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方法論記事

炎症誘発代謝変化の研究を目的としたインターロイキン10ノックアウトマウスにおけるピロキシカム加速型腸炎のモデル

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DOI:

10.3791/71448

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2026年8月11日

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, The University of Texas Southwestern Medical Center, 2Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 3Department of Internal Medicine, University of Texas Southwestern Medical Center

この記事について

サマリー

このプロトコルはピロキシカムを用いてインターロイキン(IL-10)ノックアウトマウスモデルにおける大腸炎の発症を加速させます。このプロトコルは大腸炎の同期を保証し、性別、背景株、ビバリウムの状態に依存しない厳格で再現性の高い結果をもたらします。これは腸の炎症中の代謝変化を研究する有用なモデルとして機能します。

要約

炎症性腸疾患(IBD)は、世界中で1,000万人以上に影響を及ぼす慢性的な消化管の炎症性疾患です。IBDの免疫学的メカニズムや影響については多くの研究が行われてきましたが、粘膜炎症が代謝調節障害、特に体重減少や食欲減退にどのように寄与するかについては、あまり理解されていません。本件では、著者らはインターロイキン10ノックアウト(IL-10-KO)マウスにおけるピロキシカム加速腸炎のマウスモデルを記述し、炎症誘発性代謝調節障害を研究しています。IL-10-KOマウスは自発性腸炎を発症することが知られており、感染や薬物によって引き起こされる腸炎に対する感受性が高まります。しかし、このモデルではビバリウムの状態やストレインバックグラウンドが大腸炎発症の交絡要因として報告されています。非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)であるピロキシカムは、動物モデルにおいて腸炎を引き起こしたり加速したりすることが示されており、腸道炎の粘膜曝露を増加させることで示されています。このプロトコルでは、オスとメスのIL-10-KOマウスに通常のチャウダイエットの代わりにピロキシカム強化飼料を与えられました。食事量と体重は、全身の代謝変化や下痢や直腸出血などの腸炎の臨床症状を反映するために毎日測定されました。このプロトコルは効率的かつ再現性が高く、複数のマウスで同時に腸炎を誘発し、炎症性腸疾患モデルにおける代謝調節障害の評価を可能にします。このプロトコルを用いたさらなる研究では、腸炎がエネルギー消費や体組成など代謝調節の他の要素に与える影響を調査し、炎症性腸疾患と宿主代謝のより広範な関連を明らかにする可能性があります。

概要

クローン病および潰瘍性大腸炎は、総称して炎症性腸疾患(IBD)として知られ、消化管の慢性自己免疫疾患であり、粘膜の炎症を特徴とし、腹痛、体重減少、血尿、下痢などの臨床症状が現れます。IBDは世界中で何百万人もの人々に影響を与え、西洋化社会で最も有病率が高い1.アメリカでは、300万人以上が影響を受けていると推定されており、特に子どもや若者の間で発症率と有病率が増加しています。

IBDの病因の正確なメカニズムは完全には解明されていませんが、遺伝的に感受性の高い個人における腸内細菌叢に対する過剰な免疫反応が原因と考えられています。炎症反応を調節するサイトカインは、腸内恒常性の維持やIBDの発症において重要な役割を果たします。その中でも、インターロイキン10(IL-10)はよく研究されている抗炎症性サイトカインであり、自然免疫反応群と適応免疫応答の両方を調節することで、人間の免疫学的恒常性を維持するのに役立ちます6,7。特に、IL-10およびその受容体(IL-10RA/B)における多型が、非常に早期に発症するIBD(VEO-IBD)の乳児で確認されており、典型的には生後数か月以内に肛門周疾患を呈します8。この関連は、クローン病の成人患者に対する大規模なエクソームシーケンスによってさらに支持されており、IL-10RAが非単一遺伝子IBD9の感受性遺伝子座として同定されました。さらに、VEO-IBD患者においてはIL-10中和抗体を関与する非遺伝的経路が記載されており、この経路が粘膜免疫恒常性維持に重要であることがさらに強調されています10。

