清液IL-1β測定
Human TNF-α Quantikine ELISA KitR&D Systems（Bio-Techne）DTA00D細胞上清液TNF-α測定
Immobilon-FL PVDF membrane, 0.45 µmミリポア（メルク）IPFL00010蛍光ウェスタンブロット転写
IRDye 680RD Goat anti-Rabbit IgG (H+L)LI-COR925-68071蛍光二次抗体
IRDye 800CW Goat anti-Rabbit IgG (H+L)LI-COR926-32211蛍光二次抗体
IκBα (44D4) Rabbit mAbCell Signaling Technology4812一次抗体（WB）
K-File（歯内療法用ファイル）デンツプレイシローナ（Maillefer）A012D015チャネル器具（例：サイズ15）
LED dental curing light3MElipar DeepCure-S（モデル）20秒硬化（プロトコル通り）
Mouse IL-1β/IL-1F2 Quantikine ELISA KitR&D Systems（Bio-Techne）MLB00C血清IL-1β測定
Mouse TNF-α Quantikine ELISA KitR&D Systems（Bio-Techne）MTA00B血清TNF-α測定
MyD88 (D80F5) Rabbit mAbCell Signaling Technology4283一次抗体（WB）
NanoDrop One Microvolume UV-Vis SpectrophotometerThermo Fisher ScientificND-ONE-WDNA/RNA定量
Near-infrared imaging systemLI-COROdyssey CLx（モデル）蛍光ウェスタンブロットイメージング
NF-κB p65 (D14E12) Rabbit mAbCell Signaling Technology8242一次抗体（WB）
PBS, pH 7.4, without Ca2+/Mg2+Gibco（Thermo Fisher Scientific）10010-023細胞洗浄と試薬調製
Penicillin-StreptomycinGibco（Thermo Fisher Scientific）15140-122抗生物質
Pentobarbital sodium saltシグマ・アルドリッチ（メルク）P3761麻酔導入（プロトコル投与）
Peroxidase blocking solutionアジレント・ダコS2023IHC用内因性ペルオキシダーゼのブロック
Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAbCell Signaling Technology3033一次抗体（WB）
Porphyromonas gingivalis reference strainATCC33277嫌気培養; CAPおよび尾静脈曝露
PrimeScript RT Reagent Kit (Perfect Real Time)TaKaRaRR037AcDNA合成
Real-time PCR systemApplied BiosystemsQuantStudio 5（モデル）16SターゲットのqPCR定量
Round bur (sterile)デンツプレイシローナH1-010上顎第一大臼歯歯髄腔へのアクセス開口
RPMI 1640 MediumGibco（Thermo Fisher Scientific）11875-093HTR-8/SVneo培養基のベース
SYBR-safe DNA gel stainInvitrogenS33102DNA可視化
TaKaRa MiniBEST Plasmid Purification Kit Ver.4.0TaKaRa9760標準用のプラスミドミニプレップ
TB Green Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)TaKaRaRR820AqPCRマスターミックス（染料ベース）
TLR4 (D8L5W) Rabbit mAbCell Signaling Technology14358一次抗体（WB）
TRIzol ReagentInvitrogen15596-026フェノール-クロロホルムRNA抽出
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol redGibco（Thermo Fisher Scientific）25200-056細胞剥離
T-Vector pMD19 (Simple)TaKaRa3271標準曲線のPCR産物のクローニング
Universal dental adhesive3MScotchbond Universal Adhesive 26200接種後の歯髄腔のシール

参考文献

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