この研究は動物実験を通じて、盛仙屈玉の心不全に対する治療効果を確認しました。超高性能液体クロマトグラフィー・質量分析およびネットワーク薬理学解析により、治療対象とメカニズムの可能性が特定されました。
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この記事について
サマリー
要約
聖仙屈薬(SXQY)は心不全(HF)の治療戦略として提案されていますが、その治療メカニズムはまだ明確ではありません。本研究では、HFにおけるSXQYの治療効果とその基礎的なメカニズムを調査しました。ラットモデルのHFは横大動脈収縮(TAC)によって誘導され、SXQYで治療されました。心機能は経胸腔心エコーで評価され、心筋構造および線維化はヘマトキシリンとエオシン、マッソン染色法で評価されました。血清サンプルは超高性能液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法を用いた非標的メタボロミクスで分析されました。血液流入成分を標的にマッピングし、交差するHF関連標的はタンパク質–タンパク質相互作用(PPI)ネットワーク解析を用いて解析し、その後Gene Ontologyおよび京都遺伝子・ゲノム百科事典(KEGG)解析を行いました。SXQYはTACラットの心機能を大幅に改善し、拡張期における左心室内径および拡張期における左心室後壁厚の減少と左心室駆出率の増加、そして心筋肥大、炎症、線維症の緩和が示されました。合計563種類の血液侵入化合物(367の試作薬と196の代謝物)が同定され、中医学システム薬理学データベースで63の標的に対応する5つの主要な有効化合物が特定されました。ネットワーク解析により、44の重複遺伝子が明らかになり、その中核成分はフォルモノネチン、チモサポニンBII、シネネセチン、そしてPTGS2、PPARG、HSP90AA1がハブターゲットとなりました。PPI解析では、ESR1、PTGS2、PPARG、HSP90AA1、JUNおよび15の他の遺伝子などの主要遺伝子も同定されました。KEGGの解析により、SXQYは主にCa2+、ホスファチジルノシトール3-キナーゼ-タンパク質キナーゼB、環状アデノシン一リン酸、炎症およびホルモン関連経路を通じて作用することが示されました。結論として、SXQYは多成分・多標的・多経路のメカニズムを通じて心機能の改善と心筋のリモデリングの軽減を通じてHFに対する保護効果を発揮します。
概要
心不全(HF)は、心臓の構造的または機能的異常により心室充填および射出能力の障害を特徴とする臨床症候群であり、臨床症状の星座を生じさせます。さまざまな心臓疾患の末期疾患であるHFは、患者の生活の質を著しく低下させ、高い死亡率と頻繁な再入院を引き起こし、家族と社会の両方に大きな疾患負担を強いる2,3。臨床管理において、HFの薬物療法は治療の基盤かつ基盤を形成し、主に利尿剤、レニン-アンジオテンシン系阻害薬、ベータブロッカー、ミネラルコルチコイド受容体阻害薬、ナトリウム-グルコース共輸送体2阻害薬などの主要薬剤クラスで構成されています。.これらの薬剤はHF患者の予後を部分的に改善しましたが、それぞれに電解質障害、徐脈、尿路感染症などの制限や副作用があります。したがって、HFに対する薬物療法はさらなる検討が必要です。
伝統中国医学(TCM)はHFの長期管理において豊富な臨床経験を蓄積しています。ホリスティックな調整と多標的介入を重視し、独自の治療アプローチを提供します。近年、いくつかのランダム化比較試験(RCT)がHF 9,10,11,12,13,14,15に対する中国漢方薬の治療効果を示してきました。聖仙屈薬(SXQY)はすでにその治療効果を確認するための厳密なRCTが始まっていますが、その具体的な治療メカニズムはまだより詳細かつ包括的な調査が必要です。ネットワーク薬理学は、システム生物学、多薬理学、計算分析を統合する新興学問であり、中国漢方処方の全体的な作用機序を解明するための強力なツールを提供します。したがって、本研究は非標的メタボロミクスとネットワーク薬理学を統合した戦略を用いて、SXQYの血液吸収成分を特定し、その治療メカニズムの可能性を明らかにします。本研究は、SXQYのさらなる臨床応用の基盤を提供することを目的としています。
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プロトコル