IL-10がIBDに関与していることを示すヒト研究を基に、IL-10ノックアウト(IL-10-KO)マウスをモデルとして開発し、IL-10の役割を研究しています。IL-10-KOマウスは、通常11歳の8〜12週頃に刺激に対してCD4+ Th1反応が過剰に現れる自発性腸炎を発症することが知られています。しかし、IL-10-KOマウスにおける自発性腸炎の発症は、遺伝子株、微生物叢の構成、飼育条件により12,13,14の加速因子がない場合に予測不能である可能性があります。信頼性の高いプロトコルを用いて大腸炎を誘発することは、IL-10-KOモデルが実用的に機能するために極めて重要です。これまでの研究では、ピロキシカムなどの非ステロイド性抗炎症薬(NSAIDs)を用いてIL-10-KOマウスに腸炎を誘発してきました(17,18)。しかし、これらの研究は主に免疫学的変化に焦点を当てており、腸炎が代謝に与える影響や大腸炎重症度における性別の役割にはあまり重点が置かれていません。著者らは、IL-10-KOマウスにおける腸炎誘発におけるピロキシカム強化飼料の使用を記述し、オスとメスのマウスを用いて代謝調節障害および粘膜炎症反応を特徴づけています。このプロトコルは、全身の代謝変化や大腸炎の臨床症状、粘膜炎症を反映する組織学的およびトランスクリプトムの変化を反映するために体重と食事摂取量を測定します。この効率的かつ再現性の高いモデルは、IBDと宿主代謝の関連を調査するための貴重なツールを提供します。

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プロトコル

すべての動物実験は、テキサス大学サウスウェスタン医療センターの施設動物ケア・利用委員会(IACUC)が承認したプロトコルに従い、「実験動物のケアと使用に関するガイド」[承認番号:2017-102011]に従って実施されました。安楽死は機関のガイドラインに従って行われました。施術には麻酔は必要ありませんでした。材料に関する具体的な詳細は 材料表に記載されています。

1. IL-10-KOマウスにおけるピロキシカム加速大腸炎モデルの確立

  1. IL-10-KOマウスは特定の病原体フリー(SPF)施設で12時間の光サイクルで飼育し、 食事 と水の自由なアクセスが可能です。
  2. 7〜8週間齢の年齢・性別が一致したマウスを個別にマイクロアイソレーターケージで飼育します。実験開始の少なくとも1週間前から、マウスが単一飼育と日常的な扱いに慣れるまで待ってください。
    注意:オスは体重>20g、メスは>17gであることを確認し、マウスには戦闘傷がないことを確認してください。
  3. マウスを実験群と対照群に割り当てます。実験グループでは、標準的なチャウをピロキシカム強化の食事に置き換えてください。対照群には新鮮な標準食を用意してください。各ケージホッパーに50gのチャウを加えます。
    注意:各グループに性別ごとに少なくとも5匹のマウスを割り当ててください。ピロキシカム強化飼料(200 ppm)は、研究者から提供されたピロキシカムを用いてテクラッドが製造し、カスタム実験動物飼料の製造に使われました。バッチごとの変動を最小限に抑えるために、実験内のすべての動物が同じ生産バッチから食事を与えることが推奨されます。可能であれば、同じバッチを実験全体で使用して再現性を高めるべきです。

2. 体重と摂食行動のモニタリング

  1. 分析スケールを使って、各マウスの体重を記録します。毎日同じ時間に、1日連続で1匹ずつ体重を量ってください。0日目に基準体重のパーセンテージ(100%に設定)で1日体重を報告してください。
    注:体重減少が20%を超える場合は、過度のストレスと差し迫った死亡のリスクを示します。この閾値に達した場合、マウスは安楽死させるべきです。
  2. 分析スケールを使い、ピロキシカム強化飼料と標準飼料の初期重量を各ケージに記録します。
  3. その後、各ケージホッパーに残った食料を毎日同じ時間に、7日間連続で測定します。
  4. 前日の残りのチャウから1日のチャウの重量を差し引いて計算します。
    注意:定期的に食事量を確認し、10g未満の場合は補充してください。ピロキシカムの食の味覚性は摂取に影響を与えず、標準的な食事に非常に近いものであるべきです。

