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方法論記事

急性白血病における残存疾患評価のための標準化多色フローサイトメトリープロトコル

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DOI:

10.3791/71756

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2026年8月7日

1Department of Clinical Laboratory, The Second People's Hospital of Neijiang

責任著者： Linlin Li <lilinlin2026@163.com>

この記事について

サマリー

本プロトコルは、急性白血病における測定可能な残存疾患評価のための標準化された多色フローサイトメトリーのワークフローを記述し、制御された検体処理、調和された取得パラメータ、逐次ゲーティング戦略、分母調整解釈を統合し、通常の臨床実験室での分析再現性を向上させます。

要約

残存疾患(MRD)は急性白血病の管理において重要な予後指標です。しかしながら、定期的な多色フローサイトメトリー(MFC)評価は、解析前および分析上の変動、例えばヘモジル溶解、取得深度の不一致、主観的解釈などに脆弱なままです。本記事では、B細胞急性リンパ芽球白血病(B-ALL)および急性骨髄性白血病(AML)における定期的なMRD評価のための標準化された運用ワークフローを示します。このプロトコルは厳格な検体受理基準と統合的な血液溶解評価を組み込み、骨髄および末梢血検体に対してバルク赤血球溶解法を用いています。分析標準化は、疾患特異的な2管8色抗体パネル、少なくとも50万件のCD45陽性イベントを必要とする調和取得標的、固定された逐次ゲーティング戦略を通じて達成されます。さらに、ワークフローは分母調整された検出限界(LOD)と定量化(LOQ)を適用し、客観的な三層報告システムをサポートします。197件の臨床検体を対象とした検証では、強い再現性、堅牢な希釈直線性、対の直交分子アッセイとの高い整合性が示されました。このプロトコルは、標準化されたMRD監視のための実用的な枠組みを提供します。通常の臨床検査室における標準化されたMRDモニタリングのために、制御された事前分析取り扱いと調和された分析パラメータを統合しています。

概要

形態的寛解を達成した後でも、急性白血病患者は再発リスクを正確に評価するために、測定可能な残存疾患(MRD)の継続的なモニタリングが必要です。従来の形態学的および細胞病理学的検査では、低レベルの残留白血病集団を検出するために必要な感度が不足しています。その結果、MRD評価は急性骨髄性白血病(AML)およびB細胞急性リンパ芽球性白血病(B-ALL)における疾患モニタリングにおいて不可欠な要素となっています。European LeukemiaNetの最近の推奨では、AMLにおける信頼性の高いMRD評価は、単純なアッセイの利用可能性ではなく、技術的標準化と観測者間再現性に依存していることが強調されています1,2。B-ALLにおいては、安定した分子標的を持たない患者にとって多色フローサイトメトリー(MFC)が特に重要です。過去の研究では、構造化された抗体パネル設計を用いた標準化された多色フローサイトメトリーアプローチが、再現性が高く感度の高い残存疾患検出を提供できることが示されています3。フローサイトメトリーは、その応用範囲が広く、迅速な処理時間、そしてコスト効率が高いため広く利用されています。アッセイの性能は標準化された試料調製、取得パラメータ、データ解釈に大きく依存しています。

フローサイトメトリーMRD評価における主要な技術的課題の一つは、取得深度や総イベント数に大きく影響される稀事象検出です。同一抗体パネルでも、分母サイズが不均一な場合、異なる分析感度が生じる場合があります。したがって、標準化は抗体選択を超え、調和された標本処理、赤血球の一括溶解、機器の補正、取得標的、ゲート戦略が求められます。骨髄標本においても、末梢血の汚染が残存白血病負担を人工的に減少させる可能性があるため、ヘモジルの希釈は重要な事前分析変数となります 6,7。さらに、低周波事象の解釈には、標本特異的な取得深度に基づく明確な報告閾値が必要です。最近の研究では、分母調整検出限界(LOD)および定量(LOQ)がフローサイトメトリムMRD解釈の一貫性向上に重要であることが強調されています。

このプロトコルの全体的な目標は、B-ALLおよびAMLにおけるMFCベースのMRD評価の標準化されたワークフローを提供することです。このプロトコルは、検体受理基準、血液溶出評価、疾患特異的抗体パネル設計、バルクリシスサンプル調製、調和された取得標的、固定的逐次ゲーティング戦略、分母調整済み報告基準を統合し、単一の運用フレームワーク9,10を統合しています。標準化された前分析手順と分析手順を組み合わせることで、この手法はMRDモニタリングの臨床検査室での実用的かつ再現性の高いアプローチを提供します。図1は、本研究で実施された標準化された事前解析および解析ワークフロー全体を示しています。表1は、検証期間中に登録されたB細胞急性リンパ性白血病(B-ALL)および急性骨髄性白血病(AML)患者のコホートおよび検体の特徴を、あらかじめ定められたモニタリング期間(誘導終了、統合、前HSCT)でまとめています。

figure-introduction-1
図1:日常的な多色フローサイトメトリムMRD評価の標準化されたワークフロー。(A) 事前分析ワークフロー:事前に定められたモニタリング間隔にわたる検体スクリーニングおよび品質評価を示すもの。 (B) 大量赤血球溶解および抗体染色から、逐次ゲーティング、分母調整解釈、最終MRD報告までの分析ワークフロー。 この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。