すべての実験手順は中日友好病院動物倫理福祉委員会(承認番号:zryhyy21-23-01-09)によって審査・承認され、動物の使用と苦痛を最小限に抑えるための代替、削減、精錬の原則に従って実施されました。データ取得および解析(心エコー測定および組織学的評価を含む)を行う研究者は、グループ割り当てに対して盲検化されました。
SXQYサンプルの調製
SXQYは以下のハーブ成分で構成されています: Astragalus membranaceus (黄気)(30g)、 Codonopsis pilosula (Dangshen;20g)、Cornus officinalis(Shanyurou;15g)、 Sparganium stoloniferum (三倫;12g)、 Curcuma zedoaria(Erzhu ;15g)、 Cimicifuga heracleifolia (Shengma;10g)、 Bupleurum chinense (Chaihu;10g)、 Platycodon grandiflorus (Jiegeng;10g)、 Anemarrhena asphodeloides (ジム; 15 g)、およびレオヌラス・ジャポニクス(イーム; 15 g)、処方1本あたりの総粗草重は152 gです。すべての漢方薬材は中国・日本友好病院薬学部から購入され、標準的な薬剤鑑定方法に従って主任薬剤師によって認証されました。臨床的には、SXQYは1日1回の処方(152g)で投与されます。成人の平均体重が70kgと仮定すると、対応する人間の用量は2.17g(粗草)/kgとなります。人間とラットの体表面積の正規化に基づき、同等のラット用量は13.67g(粗草)/kgと計算されました。煮込み準備のために、SXQYの処方箋1枚を、初期溶媒量に基づく粗草1グラムあたり10 mLの比率で蒸留水に1時間浸け、その後電気加熱マントルで沸騰し、100°Cで1時間連続沸騰させました。抽出物はガーゼ(200〜300μmの孔径)でろ過されました。残留物は同じ条件下でさらに2回抽出されました。プールされたろ液は低圧下で回転蒸発器を用いて60°Cで濃縮され、最終体積111 mLとなり、1.37 g(粗剤)/mLの濃度が得られました。濃縮されたデコプションは再びガーゼ(200–300μmの孔径)でろ過され、4°Cで保存され、24〜48時間以内に使用されました。投与時は溶液を直接使用し、ガベージ体積は1.37 g/mLの濃度に基づいて計算され、目標投与量13.67 g/kgを達成するために約10 mL/kgの投与量となりました。
動物モデル
生後8週のオスのスプラッグ–ドーリー(SD)ラット18匹は、標準的な条件付き環境(23°C±2°C、相対湿度50±5%、12時間の明暗サイクル)で飼育され、餌と水は自由に利用されました。動物はランダムな数値表を用いて3つのグループ(n=6名)にランダムに割り当てられました:シャム手術群(Sham)、横大動脈収縮群(TAC)、およびSXQY治療群(SXQY)。TACおよびSXQY処理群のラットは、イソフルラン吸入(誘導4%、維持2%)麻酔を受け、37°Cで温度維持された温熱パッドの上で仰向けに置かれました。 足のつまみに対する反射反応の欠如、安定した呼吸数、自発的な動きの欠如により、十分な麻酔が確認された。角膜乾燥を防ぐために両目に眼科軟膏が塗布されました。気管内挿管後、動物は200g体重あたり4–6 mLの潮汐量、呼吸数70回/分、吸気と呼気の比率が1:1の小動物用人工呼吸器に接続されました。
すべての手術は無菌条件下で行われました。手術器具はオートクレーブで滅菌され、手術部位はポビドン・ヨウ素で剃り、消毒し、その後70%エタノールで準備しました。手術部位の準備後、左胸部皮膚切開を行い、大胸筋と小胸筋を鈍く剥離して肋骨を露出させました。左胸骨縁に隣接する第2から第3肋間隙に約1.0cmの水平切開が行われました。血管と筋膜は鈍く分離され、胸腺は優しく引き戻されて大動脈弓を完全に露出させました。
大動脈弓は無菌の湾曲鉗子を使って右無名動脈と左総頸動脈の間で慎重に持ち上げられ、2-0シルク縫合糸がその下に通されました。鈍い先端の曲がった16ゲージの針(外径1.6mm)は、使用前に先端を鈍らせて適切な曲率に曲げ、その後オートクレーブで滅菌する手作業で改造されました。準備された鈍先の湾曲針は大動脈弓に平行に位置し、その後、縫合糸を大動脈と針の両方にしっかりと結びつけました。針はすぐに取り除かれ、標準化された収縮が作られ、胸腺の位置も再調整されました。出血がないことが確認された後、胸壁と皮膚は層状に閉じられました。術後は約10分間機械換気を続け、安定的かつ規則的な呼吸数と人工呼吸なしで自然呼吸を維持できることが示されました。この時点で気管内チューブが抜かれた。偽手術を受けた動物も同じ手術を受けましたが、大動脈弓は結紮されていませんでした。