3. 病害活動の監視

  1. 0日目と7日目には、個々のマウスの糞便ペレットを目視で確認し、便に血液が混じっているかどうかを確認します。
  2. 血液が見当たらない場合は、検査カードにペレットを塗りつけて糞便潜血検査を行い、付属の現像剤を加えます。スコア結果は 表1に従っています。
  3. 0日目と7日目には、排便したばかりの糞ペレットを目視で確認し、便の質感を確認してください。一貫性を判断するために平らな鉗子を使いましょう。スコア結果は 表1に従っています。
  4. 0日目と7日目には肛門周囲を検査して直腸脱の程度を判断します。スコア結果は 表1に従っています。
  5. 上記のように体重を測ってください。スコア結果は 表1に従っています。
    注:疾患活動指数(DAI)スコアリングは、一貫性を確保し、観察者バイアスを最小限に抑え、評価の信頼性を高めるために、実験全体を通じて同じ研究者がブラインド方式で行うべきです。

4. 大腸組織の採取

  1. 他の報告通り、CO2 窒息および頸椎脱臼によるマウスの安楽死20。
  2. マウスを仰向けにし、腹側に70%のエタノールをスプレーします。
  3. ピンセットで皮膚を持ち上げ、外科用ハサミで正中線に沿って切ります。腹膜腔を露出させて大腸の位置を特定します。
  4. 鈍的解離で大腸と盲腸を露出させます。大腸 を一括 で取り除き、盲腸と肛門カフも含まれます。
  5. 大腸を平らな面に置き、結合組織を除去します。
  6. 大腸の長さを測定して記録してください。
  7. 結腸の長さを測定した後、盲腸と結腸接合部で切開して盲腸を除去します。
  8. リン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)を充填した10mLの注射器を準備し、22ゲージのボールチップ再使用可能なスチールガベージ針を取り付けます。針を大腸に通し、腸の内容物を洗い流します。
  9. 沖洗した大腸をPBSを含むペトリ皿に入れ、残留物を洗い流して除去します。クリアになったら、下流のアッセイに使ってください。

5. 組織学分析

  1. 大腸をガラスのスライドに平らに置く。鉗子を使って組織を遠位端から巻きつけ、「スイスロール」を作ります。このようにして、遠位/肛門端は内側のロールに残り、より近位的な領域は外側のロールに広がります。
  2. 27ゲージの針を使い、巻いた大腸をピンで固定し、埋め込み組織カセットに入れます。
  3. 組織固定には、10%緩衝ホルマリン溶液に4°Cで16時間浸す組織カセットを保有します。
    注意:10%ホルマリンは皮膚に触れると有害で、重度の皮膚火傷や目の損傷を引き起こす可能性があります。保護用の手袋と科学用ゴーグルを慎重に着用してください。残留ホルマリンは施設のガイドラインに従って適切に処分されるべきです。
  4. ホルマリン固定後、パラフィン埋め込み用の組織を処理し、ガラススライドに取り付けるために切断します。
    注意:サンプルは、パラフィンでの組織カセット処理、スクロール切片、スライドマウント、ヘマトキシリンおよびエオシン染色に必要な機器を備えた組織学検査室に提出してください。
  5. 組織の染色は、確立されたプロトコルに従いヘマトキシリンおよびエオシン(HE)でスライドします。
  6. 表2に記載された組織学的スコアリングシステムを用いて、各セクションの組織学的特徴を評価する:腸炎による組織損傷、固有層の炎症細胞浸潤、関与面積の割合。各セクションのスコアを組み合わせて合計スコアを算出します(表2)。
    総得点 = 関与×特徴(組織損傷)+ 関与×特徴(Lamina propira炎症細胞の過過)(1)
  7. 組織損傷および細胞浸潤の代表的な組織病理学的画像は、Erbenらによる論文22に掲載されています。
    注意:組織学的採点は、評価の一貫性と信頼性を確保するために、できれば訓練を受けた病理医による盲検方式で行うべきです。

