河源地域における男性ヒト乳頭腫ウイルス感染の解析および遺伝子型解析

サマリー

本研究は、河源人民病院の外来部門を訪れ、ヒト乳頭瘤ウイルス(HPV)核酸検査を受けた男性患者を分析し、地域におけるHPV感染の疫学的特徴と遺伝子型分布に関する予備的な知見を提供しました。これらの発見は、HPV関連疾患の予防と制御を支持しています。

要約

本研究は、河源の男性外来患者におけるヒトパピローマウイルス(HPV)の有病率と遺伝子型分布を調査し、年齢層別の感染率を比較して、地域での予防および治療戦略の策定を図ることを目的としました。2021年から2024年の間に河源人民病院でHPV検査を受けた男性1,559人が登録され、初回診察の結果のみが対象となりました。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)-逆ドットブロットハイブリダイゼーションにより23のHPV遺伝子型が同定されました。遡及的な横断解析を実施し、HPVの全体的な有病率、年齢別感染率、感染パターン、サブタイプ分布、ワクチン関連遺伝子型のカバレッジを評価しました。統計解析はSPSSバージョン23.0を用いて実施されました。カウントデータは数値とパーセンテージで要約され、グループ差はカイ二乗検定を用いて評価され、統計的 有意< 0.05と定義されました。全体のHPV感染率は45.3%(707/1,559)でした。年齢層別(≤24歳、25–34歳、35–44歳、45–54歳、55–64歳、≥65歳)の感染率はそれぞれ42.8%、43.1%、45.8%、48.2%、68.3%、46.4%でした。単一型感染が最も多いパターンで、陽性例の57.0%を占めていました。最も頻繁に検出された高リスク遺伝子型は5つで、HPV52(9.05%)、16個(5.90%)、53個(5.09%)、51個(5.01%)、59個(4.93%)であり、低リスク遺伝子型が優勢なのはHPV6(21.24%)、11個(9.85%)、43個(5.17%)でした。二価、四価、九価ワクチンの理論的接合率はそれぞれ8.65%、39.74%、55.41%でした。河源の男性外来患者におけるHPV感染の有病率は比較的高く、単一型感染が優勢でした。最も一般的な高リスク遺伝子型はHPV52、16、53、51、59であり、主要な低リスク遺伝子型はHPV6、11、43でした。最も高い感染率は55〜64歳の年齢層で観察されました。これらの発見は、地域特有のデータを提供し、この集団の男性向けにカスタマイズされたHPV予防およびワクチン接種戦略の開発を支援する可能性があります。

概要

ヒトパピローマウイルス(HPV)は、主に性的接触を通じて感染し、唯一の宿主は人間であるDNAウイルスです。HPVの有病率は世界中の男女で似ており、男性で3.5%から45%、女性で2%から44%の範囲^です。性的に活動する男女の約80%が生涯で少なくとも一度はウイルスに感染します。感染経路には性的接触だけでなく、皮膚表面や粘膜との摩擦や接触、母子間の垂直伝播なども含まれ^ます。これまでに200以上の異なるHPV遺伝子型が記載されており、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、肛門がん、頭頸部がん、陰茎がんの発症に関連する高リスクと、性器いぼまたは尖高頭がんに関連する低リスクと分類^{されています。}ほとんどの場合、感染は12〜24ヶ月以内に免疫系によって完全に治癒され、臨床的な合併症はありません。しかし、免疫系がウイルスを排除できなければ、持続的な感染が進行し、腫瘍性過可塑性病変の発症の基盤を築^きます。具体的には、持続性の高リスクヒトパピローマウイルス(HR-HPV)感染は、扁平上皮内病変(SIL)および陰茎上皮内腫瘍(PeiN)の発症と関連しています。これらの病変はどちらも女性の子宮頸がん^{および男性の}陰茎がんの前がん状態^です。さらに、経口避妊薬の長期使用、喫煙、免疫不全、または同時進行する性感染症などの生活習慣要因も腫瘍増殖を促進する可能性があります⁷。

現在、中国における女性におけるHPV感染の有病率、リスク要因、予防戦略に関する多くの研究があり、女性グループにおけるHPVワクチンの認知度と接種率も大幅に向上しています。HPVは性的パートナー間で容易に感染し、多くの場合、配偶者間で複数の未検出の感染が起こること^{があります。}中国の最新の臨床ガイドラインでは、9歳から26歳の女性、特に9歳から14歳の女子に重点を置いてHPVワクチン接種を優先しています。さらに、27歳から45歳の女性、9歳から26歳の男性にワクチン接種を推奨し、男女間の共同予防努力を推進^{しています。}