手術後、切開部は消毒され、感染リスクを減らすために動物は清潔な回復ケージに入れられました。その後、ラットは動物施設に戻され、回復と定期的な収容が行われました。鎮痛はブプレノルフィン(0.05 mg/kg、皮下投与)を用いて投与されました。ラットは最初の72時間以内に12時間ごとに痛み、苦痛、手術合併症(可動性の低下、毛突勃起、異常姿勢、呼吸困難、創傷裂開など)の兆候を観察しました。
手術から3日後、SXQY治療群のラットは、SXQYの自重100 mLを経口で9週間ガベリングしました。一方、偽手術群とTAC群のラットには、ガベージ法で蒸留水1mL/100 gの蒸留水が投与されました。
経胸心エコー
治療期間終了時には、全群で経胸腔心エコー検査が実施されました。ラットはイソフルランの吸入で麻酔され、専用の画像診断プラットフォーム上で仰向けに置かれました。前胸部は丁寧に剃られ、たっぷりの超音波ジェルが塗られました。超音波画像診断は、BモードおよびMモードの高周波トランスデューサー(18–40 MHz)を搭載した高解像度小動物超音波システムを用いて実施されました。トランスデューサーはゲルで覆われた部分に優しく配置され、深度設定は12.29mm、利得は22dBでした。画像品質を最適化するためにフォーカスを調整しました。画像と映像ループは、その後の定量分析のために取得されました。左心室拡張末期内径(LVIDd)および拡張末期左心室後壁厚(LVPWd)を測定し、Mモード測定に基づくタイヒホルツ式を用いて左心室拍出率(LVEF)を算出しました。各パラメータに対して、3〜5回の連続心周期で平均値を算出しました。すべての心エコー取得および解析は、標準化された心エコープロトコルに従い、正式な心エコー訓練を受けた認定オペレーターによって実施されました。
サンプル採取と処理
超音波検査後、ラットはイソフルランで麻酔されました。動物は仰向けにされ、胸腔が開かれて心臓が露出されました。心臓は素早く切除され、冷たいリン酸塩緩衝塩水で洗浄され、矢状面に沿って切片されました。心臓組織は直ちに4%パラホルムアルデヒドで4°Cで24時間固定され、その後段階的なエタノール系列(70%、80%、90%、95%、100%)で各ステップ1時間脱水され、その間に組織は徐々に透明になり、目立った収縮は見られませんでした。試料はキシレンで除去され、溶融パラフィンで60°Cで3時間浸入され、室温(RT;20°C–25°C)で固化させました。パラフィン埋め込みの心組織ブロックを切片し、4〜6μmの厚さでミクロトームを用いて切片しました。セクションは45°Cで維持された水浴に浮かべられ、ガラススライドに取り付けられ、37°C〜40°Cで一晩乾燥させられました。スライドはRTで低湿度条件下で保管され、1週間以内に組織学的染色のために使用されました。
ヘマトキシリンと嗜酸(HE)染色
パラフィン埋め込み切片は以下のように処理されました。切片はまずキシレンI、II、IIIにそれぞれ5分間浸けて脱硫され、その後無水エタノールIおよびIIおよび段階エタノール溶液(95%、90%、80%、70%、50%)をそれぞれ5分間水和させ、最後に蒸留水でワックスの残留物を目に見えない状態で洗い流しました。その後、ハリスヘマトキシリンで5分間染色し、流れる水道水で1〜2分間すすいできました。分化は酸性アルコール溶液で約1〜2秒間行われ、背景が淡く見える一方で核染色が明確な場合、目視検査でエンドポイントが特定されました。その後、37°Cから45°Cの水でブルーイングし、蒸留水ですすぎます。その後、これらのセクションはアルコール溶性のエオシンで40秒間カウンターステインされ、蒸留水で洗浄され、エタノールの段階で脱水され、キシレンで清浄化され、最終的に中性樹脂で埋め込まれました。
マッソンの染色
