ビタミンC補助フェントン酸化は、体外でヘリコバクター・ピロリの酸化殺菌を改善する

サマリー

本研究は、in vitro 条件下でフェントン反応の速度論的挙動をどのように調節するかを検証します。化学染料プローブおよび細菌アッセイは、制御されたビタミンC投与が反応の酸化挙動を変化させ、簡略モデルシステムにおいて ヘリコバクター・ピロリ に対する抗菌活性の増加と関連していることを示しています。

要約

ヘリコバクター・ピロリ感染症は依然として世界的な健康上の大きな負担であり、抗生物質耐性の増加は代替的な抗菌戦略の必要性を強調しています。本研究は、定義された酸性のin vitro条件下で、ビタミンCの投与がフェントン酸化を調整し、H. pyloriに対する酸化抗菌活性を高める可能性があるかどうかを検証しました。酸化活性は、酸オレンジ7脱色を間接的な化学的読み取りとして、テルフタール酸蛍光アッセイを用いて、ビタミンCを補完した鉄・過酸化物反応におけるヒドロキシルラジカル関連生成の相対指標として評価しました。抗菌効果は標準化されたH. pyloriを曝露することで評価されました尿素含有生理食塩水中のpH3での懸濁液を過酸化水素および鉄にかけて、段階的にビタミンC補給の有無にかかわらず、その後コロニー形成単位の列挙を行います。ビタミンC補給は酸化指標を変化させ、従来のフェントン化学薬と比べて生存可能な細菌の減少と関連していました。デフェロキサミンとチオウ尿を用いた救助実験は抗菌活性を減弱し、抗菌活性が鉄媒介およびラジカル関連の酸化過程と関連しているという仮説を支持しました。生死蛍光染色および走査型電子顕微鏡は、コロニー形成単位(CFU)列挙結果と一致する質的な視覚観察を提供しました。これらの発見は、管理されたビタミンCの投与がフェントンベースの酸化反応を調節し、単純化された酸性in vitroモデルにおいてH. pyloriに対する抗菌活性を高めることを示しています。

概要

ヘリコバクター属に属するグラム陰性菌で螺旋状の形をしたヘリコバクテル菌は、人口健康研究により地理的地域、性別、年齢を超えて感染の有病率が高く、世界的に約50%の有病率であることが示されています^1。国際がん研究機関(IARC)は、H. pyloriをグループ1発がん性物質に分類し、胃がんおよび粘膜関連リンパ組織(MALT)リンパ腫との強い関連を強調しています。現在、H. pylori感染の臨床管理は主に薬理学的治療法に依存しています。最も広く研究されている薬剤には、胃酸分泌を抑制するプロトンポンプ阻害剤(PPI)、抗生物質の有効性を高めるビスマス化合物、また、アモキシシリン、クラリスロマイシン、メトロニダゾールなどの抗生物質も使用しました。しかし、単独療法では完全な根絶には不十分であることが示されており、トリプルセラピーと呼ばれる組み合わせ療法が広く用いられるようになっています。このアプローチは通常、PPI、クラリスロマイシン、アモキシシリンまたはメトロニダゾールのいずれかを約^{2週間投与}します。抗生物質耐性ヘリコバリ菌株の増加に伴い、三重療法の有効性は著しく低下し、PPI、ビスマス、2種類の抗生物質を組み合わせた四重療法の採用が促されました^。それでもなお、これらのレジメンは依然として抗生物質に依存しており、抗生物質耐性は^{臨床管理における}大きな課題^{となっています。}その結果、抗生物質に依存しない代替的な抗菌戦略の探求が注目を集めています。

直接的な病理的影響に加え、ピロリ菌感染は胃微量栄養素の恒常性の変化とも関連しています。臨床および疫学的研究では、^{感染者の胃}液および血清中のビタミンC濃度が低下することが報告されており、これは粘膜の炎症、分泌物障害、または^{酸化消費の増加}に関連している^{可能性があります。}同時に、H. pylori感染は胃酸の低下、食事中の鉄吸収障害、^{利用可能な鉄を}めぐる細菌間の競争など、複数のメカニズムを通じて鉄欠乏と関連しています。これらの観察は、H. pylori感染に伴う複雑な生化学的環境を浮き彫りにし、酸性胃の状態における酸化還元および鉄関連プロセスの重要性を強調しています。

