慢性外傷性脳損傷のマウスモデルを構築するための反復的な体重減少手技

サマリー

頭部を閉じた軽度外傷性脳損傷マウスモデルを確立し、頭部の閉鎖型軽度外傷性脳損傷マウスモデルを確立し、粗大な構造的脳病変がない状態の慢性うつ様行動のメカニズムを研究するプロトコルを提示します。

要約

外傷性脳損傷(TBI)は持続的な神経病理学的変化や長期的な神経精神疾患の後遺症を引き起こすことがあります。回復中、患者の多くは、通常のコンピュータ断層撮影や磁気共鳴画像法で明らかな構造異常が見つからなくても、うつ症状や睡眠関連の訴えを含む情動障害を発症します。これらの特徴を再現する実験モデルは、慢性的な心的外傷後神経精神症状のメカニズムを調査するために必要です。ここでは、顕著な粗大な脳損傷が見られない場合に、慢性うつ様行動のメカニズムを研究するための反復閉頭軽度外傷性脳損傷マウスモデルを確立するプロトコルを提示します。この方法では、完全な頭蓋骨を露出させ、定義された重量落下パラメータを用いて5日間連続で繰り返し衝撃を受けさせます。ここで述べた条件の下では、この手技は頭部の大きな骨折や巨視的な局所打撲を伴わない閉鎖性頭部損傷を生じさせます。損傷後の間隔を経て、マウスはうつ様行動を示しますが、本研究で用いられた条件下で、粗眼検査やT2加重磁気共鳴画像では明らかな局所構造異常は見られません。本プロトコルは、繰り返しの軽度外傷性脳損傷後の慢性うつ様行動を研究し、治療的介入の可能性を評価するための実験的アプローチを提供します。

概要

しかし、現在のパラダイムは主に頭部固定マウスに線形的な影響を与えるため、スポーツ関連の脳震盪や軽度の交通傷害の直接的な生体力学的模倣ではなく、慢性的な情動転帰の研究に最適化された閉頭型RMTBIモデルとして解釈すべきです。」外傷性脳損傷(TBI)は現在、外傷関連の発症率と死亡率の主要な原因の一つであり、家族や社会に大きな医療的・経済的負担を課しています^1,2。特筆すべきは、TBI後の中枢神経系障害は一時的なものではありません。通常、慢性的かつ進行的に進行します。TBIに関する研究では、損傷から18年経っても微粒細胞の活性化が持続し、慢性的な神経炎症が慢性的に重度の神経劣化を引き起こし続けていることが明らかになりました³。疫学的データによると、回復フェーズ⁴の長期期間中に患者の最大28%〜32%が重度の情動障害を発症します。本記事では、rmTBIは繰り返しの軽度外傷性脳損傷誘発パラダイムを指し、持続的な行動変化を特徴とする慢性的な損傷後段階は慢性外傷性脳損傷(c-TBI)と呼ばれます。ここでc-TBIという用語は、rmTBI後に持続的な行動変化を特徴とする慢性的な損傷後状態を指すものであり、明確な損傷パラダイムとは区別されていません。この用法は、実験的TBIが長期的な組織病理学的および行動異常を伴う進行性の慢性過程として進化しうることを示す私たちの以前の研究と概念的に整合しています。

これらの慢性神経精神医学的後遺症は患者の生活の質と機能的転帰を著しく損なう^5.しかし、これらの二次性情動障害の正確な病因は依然として不明であり、臨床的治療の選択肢も著しく限られています。したがって、c-TBI誘発性うつ様行動のメカニズムを調査し、正確な治療標的を特定することは、緊急の臨床的必要性と実用的な重要性を有しています。

TBIの病理学的メカニズムを明らかにするために、研究者たちは様々な動物モデルを開発してきました。その中で、制御皮質インパクト(CCI)モデルは現在最も広く使われている^ものの一つ^です。CCIは衝撃パラメータの精密制御を可能にし、高度に再現性の高い局所病変を生成します。しかし、CCIモデルも従来の液体打撃損傷(FPI)モデルも通常、開頭切開が必要です。これらの手法は、局所打撲、組織喪失、重度病変関連の神経炎症反応の研究に特に有用ですが、重度の開放性外傷をシミュレートする傾向があり、スポーツ関連脳震盪のような軽度閉鎖頭外傷の最も一般的な臨床症状とは大きく異なります。重要なのは、脳組織の壊死、グリア瘢痕、そして開頭切開と衝突による後期の空洞化が二つの大きな制約を生み出していることです。第一に、重度の構造的欠損はしばしば運動機能障害を引き起こし、行動結果の正確な評価を直接妨げます。第二に、組織の物理的な喪失は長距離神経投射を断ち切る。CCI誘発性TBIモデルを用いた以前の研究で示されたように、マウスは著しい局所性脳打撲を示し^ました。この構造的障害は、ウイルストレーシングなどの高度な神経解剖学的技術の応用を著しく妨げ、精神症状やそれに関連する神経回路の調査をほぼ不可能にしています。したがって、これらのモデルは重度または局所性TBIの研究には依然として有用ですが、反復的な軽度閉鎖頭損傷後の慢性情動異常の調査を目的とする場合、特に行動的および回路レベルの解析において構造的完全性の維持が重要な場合には、あまり適さが薄くなる可能性があります。