パラフィンを含む断片は、キレンI、II、IIIでそれぞれ5分間連続して脱水され、その後無水エタノールIおよびIIおよび段階エタノール溶液(95%、90%、80%、70%、50%)でそれぞれ5分間水和し、最後に蒸留水で洗浄されました。切片は0.5%酢酸(4°Cまで予冷)に1秒浸け、その後、市販のMassonの三色染色キットのフクシン溶液で10分間染色、さらにリンホモリブジック酸で5分間分化し、アニリンブルーで3分間カウンターステインしました。すべての試薬は同じ市販キットの構成要素であり、製造元の指示に従って使用されていました。染色後、切片は酢酸で4°Cまで予冷されたもので3回(1回の洗浄で約30秒)、エタノールの段階で脱水され、キシレンでクリアされ、中性樹脂で埋め合わせられました。
代謝学解析のための血清サンプル採取
6頭の生後8週齢の雄スSDラットは、上記の生体内実験と同じ条件下で飼育されました。動物は、SXQY処理群と車両対照群(蒸留水、各グループあたりn=3名)にランダムに割り当てられ、コンピュータ生成のランダム化手法を用いました。SXQY群のラットには、体重100gあたり1 mLの用量で経口投与され、車両群には同量の蒸留水が投与されました。7日間の毎日のガベージの後、7日目に最終投与量が倍増しました。前回の管理後は、動物たちは12時間の断食状態にされました。ラットは足筋離脱反射の喪失が適切な麻酔の指標として確認されるまでイソフルラン麻酔を投与しました。無菌毛細血管管を使って後眼窩静脈神経叢から血液サンプルを採取し、直ちに抗凝固剤なしの1.5 mLマイクロ遠心分離機チューブに移管しました。その後、全血をRTで1時間放置し、1000 × gで4°Cで15分間遠心分離して血清を取得しました。透明な上部血清層と血栓の間に明確な分離が見られた際、上清液を慎重に吸引し、清潔なマイクロ遠心分離機チューブに移しました。血清サンプルは血液流入成分の分析まで−80°Cで保管されました。
代謝分析のためのサンプル前処理
血清サンプルは−80°Cの保存から取り出した後、氷上で解凍され、均質性を確保するために短時間(10秒)渦混合されました。100μLの血清を1.5mLのマイクロ遠心分離機チューブに移し、その後抽出溶媒500μLを加え(20%アセトニトリルメタンオール含有2-クロロL-フェニルアラニンを内部標準として、最終濃度1μg/mLで添加)してタンパク質沈殿を誘発しました。混合物は激しく3分間渦巻きされ、12,000 × gで4°Cで10分間遠心分離されました。 得られた上清液のうち470μLの部分が新しいチューブに移され、窒素蒸発器を用いて低流量で窒素を制御した状態で蒸発して乾燥させました。200μLの70%メタノール水で再構成し、1分間渦を巻いた後、12,000 × gで4°Cで10分間遠心分離し、180μLの精製上清液をオートサンプラーバイアルに移し、液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析(LC-MS/MS)で分析しました。
その後、SXQYサンプル200μLを事前にラベル付けされた1.5 mL遠心分離機チューブに移しました。内部標準抽出液は各試料に1:1(v/v)の体積比で加えられました。混合物は15分間渦で混合され、12,000 × g で4°Cで3分間遠心分離されました。 得られた上澄液は慎重に採取され、0.22μmの微細多孔膜を通してろ過され、目に見える粒子のない透明なろ過液が得られました。ろ過液はオートサンプラーバイアルに移され、超高性能LC-MS/MS(UPLC–MS/MS)分析前に4°Cで保存されました。
内部標準ソリューションの作成
内部標準液(2-クロロL-フェニルアラニン)は、1 mLの基準標準液を70%(v/v)メタノール水1 mLに溶かして作成し、1,000 μg/mLの濃度を得ました。このストック溶液は同じ溶媒でさらに希釈され、最終濃度1 ppmの動作する内部標準溶液が得られ、これを新たに調製し4°Cで保存し、48〜72時間以内に使用しました。
UPLC–MS/MSの条件
クロマトグラフィー分離は、UPLCシステムとタンデム質量分析計を組み合わせて実施されました。分離は、40°Cに維持され、流量0.35 mL/min、注入容積4 μLのC18カラムで達成されました。移動相は、0.1%(v/v)の蟻酸(A)を含む超純水と0.1%(v/v)の蟻酸(B)を含むアセトニトリルから成りました。勾配洗脱は以下の通りに適用されました:0.0分で5%のB;線形的に増加し、2.0分で25%のB、3.0分で35%のB、5.0分で60%のB、6.0分で99%のBに増加しました。99%Bで1.5分間維持;7.6分で5%Bに戻りました。そして10.0分まで5%Bで平衡状態を保ちました。