活性酸素種(ROS)は、これらの種の酸化特性から抗菌研究で大きな関心を集めています。ROSとは、酸素の部分還元時に形成される化学反応性分子の一群を指し、超酸化物陰イオン(O₂•⁻)、過酸化水素(H₂O₂)、一重子酸素(¹O₂)、ヒドロキシルラジカル(•OH)などがあります。生物系において、ROSは正常な生理代謝に広く関与し、多様な細胞調節活動に不可欠です¹¹。特に、過剰なROSが脂質過酸化を通じて細菌の細胞膜を破壊し、膜構造や機能に変化をもたらし、最終的に細菌の不活化を引き起こすことが多くの研究で示されています¹²。したがって、ROSベースの抗菌アプローチは、H. pyloriに対する非抗生物質的抗菌効果の研究の潜在的な手段として注目を集め^{ています。}さまざまなROS生成法の中で、フェントン反応はその非常に効率的なラジカル生成で大きな注目を集めています。フェントン反応は高度な酸化プロセス¹⁷であり、鉄イオン(Fe²⁺)が酸性条件下でH₂O₂と反応してヒドロキシルラジカル(•OH)を生成します。これは強い酸化能力を持ち、細胞内生体分子を酸化できます。

Fe²⁺ +H→Fe³⁺+•OH+OH^-

Fe³⁺+ H→Fe²⁺+•OOH+ H⁺

H₂O→OH+•OOH+H₂O

具体的には、pHが約2.8〜4.5の場合、H₂O₂はFe²⁺によって触媒分解を受け、•OHを生成し、Fe²⁺はFe³⁺に酸化されます。Fe³⁺はその後H₂O₂と反応してFe²⁺を再生し、Fe²⁺/Fe³⁺の酸化還元サイクルを確立してROS^の連続生成を維持します。しかし、Fe³⁺からFe²⁺への還元は比較的遅く、速度制限段階となり、その結果フェントン反応の全体的な効率が低下します。研究によると、フェントン反応系に適切な還元剤を導入することでFe²⁺がFe²⁺に還元され、ROS生成が促進されることが示されています。ビタミンCは状況依存的なレドックスの役割を持っています。鉄を含むシステムでは、Fe²⁺をFe²⁺に還元させることを促進し、フェントンサイクルを支えますが、より高い濃度や異なる反応条件下では、抗酸化剤やラジカルスカ^{ベンジャーとしても}機能することもあります。

この背景に基づき、本研究はビタミンC補助フェントン反応系を、定義された酸性in vitro条件下での酸化活性を化学的に調整可能な方法として調査します^20,21。ビタミンCはFe²⁺の再生を促進し、フェントン反応の効果的な酸化挙動を変化させる還元剤として用いられました。ここで用いられた実験システムは、単純化された酸性生理食塩水尿素モデルであり、粘液、緩衝成分、宿主細胞、免疫因子、多様な有機基質を含む生理的な胃の微小環境を完全に再現することを意図していませんでした。この管理モデルでは、酸化活性を化学的読み取りを用いて特徴づけられ、細菌の表現型応答と並行して評価され、H. pyloriに対するROS関連抗菌効果の実験的基盤をVitroで探査しました。

プロトコル

倫理声明
この研究はin vitro 細菌試験であり、ヒト参加者、動物被験者、患者由来の物質は含まれていません。したがって、機関審査委員会の承認や動物倫理の承認は必要ありませんでした。

ビタミンC補助フェントン系におけるAO7分解の評価
ビタミンCがフェントン反応の観察可能な酸化挙動に与える影響を評価するために、酸化活性の間接的な化学的読み取りとして酸オレンジ7(AO7)分解が用いられました。このアッセイは、個々の活性酸素種を特異的に定量化するものではありません。AO7溶液100mLを5 mg/Lで準備し、溶液をpH3に調整しました。最終濃度2.2 mMおよび0.055 mMにH₂O₂とFeSO₄を加えました。ビタミンCは反応開始時に単一ボーラスで添加するか、3段階の投与方式で加えられます。用量反応実験では、Fe₄が0.055 mMで使用した場合、Vc:^{Fe 2/モ}ル比が0、0.12、0.24、0.48、2、4、6、8の各濃度に対応し、最終ビタミンC濃度は0、0.0066、0.0132、0.0264、0.110、0.220、0.330、0.440mMに相当します。3段階添加条件では、同じビタミンC量を3つの等しいアリコートに分け、反応開始後3分、5分、7分にそれぞれ1つずつ追加しました。例えば、Vc:Fe²⁺比が0.48の場合、1アリコートあたり0.0088 mMのビタミンCを加え、最終的な総濃度は0.0264 mMとなります。