前述の重度開放型TBIモデルの限界を克服するため、本研究は開頭術なしで露出した完全な頭蓋骨に重量落下法を用いて反復性軽度外傷性脳損傷(rmTBI)マウスモデルを確立するプロトコルを詳述します。このプロトコルは、落下高度25cm、重量20gという、正確に定義された衝撃パラメータを用いています。衝突部位は矢状縫合の左2mm、冠状縫合線の後方2mmを標的とし、直径4mmの湾曲した金属インパクターチップを用いて衝撃力の正確性と均一性を確保しました。さらに、5日間連続した反復的影響の特定の頻度は、慢性的な病理的変化の安定性を保証します。MRI、組織病理学、行動分析を用いた包括的な評価により、このマウスモデルは明らかな局所打撲や運動障害なしに、脳の大まかな構造的完全性を維持しつつ、うつに似た顕著な行動を示すことが示されています。この表現型プロファイルは、通常の神経画像で明らかな構造異常が見られないにもかかわらず、神経精神疾患様の変化を含む反復的な軽度頭部外傷の行動特徴を捉えています(10,11,12,13)。しかし、現行のパラダイムは主に頭部固定マウスに線形影響を与えるため、スポーツ関連脳震盪や軽度の交通障害の直接的な生体力学的模倣ではなく、慢性的な情動転帰の研究に最適化された閉頭型RMTBIモデルとして解釈すべきです。

プロトコル

すべての動物処置は、合肥総合科学センター人工知能研究所の動物ケア・利用委員会(承認番号)によって承認されました。IAI2024071004)。すべての処置は、実験動物のケアおよび使用に関する機関および国家のガイドラインに従って実施されました。実験プロトコルの回路図は 図1に示されています。他社の同等機器も使用可能ですが、20gの衝撃重量、25cmの落下高さ、4mmのインパクターチップ直径、信頼性の高いイソフルラン投与、ここで使用されたものと同等のMRI設定などの重要な性能特性が維持されます。試薬および使用機器は 材料表に記載されています。

1. 動物の調理

1. 動物たちの準備をしろ。
   1. 生後8〜10週、体重20〜25gのオスのC57BL/6Nマウスを使用します。
   2. マウスは個別換気ケージ(IVC)で特定の病原体フリー(SPF)動物施設で飼育します。食事と水は自由に提供し、温度と湿度を管理した12時間の光と12時間の暗いサイクルを維持してください。
   3. 実験前にマウスを飼育室に慣らし、施設の動物ケア手順に従って定期的な健康検査を実施してください。
2. グループを割り当ててください。
   1. マウスをランダムにナイーブグループ、シャムグループ、c-TBIグループに割り当てます。MRI解釈、大まかな病理評価、行動スコアリング/データ解析を担当する研究者はグループ割り当てを盲検しました。
   2. 最初の怪我セッション前に動物識別番号とグループ割り当てを記録してください。