質量分析検出は、正イオンモードおよび負イオンモードで動作する電気噴霧イオン化源を備えた高分解能質量分析計を用いて実施されました。スプレー電圧は正モードで3500V、負モードでは3200Vに設定されていました。シースガスと補助ガスはそれぞれ30単位と5単位(計器定義)に設定されていました。イオン移動チューブの温度と蒸気化器の温度はそれぞれ320°Cと300°Cで維持されました。完全なMSスキャンは、解像度35,000のm/z範囲で取得され、自動利得制御(AGC)目標は1.0×10 6。続いてデータ依存のMS/MS取得(上位10)は解像度17,500、AGC目標は2.0 × 10 m/z 、アイソレーションウィンドウは1.0–1.5 m/zでした。ステップド正規化衝突エネルギーは30、40、50が適用されました。上位10種の最も強い前駆体イオンが、動的排除時間3秒の断片化のために選ばれました。
生データ処理
生の質量分析データはProteoWizardを用いてmzML形式に変換されました。分析の信頼性を確保するため、すべての血清サンプルを均等に混合してプール品質管理(QC)サンプルを準備しました。QCサンプルは、UPLC–MS/MS分析中に5〜10個の分析サンプルごとに一定間隔で注入され、機器の安定性、保持時間の一貫性、信号再現性を監視しました。再現性はQCサンプルにおけるピーク強度の相対標準偏差に基づいて評価されました。
ピーク検出、保持時間補正、ピークアライメントはXCMSパッケージを使用して行われました。いずれかのグループ内で欠損率が50%を超える特徴は、さらなる解析から除外されました。その後、R統計ソフトウェアでQCベースのモデリングを用いた支持ベクター回帰(SVR)ベースの正規化法を用いて、解析解析全体にわたる信号ドリフト補正をピーク領域に適用しました。
代謝物同定は、修正された特徴を社内の参照標準ライブラリ(約5,000種類の化合物を含むMS1およびMS2スペクトルデータを含む、独自で公開されていない)や、ヒトメタボロームデータベース(HMDB)、メタボライト・タンデム質量分析データベース(METLIN)、MassBank、グローバルナチュラルプロダクツ社会分子ネットワーキング(GNPS)などの公開スペクトルデータベースと照合して実施されました。 正確な質量マッチング、保持時間整列、MS/MSスペクトル類似性に基づいています。質量マッチングは、前駆体(MS1)およびフラグメントイオン(MS2)に対して±25 ppmの許容範囲を用いて行われ、保持時間許容は±6秒でした。ライブラリ探索では、前駆体イオン(Q1)に対して±25 ppm、MS/MS断片に対して許容度が±50 ppm、最低MS/MSマッチングスコアは0.3でした。非標的識別には包括的識別スコア0.5以上の代謝物のみが保持されました。最終スコアは、断片(0.1)、順(0.3)、逆(0.6)の一致スコアの加重合計として算出されました。正イオン化モードと負イオン化モードで取得されたデータは、化合物レベルで統合されました。重複注釈の場合は、識別信頼度が最も高くスコアが最も高いエントリーが選ばれました。最終的な注釈は代謝物注釈ファイルにまとめられました。
吸収化合物の識別基準
吸収プロトタイプ成分は、SXQY抽出物およびSXQY処理群で検出され、保持時間が一致し許容範囲±0.1分以内の化合物と定義されました。さらに、これらの化合物はSXQY処理群で車両対照群の少なくとも2倍以上のピーク面積を示すか、車両対照群からは存在しないことが求められました。
吸収代謝物は異なる基準を用いて同定されました。これらの化合物はSXQY抽出物では検出されませんでしたが、SXQY処理群では検出されていました。質量分析の特徴は、ヒドロキシル化(Δm/z = +15.9949 Da)や脱メチル化(Δm/z = −14.0157 Da)などの特徴的な代謝変換と整合する必要がありました。さらに、SXQY処理群のピーク面積は、信号ドリフト補正後の正規化されたピーク面積に基づき、車両対照群のピーク面積の少なくとも2倍以上である必要があり、そうでなければ対応する信号は車両制御サンプルでは検出不可能でなければなりませんでした。
吸収化合物関連遺伝子の回収
血液入力成分は、伝統中国医学システム薬理学データベース・分析プラットフォーム(TCMSP;https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.ph;2026年1月アクセス)で調査されました。TCMSPで記録された化合物は、経口バイオ利用能≥30%、薬剤類似性0.18≥確立された薬理動態閾値に基づき候補生体活性成分としてスクリーニングされました。保持化合物に対応する推定標的はその後取得され、すべての標的識別子はUniProtデータベース22を用いて公式の遺伝子記号に標準化されました。