反応溶液を暗闇で10分間連続攪拌し、温度を30°C以下に保ちました。 反応の前後に2mLのサンプルを採取しました。UV-Vis分光光度計を用いて483 nmの吸収を測定し、式1を用いてAO7の劣化率を計算しました。

劣化率(%) = [(A₀ − A₁) / A₀] × 100% (1)

ここで、A₀は反応前の試料の吸収度を表し、A₁は反応後の試料の吸収度を表します。

TAプローブを用いたOH関連蛍光信号の評価
抗菌実験で用いられたのと同じ酸性in vitro 条件下でヒドロキシルラジカル関連蛍光シグナルを評価するため、蛍光プローブとしてジナトリウムテレフタレート(TA、1 mM)を用いた細胞フリー化学系が確立されました。このアッセイは•OH関連生成物形成の相対指標として用いられ、ヒドロキシルラジカル生成の絶対的な定量とは解釈されませんでした。7つのグループが含まれました:(1) ブランク(反応バッファーに1 mM TA)、(2) H₂O₂単独、(3) Fe²⁺単独、(4) Vc単独(段階的付加)、(5) 従来型フェントン(Fe²⁺ + H₂O₂)、(6) ビタミンC補助フェントンとボーラスVc追加(Fe²⁺ + H₂O₂ + Vc、ボーラス)、および(7) Vc補助フェントンによる段階的Vc付加(^Fe2)⁺ + H₂₂ + Vc、段階的です)。段階的加算条件では、反応開始から3分、5分、7分ごとに同じアリコートでVcが導入され、一方でボーラス条件では単一の添加と同じ量のVcが投与されました。

アリコットは10分間の反応期間で採取され、直ちにNaOHでアルカリ化されてさらなるラジカル反応を消滅し蛍光を安定化し、測定前に4°Cで保存されました。TA由来産物の蛍光強度はマイクロプレートリーダー(Ex/Em: 315/425 nm)を用いて測定されました。ラジカル生成は、空白引き算後の蛍光強度として表され、ラジカル生成の相対指標として用いられました。少なくとも3つの独立した実験が実施され、データは時間経過プロファイルと10分のエンドポイント比較として提示されました。

コロニーカウントによる抗菌性能の評価
H. pylori 株は、25%グリセロールを含む脳心臓注入(BHI)ブロスに−80°Cで保存されました。主コロニーカウントアッセイ、救助アッセイ、マトリックス干渉アッセイ、ライブ/デッド蛍光染色、走査型電子顕微鏡分析で使用された主な株は H. pylori G27でした。各実験の前に、細菌をコロンビア産天のプレートにストライクし、37°Cの微気性条件下で3日間培養しました。条件は5%のO₂、10%のCO₂、85%のN₂²²でした。

一次株におけるコロニーカウントアッセイ
異なる処理条件下での抗菌活性を評価するために、植株形成単位(CFU)の列挙法を用いました。以下のグループを含みました:未治療対照群、H₂O₂単独、ビタミンC単独、従来型フェントン反応、ビタミンC補助フェントン反応。元の実験にFe²⁺単独基が含まれていなかった場合、一次アッセイを鉄のみの効果とフェントン反応介在の酸化効果を完全に分離したものと解釈するのは避けてください。培養した H. pylori を採取し、生理用生理食塩水に再懸濁させます。600 nm(OD₆₀₀)で光学密度を0.5に調整し、懸濁液をpH3に調整した3 mM尿素を含む生理用生理食塩水に移管しました。割り当てられた処理群に応じてH₂O₂、FeSO₄、ビタミンCを追加しました。最終濃度は2.2 mM H₂O₂および0.055 mM FeSO₄でした。ビタミンC補助フェントン治療では、ビタミンCを3分、5分、7分に3つの等分ずつ追加し、最終総濃度は0.0264 mMでした。