2. 手術および麻酔の準備

1. 手術器具と麻酔システムを準備しろ。
   1. No.11ブレードを装着した滅菌メス、滅菌綿棒、滅菌生理用生理食塩水、10%ポビドンヨウ素溶液、5-0非吸収性ポリプロピレンモノフィラメント縫合糸、接着テープ、クロルテトラサイクリン眼軟膏を準備します。
   2. 使用前に手術器具を滅菌し、清潔な手術現場に置き、手術中は無菌技術を維持してください。手袋、白衣、目の保護具など、適切な個人用防護具を着用してください。
   3. サーモスタット用ヒーターパッドを用意し、37°C±0.5°Cに設定します。
   4. 誘導チャンバーとノーズコーンを実験室の動物用ガス麻酔システムに接続します。
   5. 酸素流量を0.5〜1.0 L/minに設定し、イソフルラン・ヴェポライザーを誘導とメンテナンスのために準備します。麻酔は換気の良い場所で行うか、承認された廃ガス掃討システムを使用してください。
2. 手術の準備をしてください。
   1. 承認された動物プロトコルに従い、麻酔および手術の30分前にブプレノルフィンHCl(0.1 mg/kg、腹膜内投与)を投与してください。
   2. マウスを誘導室に入れ、イソフルランで麻酔を誘発します。誘発時は蒸気発生器を3%〜5%に設定し、右立反射が失われて四肢の自発的な動きが止まるまでマウスを継続的に監視します。誘導時にはイソフルラン5%を超えないようにしてください。
   3. マウスを伏せの立体型フレームに移し、鼻錐形で麻酔を維持します。維持のためにベーポライザー設定を1%〜2%に下げ、酸素流量を0.5〜1.0 L/minに保ちます。
      1. 手術中は、約60〜100回の安定した呼吸数を毎分維持してください。呼吸数が60回/分を下回ったり、呼吸が浅くなったり不規則になった場合は、直ちにイソフルラン濃度を減らし、支持的な温めを提供し、安定した呼吸が再開するまで衝撃を遅らせてください。メンテナンス中はイソフルラン2%を超えないようにしてください。
   4. 足筋の撤退反射がないことで十分な麻酔を確認し、鼓膜を損傷せずに立体型フレームの耳棒で頭部を固定し(図2A)、マウスを伏せ状態に保つこと。適切な麻酔が誘導および維持範囲内で達成できない場合、または過度な呼吸抑制が発生した場合は、その動物をその傷害セッションから除外してください。
   5. 両目にクロルテトラサイクリン眼軟膏を塗布し、頭皮を剃り、手術部位を10%ポビドンヨウ素溶液で消毒します。

3. 反復的軽度外傷性脳損傷モデルの確立

1. 頭蓋骨を露出させろ。
   1. No.11ブレードを装着した無菌メスを使い、頭皮に約0.5cmから1cmの縦方向の正中切開を行います。
   2. 無菌鉗子や綿棒で皮下組織と骨膜を鈍く剥離し、骨表面を傷つけずに頭蓋骨を完全に露出させます。
   3. 生理食塩水で湿らせた滅菌綿棒で頭蓋骨表面を拭き、ブレグマや冠縫合を含む頭蓋のランドマークを視覚化します。
2. 衝撃装置を準備しろ。
   1. 自由落下する重量落下装置に直径4mmの曲がった金属製インパクターチップを取り付けます。
   2. ドロップ高さを25cmに設定し、20gのインパクトウェイトを使用します(図2B)。
3. インパクトを届けましょう。
   1. 頭蓋骨表面の矢状縫合線から左2mm、冠状縫線の後方2mmの地点に衝突部位を特定します(図2C)。
   2. インパクターの先端を目標部位の垂直に合わせ、頭蓋骨の表面に接触するまで優しく下げ、重りを放す前に先端が頭蓋骨に対して垂直かつ中心にあることを確認してください。
   3. 20gの重りを25cmの高さから解放し、単一の衝撃を与えます。
   4. ナイーブのグループには、麻酔や手術は行わないでください。シャムグループでは麻酔をかけて頭皮を切開しますが、効果は与えません。
4. 切開部を縫合し、術後のケアを行います。
   1. 衝撃直後にインパクターの先端を取り外し、手術部位を点検してください。
   2. 頭皮切開部を間断した5-0非吸収性ポリプロピレンモノフィラメント縫合糸で閉じ、切開部を10%ポビドンヨウ素溶液で消毒します。
   3. マウスを37°C±0.5°Cに保たれたサーモスタット加熱パッドに置き、呼吸を監視して意識と自由な歩行が完全に回復するまで待機し、その後ネズミを元のケージに戻します。
      注:回復とは、規則的な自然呼吸の回復、正直反射の回復、自然な歩行によって定義されます。急性無呼吸や目に見える出血は、衝突直後および早期回復時に監視する必要があります。長時間にわたる無呼吸、目に見える出血、イソフルラン中止後10分以内に復元反射が回復しない、または15分以内に自発的に歩行できない動物は、今後の処置から除外し、承認された動物プロトコルに従って管理されるべきです。
   4. 使用済みの刃物や針は、認可された鋭利な容器に処分してください。動物廃棄物や汚染物質は、機関のバイオセーフティ規則に従って処分すること。
5. 怪我を繰り返してください。
   1. ステップ3.1から3.4を24時間ごとに5日間連続で繰り返し、合計5回の衝撃を与えます。
   2. 術後の回復期間中、体重と活動を継続的にモニタリングしてください。頭蓋骨骨折、目に見える出血、けいれん、持続的な円を描く、または自立して食事や飲水ができない場合、動物はその後の分析から除外してください。