6. ホルマリン固定パラフィン埋め込み組織の免疫蛍光染色

  1. ティッシュスライドをスライドラックに置き、55°Cのスライドドライヤーに1時間入れてパラフィンを溶かします。
  2. スライドを染色ラックに置き、順番にシレン入りの染色瓶に3分間浸します。このステップを3回繰り返します。
  3. 染色ラックを100%エタノール入りの染色瓶に3分間浸します。このステップを3回繰り返します。
  4. 染色ラックを染色瓶に95%エタノールで3分間浸します。
  5. 染色ラックを80%エタノールで染色瓶に3分間浸します。
  6. 染色棚を脱イオン水(DI)入りの染色瓶に5分間浸します。
    注意:キレンの蒸気のため、すべての工程は換気されたフード内で行う必要があります。保護用の手袋と科学用ゴーグルを慎重に着用してください。残留キシレンは施設のガイドラインに従って適切に処分されるべきです。
  7. スライドをスライドラックに移し、1 ×クエン酸塩抽出液を塗った染色ジャーに浸します。
  8. 染色用の瓶を染色皿の支柱に入れます。
  9. 染色皿の支柱を圧力鍋に入れます。
  10. 圧力鍋で15分間調理します。
  11. 圧力鍋からスライドを回収し、室温まで冷ます。
  12. 300μLのブロッキングバッファー(3.5%ヤギ血清をPBSで希釈したもの)を加湿チャンバーで1時間スライド培養します。組織がブロッキングバッファーで完全に覆われていることを確認しましょう。
  13. スライドを4°Cで4°Cで16時間、加湿チャンバー内で薄めた一次抗体300μLにさらします。組織が一次抗体で完全に覆われていることを確認しましょう。以下の一次抗体が使用されました:抗S100A8/S100A9(1:500)。
    注意:抗体希釈は試薬ごとに異なり、供給者の推奨に従うべきです。
  14. すすぎは、PBSに3回連続して5分間浸して染色用のジャーに浸すことです。
  15. 希釈した蛍光セカンダリ抗体300μLを室温で加湿チャンバーでブロッキングバッファー中に1時間曝露します。組織が二次抗体で完全に覆われていることを確認しましょう。以下の蛍光二次抗体が使用されました:ヤギ抗ウサギAlexa Fluor 555(1:150希釈)。
    注意:この時点で以降、蛍光分子の光漂白を防ぐためにスライドは光から保護する必要があります。二次抗体の希釈は試薬特異的であり、供給者の推奨に従うべきです。
  16. すすぎは、PBSに3回連続して5分間浸して染色用のジャーに浸すことです。
  17. スライドを核染色に曝露し、1:5000 PBSで希釈したHoechst溶液に20分間浸して染色ジャーに浸します。
  18. すすぎは、PBSに3回連続して5分間浸して染色用のジャーに浸すことです。
  19. スライドのPBSは研磨性のないティッシュで慎重に拭き取ってください。アンチフェードマウントメディウム50μLとカバースリップを加えます。

7. RNA抽出

  1. 大腸全体または断片を液体窒素で凍結し、-80°Cで保存します。 または、1.5mLのRNALater保存液に浸して、製造元の指示に従って保存する方法もあります。
  2. 凍結した大腸を解凍し、平らな場所に置きます。ハンドヘルドホモジナイザーで組織を破壊し均質化します。
  3. メーカーの指示に従い、キットを使ってRNAを単離してください。
  4. 分光光度計を使ってRNA濃度を測定します。260/A280 比>1.8、A260/A 230 比が2.0–2.2であることは許容できるRNA純度を示しています。
  5. 逆転写を行い、その後SYBRグリーン挿入染料を用いたqPCR検査を行います。
  6. 定量プラットフォームや類似のツールを使って結果を分析します。

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結果

雄と雌のIL-10-KOマウスは、ピロキシカム強化飼料への短期間の曝露後に腸炎を発症します(図1A–E)。2日目までに、ピロキシカム曝露マウスは同性の通常の食事給餌対照群よりも統計的に有意に大きな体重減少を示し、性別間で同等の体重減少が観察されました(図1B)。ピロキシカム曝露および腸炎の発症を通じて、見かけの1日の食事摂取量は変化せず、標準的な食事の摂取量に似ていることから、このモデルにおける体重減少は主に摂取量の減少によるものではなく、代謝支出を促進する他の要因によって引き起こされていることを示しています(図1C)。

腸内炎症の進行をさらに調査するため、疾患活動性は体重減少、便中の血、便の濃度、直腸脱の程度の総合スコアで評価されました。修正疾患活動指数(DAI)はベースラインおよび7日目に評価されまし...