処理10分後、各サンプルは即座にリン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH 7.4)で100倍希釈され、酸性懸濁液を中和し、残留酸化剤や鉄のメッキ工程への持ち越しを減らしました。希釈した細菌懸浮液をコロンビア産血寒天培地にプレートし、37°Cで5% O₂、10% CO₂、85% N₂の微気性条件下で3日間培養しました。CFUをカウントし、未処理対照群に対する対数CFU減少率として抗菌活性を計算した。

log₁₀ CFU減少 = log₁₀(CFU_制御) − log10(_{CFU処理済み})(2)

救済アッセイ
ビタミンC補助フェントン系の抗菌活性が鉄の利用可能性やラジカル関連プロセスに関連しているかどうかを調べるために、鉄キレート剤としてデフェロキサミン(DFO)を、ヒドロキシルラジカルスカベンジャーとしてチオウレアを用いる救助実験が行われました。FeSO₄およびH₂O₂の添加の5分前に、DFOまたはチウ尿尿素が細菌懸濁液に加えられました。DFOとチオウレアはそれぞれ最終濃度100μMと5mMで使用されました。

6つの実験群が含まれました:未治療対照群、ビタミンC補助フェントン、DFO併用ビタミンC補助フェントン、チオレア併用ビタミンC補助フェントン群、DFO単独、チオウレア単独群です。pH、生理食塩水/尿素背景、H₂O₂濃度、FeSO₄濃度、ビタミンC投与スケジュール、処理期間、プレート化前の希釈・中和、培養条件など、すべての実験パラメータは一次コロニーカウントアッセイで用いられたものと同一でした。抗菌活性はCFUの列挙で定量化され、未処理対照群に対する対数₁₀CFU減少として表されました。

多重ひ�効果の検証
一次株で観察された抗菌効果に対する限定的な交差株支持を提供するため、コロニーカウントアッセイはさらに2つの H. pylori 参照株、ATCC 43504およびATCC 26695にも適用されました。各株に対して、未処理対照群、従来型フェントン反応、段階的ビタミンC添加によるビタミンC補助フェントン反応の3つの実験群が含まれました。実験条件と手順は一次コロニーカウントアッセイで用いられたものと同一でした。抗菌活性は各株の未処理対照株に対する対数₁₀ CFU減少として表されました。各実験はn=3回の独立した生物学的複製を用いて行われ、データは平均±標準偏差の個別データ点として提示されました。

マトリックス干渉アッセイ
有機マトリックス成分がビタミンC補助フェントンシステムの抗菌活性を減衰させるかどうかを評価するため、牛血清アルブミン(BSA)を用いてタンパク質干渉モデルが確立されました。BSAは最終濃度0、1、3 g·L⁻¹。各BSA濃度において、3つの実験群が含まれました:(1)未処理対照群、(2)従来型フェントン(Fe²⁺ + H₂O₂)、(3)段階的にビタミンCを添加したフェントン。アッセイは一次株を用いて、一次コロニーカウントアッセイで記載されたプロトコルのもと、pH条件、生理食塩水/尿素背景、試薬濃度、処理期間(10分)、およびプレート付け手順を用いて実施されました。抗菌活性は各BSA濃度で未処理対照群に対するlog₁₀CFU減少として表されました。各実験は少なくとも3回独立して実施されました。主な比較は、強化フェントン病がタンパク質含有条件下で従来のフェントン病よりも優れているか、少なくとも弱くなかったかに焦点を当てました。

細菌の生死蛍光染色
処理後、細菌懸浮液は上記の通りPBSで100倍希釈され、残留酸性および酸化性の残留を減らしました。懸濁液を1,800 × g で室温で10分間遠心分離し、上清液を廃棄しました。細菌ペレットを生理用生理食塩水200μLに再懸濁させました。最終濃度6μMと30μMにそれぞれSYTO9とプロピジウムヨウ化物(PI)を追加しました。懸濁液を暗闇で室温で20分間孵化しました。染色された細菌懸濁液5〜10μLをきれいなガラススライドに置き、カバースリップで覆いました。すべての処理群に対して、緑色および赤色蛍光チャネルを用いた蛍光顕微鏡を用いた取得蛍光画像。各グループに対して少なくとも3つのランダムに選ばれたフィールドを取得。これらの画像を、細菌の生存可能性の定量的測定ではなく、生死染色パターンの定性的視覚的証拠として用いました。