4. 磁気共鳴画像の取得

注:本研究では、MRIは最終損傷後7日目に実施されました。マウスはイソフルラン麻酔下でスキャンされ、画像診断前に犠牲にされませんでした。組織採取は画像検査後に実験スケジュールに従って行われました。

1. 動物をMRIの準備をしてください。
   1. マウスをイソフルランで麻酔し、鼻のコーンを備えたMRI対応の動物ベッドに置きます。
   2. 検査中は呼吸をモニターし、体温を37°C±0.5°Cに保ちます。
2. T2加重画像の取得
   1. 直径30cm、勾配系を持ち最大勾配強度1000 mT/m、最大スルーレート10000 T/m/sの9.4 T超伝導磁石で画像を取得します。
   2. 無線周波数伝送には86mmのボリュームコイルを使用し、信号受信には15mmの平面表面コイルを使用します。
   3. T2加重の高解像度マルチスライス高速スピンエコー画像を以下のパラメータで取得します:繰り返し時間=3000ms、エコー時間=46.34ms、エコートレイン長=13、受信帯域幅=220Hz/ピクセル、視野角=20×20mm^²、取得行列=208×208、スライス厚さ=0.5mm、スライスギャップ=0mm、励起数=2。
   4. 脳全体を覆うために30枚のスライスを用意しましょう。総取得時間は1分33秒です。本研究では、T2加重MRIは質的評価のみに用いられました。定量的なMRI解析は行われませんでした。
      注:MRI画像は、グループ割り当てに盲検化された研究者によって質的にレビューされました。

5. 大脳神経病理の評価

1. 組織採取を行いましょう。
   1. 承認された動物プロトコルに従ってマウスを深く麻酔してください。
   2. 胸腔を開け、心臓を露出させ、左心室に灌流針を挿入し、右心房を切開します。
   3. 自然生理食塩水で点流し、その後4%パラホルムアルデヒド(PFA)を点流します。灌流手順はすべて認定された化学煙フードで行い、PFAによる直接の皮膚や目線の接触は避けてください。組織および液体廃棄物は有害廃棄物およびバイオセーフティ規制に準拠して処分してください。
   4. 頭蓋骨と無傷の脳を収集し、高解像度カメラで粗い画像を撮影します。
      注:総病理学的評価は、グループ割り当てを盲検にした研究者によって実施されました。

6. 体重のモニタリング

1. 体重を記録してください。
   1. 最初のケガの前とケガ後の1日目、3日目、7日目、14日目、21日目、30日目に各マウスの体重を測り、その数値を記録して全体的な健康状態を時間をかけて評価します。

7. ビームウォーク試験の実施

1. 装置を準備しろ。
   1. 長さ1m、幅1cmの水平木梁を使い、地面から30cmの高さに吊るします。
2. 運動協調性をテストしてください。
   1. マウスをビームの開始端に置き、終点まで移動させ、ビームを横断するのにかかる時間を記録します。
   2. ケガの前およびケガ後の1日目、3日目、7日目、14日目、21日目、30日目に検査を実施してください。
      注:行動分析は検査間の継続効果を最小限に抑えるために予定されました。テールサスペンションテスト(TST)と強制泳ぎテスト(FST)はオープンフィールドテスト(OFT)よりもストレスが大きいため、最初に実施され、その後の時点でOFTとバーンズ迷路が行われました。この配列は、以前の慣れ化やその後の行動評価における繰り返しの探索的曝露による交絡因子を減らすために選ばれました。

8. 尾部サスペンション試験の実施

1. 装置を準備しろ。
   1. ケガから7日目にテストを行い、尾のクライミングを防ぐためにプレキシガラスシリンダーを尾に装着します。長さ4cm、外径1.6cm、内径1.2cm、重さ1.6gの円筒を使用します。
2. 行動を記録してください。
   1. 尾をサスペンションボックスに粘着テープで固定し、ネズミが箱の底に届かないようにし、3分間吊り下げます。
   2. 高解像度カメラでセッション全体を録画し、盲目観察者が録画した映像から移動時間と動けない時間を手動で分析します。