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ディスカッション

炎症性腸疾患は複雑な多遺伝子疾患であり、前臨床モデルはIBDの発症に寄与する経路を解明し、新しい診断および治療戦略を開発するための貴重なツールとして機能します。現在、多くのIBD前臨床モデルは、使いやすさからデキストラン硫酸ナトリウム(DSS)、オキサゾロン、トリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)などの化学物質曝露に依存しています。自発性大腸炎を発症する遺伝モデルも存在します。その中でもIL-10-KOモデルは特に価値があります。なぜなら、IL-10経路の遺伝的変異がヒトの腸炎を引き起こすことが知られており、IL-10-KOマウスは人間の病気に似た自然性慢性腸炎を発症するからです。しかし、このモデルの大きな制約は表現型の変動を考慮できないことです。腸炎は自然発生しますが、発症は系統背景やビバリウムの条件によって変動します。

化学的曝露と遺伝モデルを組み合わせることで、ここで述べるプロトコルは、実験的な大腸炎の信頼性が高く再現可能なマウスモデルを提供します。IL-10...

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開示事項

著者らは関連する開示を一切行っていません。

謝辞

ここで紹介された活動に貢献してくださったUTSWの中核施設の皆様に感謝申し上げます。この研究は以下の資金源によって支援されました:NIHスルー K08DK127197(LS-D)、T32DK007745(JW)、およびDocstars賞(LS-D)によるサウスウェスタン財団。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
10% buffered formalinStatLab28600-11 Galllon
27 G needlesBD305109
Anti-S100A8 + S100A9 antibodyAbcamAB288715
BalanceFisher scientificS94792DFisher Science Education Portable Balances, 300 g
Citrate bufferSigma AldrichC9999-1000mL
DI waterFisher scientificSTLSL301
Dissecting forcepsFisher scientific22-327379
Ethanol, 100% 200 proofFisher scientificNC1675398Pharmco Products ETHYL ALCOHOL 200 PROOF
Ethanol, 190 proof, 95%Fisher scientificAC615110010
Ethanol, 80%Fisher scientificT08204K7
EZ-Quick Slide Staining DishIHC worldIW-2511Staining jar
EZ-Quick Slide Staining RackIHC worldIW-2512Slide rack
Feeding needleFisher scientificNC992498622 gauge, 25 mm
Fine scissorsFisher scientific14060-11
Flat forcepsFisher scientific21-125-109
Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor™ 555Thermo FisherAB_2535849
Handheld homogenizerFisher scientific15-340-167
HemoCueDanlee Medical Products, Inc.BCK 64151AHemoccult Dev/ Single Slide Test Cards - CLIA Waived
Hoechst 33342Invitrogen62249
IL-10 KO MiceThe Jason LaboratoryStrain #: 002251IL10-KO mice, genotype: B6.129P2-IL-10tm1Cgn/J
IVC mouse cagingAllentownMouse 500
Liquid nitrogenAirgasNI UHP300
Microscope cover glassFisher scientific12541033
NanodropThermo FisherND-ONE-W
Normal Goat serumVector labsS-1000-20
Phosphate buffered saline (PBS)Sigma AldrichD8537
Petri dishesFisher scientificFB0875713
PiroxicamSigma AldrichP0847supply to inotiv for preparation of custom animal diet
Piroxicam-fortified chowInotivCustom200 ppm
Primer: Mouse GAPDH forwardSigma AldrichN/A5' AGGTCGGTGTGAACGGATTTG 3' forward
Primer: Mouse GAPDH reverseSigma AldrichN/A5' TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA 3' reverse
Primer: Mouse IFN-G forwardSigma AldrichN/A5' ACTGGCAAAAGGATGGTGAC 3' forward
Primer: Mouse IFN-G reverseSigma AldrichN/A5' TGAGCTCATTGAATGCTTGG 3' reverse
Primer: Mouse IL-10 forwardSigma AldrichN/A5' CTTGCACTACCAAAGCCACA 3' (common)
Primer: Mouse IL-10 reverseSigma AldrichN/A5' GTTATTGTCTTCCCGGCTGT 3' (Wild type reverse)
Primer: Mouse IL-10 reverse (2)Sigma AldrichN/A5' CCACACGCGTCACCTTAATA 3' (Mutant reverse)
Primer: Mouse IL-1B forwardSigma AldrichN/A5' GCTGAAAGCTCTCCACCTCA 3' forward
Primer: Mouse IL-1B reverseSigma AldrichN/A5' AGGCCACAGGTATTTTGTCG 3' reverse
Primer: Mouse IL-6 forwardSigma AldrichN/A5' GTTCTCTGGGAAATCGTGGA 3' forward
Primer: Mouse IL-6 reverseSigma AldrichN/A5' TTTCTGCAAGTGCATCATCG 3' reverse
Primer: Mouse TNF forwardSigma AldrichN/A5' GCAGGTTCTGTCCCTTTCAC 3' forward
Primer: Mouse TNF reverseSigma AldrichN/A5' AGTGCCTCTTCTGCCAGTTC 3' reverse
QuantStudio 7 ProThermo FisherA43183
RNAlater solutionInvitrogenAM7020RNA Stabilization Solution, 100 mL
Rneasy mini kitQiagen74104
SHURDry SD-II Slide DryerGeneral dataSD-ll-120
Simport Scientific EasyDip Slide Staining RackFisher scientific22-038-494Staining rack
SlowFade Gold antifade reagentInvitrogenS36936
Staining dish supportBioSBBSB7086
Staintray IHC slide staining systemIHC worldM918-1Humidified chamber for IHC
SuperScript VILOInvitrogen11755050
SYBR Green Master mixApplied BiosystemsA46109
Tintoretriever pressure cookerBioSBBSB7008
Tissue cassettesFisher scientific 50-197-8152Research Products International Corp Tissue Processing Cassette, Pink, 500 per Case
XylenePharmco3990000001 Gallon