男性のHPV感染はHPV感染の原因となり、女性の性的パートナーにおける繰り返し感染を引き起こす可能性があります¹⁰。さらに、HPV感染は男性の一般的ないぼ、性器いぼ、性器がん、口咽頭がんおよび肛門がんなどの疾患を引き起こすこと^{があり、男性}不妊とも関連している可能性があります^。しかし、中国の男性におけるHPV感染に関する研究は比較的少ないです。さらに、中国は広大な領土と多くの民族を有しています。結婚や生活習慣の概念は地域によって異なります。HPV感染には地域、人種、多様性も存在します¹³。他の研究では、男性におけるHPVワクチン接種が性的パートナー間の子宮頸部病変に対して有意な予防効果を示すことが示されています¹⁴。男性のHPV感染パターンと遺伝子型プロファイルを包括的に理解することで、公衆衛生システムを強化し、男女両方の患者の管理と治療にかかるコストを削減できます。報告によると、男性のHPV関連疾患はイタリア全体の医療費により大きな経済的負担をもたらすと^{されています。}

したがって、本研究は、2021年から2024年にかけて河源地域で検査を受けた男性外来患者の有病率、年齢別陽性率、遺伝子型頻度、感染パターン分布、ワクチン接種カバレッジを理解し、地域における男性HPV感染の早期スクリーニング、診断、予防、治療の重要な基盤を提供することを目指しています。

プロトコル

本研究は河源人民病院医学研究倫理委員会(承認番号:YXYJLL-SFKJ202461によって審査・承認されました。承認日:2024年5月15日)。倫理証明書は補足ファイルとしてアップロードされました。未成年者の患者、親、または保護者は登録時に「私の臨床生物学的サンプルおよびデータは、特定可能な個人情報を削除した後、医学研究倫理委員会が承認した科学研究、技術革新、臨床研究に使用されることに同意します」と署名しており、この分析は患者に追加のリスクをもたらさず、関連規則に準拠しています。本研究で使用されるすべての材料は 材料表に記載されています。

教科

2021年1月から2024年12月の間に河源人民病院の外来部門を訪問し、HPV検査を受けた合計1,559人の男性患者が研究対象となりました。被験者は2歳から80歳まででした(研究対象は、2021年から2024年の間にこの医療機関での外来受診で有効なHPV核酸検査結果を持つすべての男性患者で構成されています。主な目的は、地域の男性患者のHPV検査および感染パターンを包括的に把握することです。さらに、HPV感染の経路には性的活動だけでなく、皮膚表面や粘膜との摩擦や接触、さらには母子への垂直伝播も含まれます。したがって、年齢制限は課されず、平均年齢は34.2歳±10.7歳でした。

方法

本研究は、当病院の外来部門を訪れHPV検査を受けたすべての男性患者を分析するために、後ろ向き横断面設計を用いています。繰り返し検査を受けた者については、初期のサンプリング結果のみが含まれていました。

標本コレクション

角質除去された細胞サンプルは、訓練を受けた臨床医が無菌の特殊なサンプリングブラシを用いて採取しました。採取部位は陰茎の背側および腹側、内外冠状溝、亀頭、遠位尿道、および目に見えるベルク性病変を含み、部位の選択は個々の患者の所見に基づいて決定されました。採取後、ブラシヘッドは専用のサンプル保存溶液で割りました。標本保存条件:サンプリング後、標本は直ちに2〜8°Cの冷蔵庫に保管され、検査は3日以内に完了しました。

DNA抽出

各試料を振動させ混合した後、200μLを連続して核酸抽出または精製試薬に加えました。DNA抽出は、SP96完全自動核酸抽出装置の抽出試薬を用いた磁気ビーズ技術を用いて行われました。