9. 強制泳ぎテストの実施

1. 装置を準備しろ。
   1. 損傷後10日目に検査を行い、高さ25cm、直径15cmの透明な円筒に23〜25°Cの水を注ぎます。 尾や後肢が底に触れないように水深を選びましょう。
2. 行動を記録してください。
   1. マウスを水に6分間浸し、高解像度カメラでセッション全体を録画します。
   2. 盲検された観察者が手動で録音の最後の4分間を分析し、可動時間と不動時間を定量化します。
   3. 動かされないとは、頭を水面に浮かせるために必要な最小限の動きと定義してください。

10. オープンフィールドテストの実施

1. 装置を準備しろ。
   1. ケガから14日目に、静かな部屋、常に明るい環境でテストを実施してください。この後の時間点は、前のTSTおよびFSTセッションから分離し、急性ストレス関連のOFTへの移行を減らすために選ばれました。
   2. 40cm×40cm×40cmのオープンフィールドボックスを使いましょう。
2. 探索行動を記録し分析する。
   1. マウスをアリーナの中央に置き、6分間自由に探索させてください。
   2. 行動追跡・分析ソフトを使って6分間行動を追跡します。ソフトウェアでアリーナの寸法を40cm×40cmの装置に合わせて調整し、アリーナを仮想的に5×5グリッドに分割します。
   3. 外側の16マスを周辺ゾーン、9つの内側のマスを中心ゾーンと定義します。動物の色を背景色より暗く設定します。動物の体だけを追跡してください;頭や尾を追跡しないでください。背景を手動でキャプチャしてください。
   4. ソフトウェアを使って平均速度、センターゾーンでの滞在時間、周辺ゾーンでの滞在時間、そしてテスト期間全体を通じた総走行距離を測定します。
   5. 各試験の前後に器具を清掃し、消臭して嗅覚の手がかりを除去してください。

11. バーンズ迷宮の演奏

1. 装置を準備しろ。
   1. 怪我から30日目からバーンズメイズ評価を開始しましょう。
   2. 直径1mの円形ステンレス製プラットフォームに20個均等に穴を開けます。
   3. 脱出ボックスを指定されたターゲットホールの下に置き、迷路の周囲に視覚的な手がかりを配置し、すべての試行でターゲットホールの位置を一定に保ちます。
2. 訓練段階の実施
   1. トレーニング中に嫌悪刺激として90dBのホワイトノイズをつけてください。
   2. マウスをプラットフォーム中央の透明な円筒の下に120秒置きます。
   3. シリンダーを外して、マウスに最大180秒探索させてください。
   4. 4本の前足が脱出ボックスに入ると成功した試行を記録します。
   5. 180秒以内にターゲットを見つけられない場合は、マウスをエスケープボックスに誘導し、レイテンシを180秒と記録します。
   6. マウスを60秒の間、脱出ボックス内に留めておく。
   7. 各トレーニング日には4〜5時間の間隔を空けて1回トレーニングを繰り返し、4日間連続してトレーニングを続けます。
3. 休養日とテストフェーズの実施
   1. トレーニングフェーズ終了後、1日間トレーニングを中断してください。
   2. テスト当日にマウスをプラットフォームの中央に置き、最大180秒まで探索できるようにします。
   3. スケールキャリブレーションのために迷路の直径を100cmに設定し、トラッキングアリーナが映像フレームの中央に位置していることを確認しましょう。動物の色は背景よりも暗く設定します。動物の体だけを追跡してください;頭や尾を追跡しないでください。背景を手動でキャプチャしてください。
   4. 行動追跡・解析ソフトウェアを用いて、脱出ボックスに入るまでの遅延、平均速度、180秒のテストセッション中の総移動距離を記録します。解析前に指定されたターゲットホールの位置に基づいてソフトウェアで脱出ゾーンを定義してください。

12. データ分析

1. データセットを準備してください。
   1. 行動、画像、体重データを統計・グラフ作成ソフトでまとめます。
   2. 平均の標準誤差(SEM)±平均としてデータを表現します。
2. 統計分析を行いましょう。
   1. 本研究では、グループ、時間、相互作用を固定効果、動物をランダム効果とする線形混合効果モデルを用いて縦断体重および梁歩行データを解析し、該当する場合は事後多重比較検定を行います。
   2. 正規分布で均次分散のデータを通常の一方向ANOVAを用いてTST、FST、OFT、バーンズ迷路の結果を解析し、その後、全体ANOVAが有意な場合にTukeyの事後検定を行います。ノンパラメトリックデータの場合は、クルスカル・ウォリス検定に続いてダンの事後検定を用いてください。
   3. 利用可能な場合は正確な p値、検定統計量、自由度、効果量指標(一方差ANOVAの場合はR² )を報告してください。上記の統計検定から報告されたすべてのp値を取り出し、統計およびグラフ作成ソフトウェアですべての解析を行います。
   4. 統計的有意性は p. <0.05に設定します。