走査型電子顕微鏡による細菌形態解析
処理後、細菌サンプルを採取し、0.1 Mリン酸バッファー(pH 7.4)で調製した2.5%グルターアルデヒドに4°Cで12時間固定しました。固定後、サンプルはリン酸塩バッファーで洗浄され、残留固定剤を除去しました。その後、サンプルは50%、70%、90%、100%のエタノール濃度の段階溶液で順次脱水されました。脱水後、臨界点乾燥が行われました。乾燥したサンプルはSEMスタブに取り付けられ、約10nmの薄い金層でスパッターコーティングされました。細菌の形態は、5kVの加速電圧で走査型電子顕微鏡を用いて調査されました。各治療群ごとに低倍率および高倍率の代表画像が取得されました。SEM画像は、定義された損傷メカニズムの定量的証拠ではなく、定性的形態学的観察として用いられました。

統計解析
統計解析はGraphPad Prismバージョン10.0を用いて実施されました。すべての定量的実験はn=3個の独立した生物学的複製で行われ、データは平均±標準偏差(SD)として示されています。TA蛍光アッセイでは、複数の処理群間で一方向分散解析(ANOVA)を用いて統計比較を行い、その後Tukeyの多重比較検定を用いました。複数の治療条件を伴う一次株のコロニーカウントアッセイでは、一方向ANOVAを用いて統計比較を行い、その後Tukeyの多重比較検定を実施しました。救助アッセイでは、一方向ANOVAを用いて、その後ダネットの多重比較検定を行い、ビタミンC補助フェントン群を基準にしました。限定的な交差種検証実験では、各株内の従来型フェントン群とビタミンC補助フェントン群間で、対対なしの二尾t検定を用いてlog₁₀ CFU減少を比較しました。マトリックス干渉アッセイでは、処理とBSA濃度(相互作用項を含む)を要因とした二方向ANOVAが実施されました。各BSA濃度における処理間のペアワイズ比較は、Šídákの多重比較検定を用いて実施されました。統計的有意性はP < 0.05と定義されました。有意水準は*p < 0.05、** P < 0.01、***P < 0.001、****p < 0.0001 と示されています。

結果

ビタミンC補助フェントン系におけるAO7分解の評価
AO7分解は、ビタミンCが酸性条件下でフェントン反応の観察可能な酸化挙動にどのように影響するかを調べるための化学プローブとして用いられました。ビタミンCがない場合、従来のフェントンシステムは10分間の反応期間中に部分的なAO7分解を引き起こしました。ビタミンCが導入されると、染料の分解程度が増加し、その効果はビタミンCとFe2⁺のモル比に依存しました。比較的低いビタミンC:Fe²⁺比率では、AO7の分解はビタミンCなしの状態と比べて増加しました。Vc:^{Fe 2}⁺比0.24で最大分解効率は約73.5%が観察され、ビタミンCなしの分解率は約51.7%でした。ビタミンC濃度のさらなる増加はさらなる改善にはつながらず、むしろ分解効率の徐々の低下と関連していました。

その後、ビタミンCの総量を同じに保ちながら段階的にビタミンCの投与戦略が評価されました。単回投与と比較し、段階的添加は同じ条件...

ディスカッション

本研究では、定義された酸性 in vitro 条件下で、ビタミンCの投与がフェントン系の酸化挙動および抗菌指標を調節できるかどうかを検討しました。化学的および微生物学的アッセイ全体で、段階的なビタミンC補給は観察可能な反応挙動を変化させ、試験条件下で従来のフェントン反応よりもH . pylori に対する抗菌活性がより高いと関連していました。重要なのは、このシステムは完全な生理的胃微小環境ではなく、単純化された酸性・塩性尿素モデルとして解釈されるべきである。このモデルは、胃粘液、宿主細胞、免疫因子、緩衝能力、胃内容物の不均一組成を再現するものではなく、フェントンベースの酸化活性を検証するための制御された化学的および微生物学的環境を提供するために設計されました。