参考文献

  1. Hracs L, Windsor JW, Gorospe J, et al. Global evolution of inflammatory bowel disease across epidemiologic stages. Nature. 2025;642(8067):458-466.
  2. Dahlhamer JM, Zammitti EP, Ward BW, Wheaton AG, Croft JB. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease Among Adults Aged ≥18 Years - United States, 2015. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2016;65(42):1166-1169.
  3. Ng SC, Shi HY, Hamidi N, et al. Worldwide incidence and prevalence of inflammatory bowel disease in the 21st century: a systematic review of population-based studies. Lancet. 2017;390(10114):2769-2778.
  4. Caron B, Honap S, Peyrin-Biroulet L. Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease across the Ages in the Era of Advanced Therapies. J Crohns Colitis. 2024;18(Supplement_2):ii3-ii15.
  5. Ye Y, Manne S, Treem WR, Bennett D. Prevalence of Inflammatory Bowel Disease in Pediatric and Adult Populations: Recent Estimates From Large National Databases in the United States, 2007-2016. Inflamm Bowel Dis. 2020;26(4):619-625.
  6. Rubtsov YP, Rasmussen JP, Chi EY, et al. Regulatory T cell-derived interleukin-10 limits inflammation at environmental interfaces. Immunity. 2008;28(4):546-558.
  7. Shouval DS, Biswas A, Goettel JA, et al. Interleukin-10 receptor signaling in innate immune cells regulates mucosal immune tolerance and anti-inflammatory macrophage function. Immunity. 2014;40(5):706-719.
  8. Glocker EO, Kotlarz D, Boztug K, et al. Inflammatory bowel disease and mutations affecting the interleukin-10 receptor. N Engl J Med. 2009;361(21):2033-2045.
  9. Sazonovs A, Stevens CR, Venkataraman GR, et al. Large-scale sequencing identifies multiple genes and rare variants associated with Crohn’s disease susceptibility. Nat Genet. 2022;54(9):1275-1283.
  10. Griffin H, Ceron-Gutierrez L, Gharahdaghi N, et al. Neutralizing Autoantibodies against Interleukin-10 in Inflammatory Bowel Disease. N Engl J Med. 2024;391(5):434-441.
  11. Kühn R, Löhler J, Rennick D, Rajewsky K, Müller W. Interleukin-10-deficient mice develop chronic enterocolitis. Cell. 1993;75(2):263-274.
  12. Berg DJ, Davidson N, Kühn R, et al. Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4(+) TH1-like responses. J Clin Invest. 1996;98(4):1010-1020.
  13. Mizoguchi A. Animal models of inflammatory bowel disease. Prog Mol Biol Transl Sci. 2012;105:263-320.
  14. Hart ML, Ericsson AC, Franklin CL. Differing Complex Microbiota Alter Disease Severity of the IL-10-/- Mouse Model of Inflammatory Bowel Disease. Front Microbiol. 2017;8:792.
  15. Keubler LM, Buettner M, Häger C, Bleich A. A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse. Inflamm Bowel Dis. 2015;21(8):1967-1975.
  16. Büchler G, Wos-Oxley ML, Smoczek A, et al. Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions. Inflamm Bowel Dis. 2012;18(5):943-954.
  17. Berg DJ, Zhang J, Weinstock JV, et al. Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice. Gastroenterology. 2002;123(5):1527-1542.
  18. Hale LP, Gottfried MR, Swidsinski A. Piroxicam treatment of IL-10-deficient mice enhances colonic epithelial apoptosis and mucosal exposure to intestinal bacteria. Inflamm Bowel Dis. 2005;11(12):1060-1069.