HPV検出

HPV-DNA検査は、PCRを用いた in vitro 増幅とDNA逆ドットブロットハイブリダイゼーションを組み合わせたヒトパピローマウイルス遺伝子型(タイプ23)検出キットを用いて行われました。HPVの遺伝的特徴に基づく特定のプライマーを設計し、23のHPV遺伝子型からの標的断片を増幅しました。増幅生成物は膜に固定された型プローブとハイブリダイズされ、17個のHR-HPV(HPV16,51,52,53,18,58,59,31,33,45,56,66,35,39,68,73,82)および6個のLR-HPV(HPV6,11,11,42,43,81,83)が含まれていました。ハイブリッド化シグナルの有無に基づき、これらのHPV遺伝子型の感染状態が決定されました。特定の実験手順では、ろ過済みピペットの先端を使って抽出した5μLのDNAをPCR反応混合物に加え、総体積を25μLにすることでした。その後、PCR増幅が行われました。増幅後、すべての増幅生成物は膜ストリップを含む等温ハイブリダイザーに加えられ、比色ハイブリダイゼーションが行われました。カラー現像が完了すると、結果を解釈できます。

統計解析

統計解析にはSPSS 23.0ソフトウェアが使用されました。カウントデータは症例数(n)とパーセンテージ(%)で表されました。グループ間の比較はχ2検定で実施されました。 p < 0.05は統計的に有意とされました。23のHPV遺伝子型のうち、任意の遺伝子型で陽性がHPV感染を示す場合、1つの遺伝子型のみで陽性の場合は単一の感染を示します。また、2つ以上の遺伝子型で陽性が出た場合は、複数回感染を示しています。複数感染は、共存遺伝子型の数に基づいて、二重感染、三重感染、四重感染、五重感染、六重感染、さらにはそれ以上に分類されます。」「総検出頻度に対する比率」は、複数の感染を持つ患者が複数の遺伝子型を寄与するため、遺伝子型検出数(1,238)を分母として算出されました。

結果

研究対象集団におけるHPV陽性率の全体的な有病率

1559人の男性外来患者のうち、707人がHPV DNA陽性で、陽性率は45.3%でした。年間HPV感染率は、2021年(44.8%、100/223)、2022年(45.5%、231/508)、2023年(45.3%、182/402)、2024年(45.5%、194/426)でした。HPV感染率には年ごとに有意な差は認められませんでした(χ² = 0.033、 p = 0.998)( 表1参照)。2023年を除き、その年はHPV83が検出されませんでしたが、残りの3年間で検出キットは23種類を検出しました。優性遺伝子型は毎年まったく同じではありませんでしたが、HPV6、11、52の3つの遺伝子型が4年間の感染率で上位3位にランクインしました。

異なる年齢層におけるHPV...

ディスカッション

HPVは男女に問わず最も一般的な性感染症です。高リスク感染症は、女性の子宮頸がん、外陰がん、膣がん、男性の陰茎、肛門、口咽頭がんと密接に関連しています。持続的な低リスクタイプは、ほとんどの肛門性器いぼや呼吸性乳頭腫症を引き起こす可能性があります¹⁶。男性におけるHPV感染に関連する疾患の解析では、男性陰茎、陰茎頭/冠状動脈溝、精液、陰嚢、肛門周囲、肛門領域におけるHPVの有病率が高く、50%から70%の範囲で示されました。また、アメリカ合衆国では頭頸部扁平上皮癌(HNSCC)の症例の半数がHR-HPV感染によって引き起こされていることも示^{されました。}さらに、HPVは性的接触や男女間の親密な接触を通じて感染することがあります。人口中に無症状の男性ウイルス保因者が多いことは、HPVに感染した女性にとって感染源の可能性があることになります。したがって、男性集団におけるHPV感染の研究は、男女両方のHPV感染の予防、診断、治療において非常に重要です。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
マイコプラズマ肺炎核酸および薬剤耐性遺伝子検出	広州大安ジーン株式会社	Stream SP96
フィルターチップ	コーリング・ライフサイエンス株式会社	29822001	0–10 µL
フィルターチップ	コーリング・ライフサイエンス株式会社	05623001	5–300 µL
ヒトパピローマウイルス遺伝子型判定検査キット（タイプ23）	深センヤンネンバイオテクノロジー株式会社	20193401918
核酸抽出試薬（磁気ビーズ法）	広州大安ジーン株式会社	20170583
PCR増幅機器	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	ABI Veriti DX 96
PCRハイブリダイザー	深センヤンネンバイオテクノロジー株式会社	YN-H16
サンプリングブラシ	深センヤンネンバイオテクノロジー株式会社
サンプル保存溶液	深センヤンネンバイオテクノロジー株式会社