AO7分解は、個々の活性酸素種の特定の測定ではなく、酸化活性の間接的な化学的読み取りとして用いられました。このシステムでは、ビタミンCの添加により選択されたVc: Fe²⁺比率でのAO7分解が促進され...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Acid Orange 7 (AO7)	アラジン試薬（上海）株式会社	O113230	AO7分解アッセイのモデル染料として使用。
ウシ血清アルブミン（BSA）	上海マックリ生化学技術株式会社	B885114	マトリックス干渉アッセイに使用。
脳心臓輸液（BHI）ブロス粉末	四川省ハッピーバイオエンジニアリング株式会社	N/A	細菌培養および凍結保存に使用。
コロンビア血液寒天プレート（5％羊血）	常徳市ブクマンバイオテクノロジー株式会社	110701028.0	細菌培養およびCFU数え取りに使用。
臨界点乾燥機（EM CPD300）	ライカマイクロシステムズ	EM CPD300	段階的なエタノール脱水後のSEMサンプル調製に使用。
デフェロキサミン（DFO）	上海マックリ生化学技術株式会社	D873692	レスキューアッセイの鉄キレート剤として使用。
ジナトリウムテレフタレート	上海マックリ生化学技術株式会社	D835937	•OH関連シグナル検出のためのTA蛍光プローブとして使用。
エタノール、無水	シグマ・アルドリッチ	E7023	SEMサンプル脱水用の段階的エタノールシリーズを調製するために使用。
蛍光顕微鏡（DMi8）	ライカマイクロシステムズ	DMi8	生きた/死んだ蛍光イメージングに使用。
グルタルアルデヒド溶液	シグマ・アルドリッチ	G5882	SEM前の細菌サンプルの固定に使用。
グリセロール	シグマ・アルドリッチ	G5516	BHIブロス中の細菌の凍結保存に使用。
GraphPad Prism 10	GraphPad Software, LLC	Prism 10	統計分析とグラフ作成に使用。
ヘリコバクター・ピロリ株ATCC 26695	アメリカンタイプ文化コレクション（ATCC）	700392	限定的な交差株検証に使用する追加の参照株。
ヘリコバクター・ピロリ株ATCC 43504	アメリカンタイプ文化コレクション（ATCC）	43504	限定的な交差株検証に使用する追加の参照株。
ヘリコバクター・ピロリ株G27	四川大学附属西部病院感染症センター	N/A	コロニー数え取り、レスキューアッセイ、マトリックス干渉アッセイ、生きた/死んだ染色、SEMに使用する主要株。
過酸化水素溶液	シグマ・アルドリッチ	H1009	フェントン反応アッセイの過酸化物基質として使用。
硫酸第二鉄一水和物（FeSO4・H2O）	上海マックリ生化学技術株式会社	F904376	フェントン反応の二価鉄イオン源として使用。
マイクロプレートリーダー（Synergy H1）	アジレントバイオテック	Synergy H1	TA由来の蛍光（Ex / Em = 315 / 425 nm）を測定するために使用。
リン酸緩衝生理食塩水（PBS）、pH 7.4	シグマ・アルドリッチ	P4417	プレート成形およびサンプル洗浄前の後処理希釈/中和に使用。
生理食塩水（0.9％塩化ナトリウム溶液）	ミリポア	567442	細菌懸濁液および酸性塩水尿素モデルの調製に使用。
走査型電子顕微鏡（INSPECT F）	FEIカンパニー	INSPECT F	細菌形態分析に使用。
水酸化ナトリウム	シグマ・アルドリッチ	S5881	TAアッセイのアリオートをアルカリ化し、蛍光を安定させるために使用。
スパッターコーター（EM ACE200）	ライカマイクロシステムズ	EM ACE200	SEM撮像前の薄い金めっきを適用するために使用。
SYTO 9 / PI生きた/死んだ細菌二重染色キット	上海マオカンバイオテクノロジー株式会社	MX4234	蛍光ベースの生きた/死んだ細菌染色に使用。
チオ尿素	上海マックリ生化学技術株式会社	T81602	レスキューアッセイのラジカルスカベンジャーとして使用。
尿素	上海マックリ生化学技術株式会社	U820349	酸性塩水尿素モデルの調製に使用。
UV-Vis分光光度計（UV-2600i Plus）	島津製作所	UV-2600i Plus	AO7の483 nmでの吸光度を測定するために使用。
ビタミンC（L-アスコルビン酸）	上海マックリ生化学技術株式会社	A800295	ビタミンCアシスト型フェントンシステムの還元剤として使用。