  19. Holgersen K, Kvist PH, Markholst H, Hansen AK, Holm TL. Characterization of enterocolitis in the piroxicam-accelerated interleukin-10 knock-out mouse--a model mimicking inflammatory bowel disease. J Crohns Colitis. 2014;8(2):147-160.
  20. B C, K B, V B, et al. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. DGXT of the European Commission. Laboratory animals. 1997;31(1).
  21. Ellis JL, Yin C. Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish. J Vis Exp. 2017;(123):55630.
  22. Erben U, Loddenkemper C, Doerfel K, et al. A guide to histomorphological evaluation of intestinal inflammation in mouse models. Int J Clin Exp Pathol. 2014;7(8):4557-4576.
  23. Holgersen K, Kutlu B, Fox B, et al. High-resolution gene expression profiling using RNA sequencing in patients with inflammatory bowel disease and in mouse models of colitis. J Crohns Colitis. 2015;9(6):492-506.
  24. Ananthakrishnan AN, Adler J, Chachu KA, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Crohn’s Disease. Gastroenterology. 2023;165(6):1367-1399.
  25. Singh S, Ananthakrishnan AN, Nguyen NH, et al. AGA Clinical Practice Guideline on the Role of Biomarkers for the Management of Ulcerative Colitis. Gastroenterology. 2023;164(3):344-372.
  26. Sifuentes-Dominguez LF, Li H, Llano E, et al. SCGN deficiency results in colitis susceptibility. eLife. 2019;8:e49910.
  27. Sellon RK, Tonkonogy S, Schultz M, et al. Resident enteric bacteria are necessary for development of spontaneous colitis and immune system activation in interleukin-10-deficient mice. Infect Immun. 1998;66(11):5224-5231.
  28. Bábíčková J, Tóthová Ľ, Lengyelová E, et al. Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens. Inflammation. 2015;38(5):1996-2006.
  29. Wagnerova A, Babickova J, Liptak R, Vlkova B, Celec P, Gardlik R. Sex Differences in the Effect of Resveratrol on DSS-Induced Colitis in Mice. Gastroenterol Res Pract. 2017;2017:8051870.
  30. Maite CB, Roy M, Emilie V. The Effect of Sex-Specific Differences on IL-10-/- Mouse Colitis Phenotype and Microbiota. Int J Mol Sci. 2023;24(12):10364.
  31. Dokoshi T, Seidman JS, Cavagnero KJ, et al. Skin inflammation activates intestinal stromal fibroblasts and promotes colitis. J Clin Invest. 2021;131(21):e147614.
  32. Dokoshi T, Chen Y, Cavagnero KJ, et al. Dermal injury drives a skin-to-gut axis that disrupts the intestinal microbiome and intestinal immune homeostasis in mice. Nat Commun. 2024;15(1):3009.
  33. Allard C, Zizzari P, Quarta C, Cota D. Food intake and body weight in rodent studies: the devil is in the details. Nat Metab. 2022;4(11):1424-1426.
  34. M W, R L, S S, et al. Combination therapy using intestinal organoids and their extracellular vesicles for inflammatory bowel disease complicated with osteoporosis. Journal of Orthopedic Translation. 2025;53.
  35. Y G, H Z, Y Y, et al. Injectable body temperature-responsive hydrogel for encephalitis treatment via sustained release of nano-anti-inflammatory agents. Biomaterials translational. 2024;5(3).

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