結果

c-TBIマウスの画像診断および神経病理学的評価

動物の全体的な健康状態と基礎運動機能を評価するため、 図1に示されたタイムラインに従って体重とビームウォークのパフォーマンスをモニタリングしました。縦断的群差は、動物をランダム効果として用いる線形混合効果モデルを用いて分析しました。モデリング以前は、グループ間で体重に統計的な差はありませんでした(図4A)。モデリング後、c-TBIマウスの全体体重はナイーブ群およびシャム群よりやや低く、TBI後3日目に最低点に達しました。しかし、これらのグループ間の違いは統計的に有意ではありませんでした。TBI後3日目以降、c-TBIマウスの体重は徐々に回復し増加しました。ビームウォークテストでは、評価された時刻において、c-TBI、シャム、ナイーブグループ間でビームを通過するのに必要とされる時間に有意な差は見られませんでした(

ディスカッション

本研究は、繰り返し自由落下の重さ落下法を用いて、反復軽度外傷性脳損傷(rmTBI)マウスモデルを確立するための標準化された実験プロトコルを詳述します。頭蓋骨にさらされたマウスを立体誘導装置に固定し、25cmの高さから落とした20gの重りを5日間連続で定められた座標に繰り返し衝撃を加えることで、頭蓋骨骨折や重度の局所性脳打撲なしに慢性うつ様行動を特徴とする行動表現型が誘導されました。このモデルの主な特徴は、繰り返しの軽度の閉鎖頭部衝撃の後に、損傷後期間にうつ様行動が再現可能に現れることです。したがって、本研究は、慢性的な心的外傷後うつ様行動および関連する神経精神疾患後遺症のメカニズムを調査するために用いられるrmTBIマウスモデルを確立します。本研究では、最終影響から最大30日以内までアウトカムが評価され、急性反応ではなく慢性的な損傷後の時間点として用いられました。さらに後の時間点は、今後の研究でモデルの時間的特徴付けをさらに強化することになるでしょう。

このプロトコルの実行には、いくつかの重要な手順が細心の注意を払...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
5-0 非吸収性ポリプロピレン単糸縫合糸	Jinhuan Medical	I303	創閉
麻酔機	RWD Life Science	R550	動物モデルの構築
ANY-maze行動追跡ソフトウェア	Stoelting	Version 7	行動ソフトウェア
バーンズ迷路	上海新軟情報技術	XR-XB108	行動ソフトウェア
Biorender	BioRender	https://biorender.com	科学研究描画ソフトウェア
ブプレノルフィン	Sigma-Aldrich	Y0001108	術後鎮痛
電動シェーバー	AUX	AUX-C5-1	術前脱毛
強制水泳テスト	上海新軟情報技術	XR-XQX201	行動ソフトウェア
GraphPad Prism 9.5	La Jolla	9.5	統計ソフトウェア
イソフルラン	RWD Life Science	R510-22-10	動物モデルの構築
マウス	Charles river	C57/6N	実験動物
オープンフィールドテスト	上海新軟情報技術	XR-XZ301	行動ソフトウェア
眼科用軟膏	北京ツインラック製薬	H11021342	麻酔中の角膜乾燥防止
パラホルムアルデヒド（PFA）、4%	Biosharp	BL539A	灌流と組織固定
リン酸緩衝生理食塩水（PBS）	Biosharp	BL1425A	灌流と組織洗浄
ポビドンヨード溶液、10%	Beyotime	27883-25g	手術前の皮膚消毒
前臨床磁気共鳴画像システム	ユナイテッドイメージング生命科学機器	uMR9.4T	イメージングソフトウェア
メス刃No. 11	Jinhuan Medical	K3-11	手術中の皮膚切開
メスハンドル	Jinhuan Medical	K6-10	No. 11メス刃と併用
ステレオタキシー器具	RWD Life Science	68025	動物モデルの構築
滅菌ガーゼ	HYNAUT	BK05	出血制御と外科的清掃
テールサスペンションテスト	上海新軟情報技術	XR-XQX201	行動ソフトウェア
重量落下インパクター	RWD Life Science	68093	動物モデルの構築