疾患関連標的および交差遺伝子の回収
HF関連遺伝子はGeneCardsデータベース(https://www.genecards.org/ 年、2026年1月アクセス)から「心不全」という検索語を用いて収集され、関連スコア≥10の遺伝子が選択され、さらなる解析が行われました。HF関連標的は、その後、魏生新プラットフォーム(https://www.bioinformatics.com.cn;2026年1月アクセス)を用いてTCMSPから同定された化合物関連標的と交差しました。重なり合う遺伝子は交差標的として定義され、その後のタンパク質間相互作用(PPI)ネットワーク構築および機能的濃縮解析に用いられました。
ネットワーク構築と機能的濃縮解析
特定されたターゲットのPPI分析は、STRINGデータベース(http://cn.string-db.org/ 年、2026年1月アクセス)23を用いて、種をホモ・サピエンスに設定し、信頼度スコア閾値を≥0.7に設定して実施されました。相互作用データはネットワーク可視化用のCytoscape可視化ツールにインポートされました。トポロジカル解析は可視化ツール内のNetworkAnalyzerプラグインを使用して行われ、ハブ遺伝子はCytoHubbaプラグイン24,25で同定されました。遺伝子オントロジー(GO)の濃縮解析は、生物学的プロセス(BP)、細胞成分(CC)、分子機能(MF)カテゴリーを含む交差標的に対して実施されました。P値が0.05視化のために選ばれました。交差標的はさらに、統計ソフトウェア内のclusterProfilerパッケージを用いて京都遺伝子・ゲノム百科事典(KEGG)の経路富裕解析も受けました。P値が0.05<経路は統計的に有意とみなされ、上位20の富集経路を可視化のために選定しました。これらの経路はその後、標的-経路相互作用ネットワークの構築に用いられた。
統計解析
データは平均標準差±提示されます。データ分布の正規性はシャピロ–ウィルク検定を用いて評価し、分散の均質性は解析前にレヴェーン検定またはブラウン・フォーサイス検定で評価されました。グループ間の統計比較は分散の一方向解析を用いて行われ、その後TukeyがGraphPad Prismを用いた事後検定を実施しました。P < 0.05は統計的に有意とされました。
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結果
経胸心エコー
心エコー解析により、TACラットにおいて顕著な心臓再構築と機能障害が認められました(図1)。Sham対照群と比較して、TACはLVIDdおよびLVPWdを有意に増加させ、LVEFは著しく減少しました。特筆すべきは、SXQY投与によりこれらの病理学的変化が部分的に逆転し、TAC群と比較してLVIDdおよびLVPWdの有意な減少と、LVEFの同時改善が反映されていることです。
図1。グループ間の心臓機能パラメータの比較(n = 6)。...
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ディスカッション
SXQYは20年以上にわたり臨床で広く使用されており、さまざまな心血管疾患の治療において有効性を示しています。近年では、駆出率が低下し、軽度に射出率が低下する心不全患者にも使用が拡大されています。本研究では、HFの病理学的変化を模倣するためにTAC手術によってラットモデルが確立され、その効果を調べるために一部のラットにSXQYを投与しました。経胸腔心エコー、HE染色、マソン染色を用いてモデルの確立に成功したか、またSXQYが効果を及ぼすかを評価しました。TAC誘発性HFはLVIDdおよびLVPWdを有意に増加させ、LVEFを減少させ、心機能障害を示しました。SXQY治療はこれらの変化を部分的に逆転させ、LVIDdおよびLVPWdを減少させ、TAC群と比較してLVEFを改善しました。組織学的解析では、心筋細胞肥大、心筋構造の乱れ、TAC群の広範な炎症、さらにマッソンのトリクロム染色に顕著な線維化が認められました。SXQY治療はこれらの病理的変化を緩和し、心筋細胞のより組織的な整列を促進し、炎症を減少させ、コラーゲン沈着および...
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開示事項
著者らは本研究に利益相反はないと報告しています。
謝辞
動物ケアや手術手続きのご支援をいただいた中国・日本動物実験センター友愛病院に感謝申し上げます。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 2-クロロL-フェニルアラニン | アラジン | C105993-1g | 内部規格;≥98% |
| アセトニトリル(LC-MSグレード) | アラジン | A120771-1L | 抽出溶媒 |
| 酢酸 | ソーラービオ | G1340 | マッソン染色;4度に予備冷却;C |
| オートサンプラーバイアル | アジレント | 5190-9590 | LC-MS/MS試料ローディング用 |
| ブプレノルフィン | セリリアント | B-044S | 鎮痛剤 |
| C18列(1.8 & μ;m、2.1 mm &100mm) | 水域 | 176001125 | ACQUITY Premier HSS T3コラム |
| 毛細管、無菌 | フィッシャーブランド | 22-362-566 | 後眼窩血液採取 |
| 遠心分離機(冷蔵) | 久保田 | N61196-F000 | 血清およびサンプル処理のために |
| clusterProfiler パッケージ | バイオコンダクター | — | KEGG濃縮解析用のRパッケージ;v4.0.2 |
| 湾曲した鉗子、無菌 | HL-SQX | HL-JP | 大動脈弓操作 |
| Cytoscapeソフトウェア | NHGRI | NIH NHGRI U24 HG012107 | バージョン 6.4.1 |
| 専用イメージングプラットフォーム | フジフイルム・ビジュアルソニックス | VisualSonics Vevo 1100 超音波イメージングシステム | 心エコー検査中の動物の位置 |
| 蒸留水 | 該当なし | 該当なし | 煮込み準備と車両制御 |
| 電気加熱マントル | ミデ | WK2102 | 煎煮の煮込み |
| 気管内チューブ | CWE Inc.、アメリカ | SAR-1000 | 気管挿管;本研究で使用された気管内チューブは人工呼吸器の構成に統合されており、独立した装置ではありません |
| エタノール(絶対量) | 北京一力精細化学有限公司 | 64-17-5 | 脱水と滅菌 |
| 蟻酸 | アラジン | O930702 | 移動位相加法 |
| ガーゼ | ソーラービオ | YA0720 | 煮込みろ過;200–300 & mu;mの孔径 |
| GeneCardsデータベース | GeneCards(遺伝子カード) | — | 疾患関連標的回収;2026年1月アクセス |
| GNPSデータベース | カリフォルニア大学サンディエゴ校 | — | スペクトルデータベース;バージョン1.3.16、データは2025年12月にアーカイブされました |
| GraphPad Prismソフトウェア | GraphPadソフトウェア | — | バージョン10.1.2;SCR_002798 |
| 温熱パッド(サーモスタティック) | 物理温度 | HP-4M | 維持速度は37度と、C |
| ヘマトキシリンと嗜酸(H&E) 染色キット | ソーラービオ | G1120 | 組織学的染色 |
| 高周波トランスデューサ | ビジュアルソニックス | ヴェーヴォF2 | 18–40 MHz |
| 高分解能質量分析計 | サーモフィッシャー・サイエンティフィック | Q エクスアクティブ | Q アクティブHF-X |
| 高分解能小動物超音波システム | フジフイルム・ビジュアルソニックス | VisualSonics Vevo 1100 超音波イメージングシステム | ヴェヴォ2100 |
| HMDBデータベース | ウィシャート研究グループ/アルバータ大学メタボロミクスイノベーションセンター | — | スペクトルデータベース;HMDBの現行バージョン5.0;リリース5.0;2022年1月 |
| 社内リファレンス標準ライブラリ | メトウェア | — | 社内リファレンス標準ライブラリの構成:ライブラリには合計5,000種類の化合物が含まれており、MS1(前駆体)情報とMS2(断片化)スペクトルデータの両方を含みます。利用可能性声明:図書館のデータ形式は.txtです。保存状況:データベースは会社の内部サーバーに保存されます。アクセス権限:この自作標準ライブラリは、同社独自の社内スペクトルライブラリです。これは、同社の管理された分析ワークフロー内での代謝物の同定、結果検証、品質トレーサビリティの確保にのみ使用されます。この図書館は一般公開されてダウンロードできません。クライアントはこのライブラリに基づいて生成される注釈結果、ヒット情報、必要なフィールド記述を入手できます。 |
| イソフルラン | シグマ・オルドリッチ | 792632 | 吸入麻酔 |
| 液体クロマトグラフィーシステム(UPLC) | SCIEX | ExionLC AD | ExionLC AD |
| MassBankデータベース | MassBankコンソーシアム;日本質量分析学会/マスバンク・ヨーロッパ | — | スペクトルデータベース;バージョン2024.06;データは2025年12月にアーカイブされました |
| マッソンSトリクロームステインキット | ソーラービオ | G1340 | 組織学的染色 |
| 膜フィルター(0.22 & μ;m) | ビヨタイム | FF362 | ポリエーテルスルフォン(PES) |
| METLINデータベース | スクリップス研究所/シウズダック研究所 | リッド:SCR_010500 | スペクトルデータベース;このデータベースは固定された年間バージョン番号を提供していません。2023年にダウンロードされたデータ |
| メタノール(LC-MSグレード) | 北京一力精細化学有限公司 | 67-56-1 | 抽出溶媒 |
| マイクロ遠心分離機チューブ(1.5 mL) | コーニング生命科学(武江)有限公司 | MCT-150-C | サンプル処理 |
| ミクロトーム | ライカ | DSC1 | 組織切片 |
| ニュートラル樹脂 | ソーラービオ | G8590 | スライドマウント |
| 窒素蒸発器/ガス源 | 組織化 | N-EVAP | 試料乾燥 |
| 眼科軟膏 | アラジン | 08-03-8009 | 麻酔中の眼科保護 |
| パラフィン | ソーラービオ | YA0010 | 組織埋め込み |
| パラホルムアルデヒド(4%) | ソーラービオ | P1110 | 組織固定 |
| リン酸塩緩衝塩水 | デュ・ユー・ユー | DYP1021 | ティッシュウォッシュ |
| ホスホモリブ酸 | ソーラービオ | G1340 | マッソン染色 |
| ポビドン&ンダッシュ;ヨウ素 | ソーラービオ | IP3800 | 外科的消毒 |
| ProteoWizardソフトウェア | プロテオウィザード財団 | — | バージョン 3.0.19254 |
| Rソフトウェア | Rファウンデーション | — | バージョン 4.2.2 |
| ロータリーエバポレーター | 青島景城計器有限公司 | JC-2LZF | 減圧下での煮込み濃度 |
| シルク縫合(2勝0敗) | 富蘭 | NL30RH26A-76 | 大動脈閉鎖 |
| 小動物用人工呼吸器 | CWE Inc.、アメリカ | SAR-1000 | 人工呼吸 |
| スプラグ&アンドダッシュ;ドーリーラット(オス、8週齢) | SPFバイオ株式会社 | — | RGD_70508;許可証番号はSCXK(jing)2024-0001 |
| STRINGデータベース | STRINGコンソーシアム | — | タンパク質相互作用解析;2026年1月アクセス |
| サポートベクター回帰正規化パッケージ/スクリプト | メットノーマライザー | — | 信号ドリフト補正;v1.3.02 |
| TCMSPデータベース | TCMSP | — | 化合物およびターゲット回収;2026年1月アクセス |
| UniProtデータベース | UniProtコンソーシアム | — | 遺伝子記号の標準化 |
| 超音波ジェル | マグナフラックス | 25-912 | 心エコー |
| 超純水 | ラボで準備 | — | 移動相溶媒 |
| ボルテックスミキサー | 雅林 | VM-ST | サンプルミキシング |
| 水浴 | ジュラボ | PURA22 | 45度に浮いているセクション;C |
| 魏生新プラットフォーム | 魏生心 | — | 目標交差点解析;2026年1月アクセス |
| XCMSソフトウェア | Rファウンデーション | — | バージョン 3.16.1 |
| キシレン | アラジン | X775162 | 脱パラフィン化 |