表1:統合された患者人口統計、臨床検体の特徴、および定期的な取得指標。 この単一の改訂表は、B細胞急性リンパ性白血病(B-ALL)および急性骨髄性白血病(AML)症例からなる登録コホートの基底臨床特徴をまとめ、患者レベルの人口統計と検体レベルの特性、治療モニタリング間隔、生存可能性、ヘモジル溶解スコア、取得深度、分母調整済み残存疾患分類を組み合わせたものです。 この表をダウンロードするには、こちらをクリックしてください。

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プロトコル

人体標本を対象としたすべての処置は、機関のガイドラインに従って実施され、内江第二人民病院の倫理委員会によって承認されました(承認番号:PXTS887192)。本研究では、定期診断検査後に得られた非特定化された残留臨床検体が使用されました。インフォームドコンセントは、患者ケア、治療配分、または検体採取手順に影響を与えなかったため放棄されました。プロトコルで使用される化学物質、試薬、装置は材料 表に記載されています。

1. 標本採取および事前分析評価

  1. 残存疾患(MRD)評価の推奨標本タイプとして骨髄吸引液を採取します。末梢血検体は、骨髄吸引が臨床的に禁忌である場合や、選択的な監視および比較分析中のみ使用してください。
  2. 可能な限り、最初の吸引抽出時に骨髄標本を採取してください。末梢血の汚染や低レベルの残存疾患の過小評価を避けるため、その後の吸引抽出は避けてください。
  3. 採取後、標本を二カリウムエチレンジアミネテトラ酢酸(K2-EDTA)またはナトリウムヘパリン抗凝固チューブに移管してください。標本は室温(18〜25°C)で保管・輸送し、直射日光から守ります。
    注意: 標本は冷蔵保存しないでください。
  4. 採取後24時間以内にすべての標本を処理してください。安定性研究では、室温保存条件を維持しながら、24時間および48時間の再分析用にアリクオートを保持します。
  5. 患者識別、抗凝固剤の種類、検体の完全性、採取時間は検体受領時に確認してください。広範な凝固、重度の溶血、または顕著な細胞変性を示す標本を拒絶する
  6. 最終解釈前に骨髄標本の血液溶解評価。末梢血の汚染を推定するために、0.00から1.00の範囲の半定量的血液溶解スコアを計算します。
  7. 成熟リンパ球の割合をCD34陽性前駆細胞、未成熟顆粒球、成熟リンパ球の合計で割ることでこの値を決定し、商が高いほど希釈効果が大きいことを示します。
    注: 以下の式でスコアを計算します:
      figure-protocol-1
    ここで、スコアが高いほど末梢血の汚染が増加することを示します。
  8. ヘモディルションスコアは以下の通りに分類されます:<0.20、許容範囲;0.20–0.39、軽度ヘモディュート;そして≥0.40、大幅に出血量が低下している。
    注: 十分な分母サイズと保存された骨髄前駆体構造が確認されない限り、著しく血色化された標本に決定的なMRD陰性解釈を付与しないでください。

2. 疾患特異的抗体パネルの製剤

  1. B-ALLおよびAML分析用に、標準化された疾患特異的2チューブ8色抗体パネルを準備します。安定した集団ゲートのために、すべての管で固定されたバックボーンマーカーを厳格に遵守することでパネルの標準化を実現します。
  2. 対応する系統抗原に対して一貫したフルオロクロム共役体を使用し、製造者推奨の滴定量を厳守してロットごとの蛍光変動を最小限に抑えましょう。
  3. マーカーの組み合わせ、フルオロクロムの割り当て、抗体クローン、染色体積、取得パラメータについては 補足表1 を参照してください。
  4. B-ALL評価では、両チューブの骨格マーカーとしてCD19、CD45、CD34、CD10、CD20を用い、前駆体集団と成熟パターンを定義します。CD38、CD58、CD81をチューブ1に追加します。
  5. ベースライン評価で確立された診断的白血病関連免疫表現型に従い、CD66c、CD123、CD73またはCD304のいずれかをチューブ2に追加します。
  6. AML評価には、CD45、CD34、CD117、CD13、CD33、HLA-DRを両管の骨格マーカーとして用い、胚芽および未成熟骨髄集団を定義します。
  7. CD7およびCD56をチューブ1に追加して、系統間の抗原発現を評価する。CD11bおよびCD15をチューブ2に追加し、骨髄成熟異常を評価する。

3. バルクリシスの調製と染色

  1. よく混合された骨髄または末梢血検体2.0 mLを15 mLのポリプロピレンチューブに移管します。試料の容量が制限されている場合は、最小入力容量を1.0 mLにしてください。
  2. 試料に予熱された塩化アンモニウム溶解バッファー10mLを加えます。懸濁液を室温で10分間培養して赤血球を溶解します。
  3. 500 × g で5分間遠心分離します。核化細胞ペレットを乱さずに上清液を慎重に捨てます。
  4. ペレットを0.5%牛血清アルブミン(BSA)と2 mMのエチレンジアミネテトラ酢酸(EDTA)を含むリン酸塩緩衝生食塩水(PBS)2 mLに再懸濁させます。残留ヘモグロビン汚染が確認された場合は、洗浄を1回繰り返します。
  5. 自動血液分析装置または手動ヘモサイトメーターカウント(トリパンブルー排除)を用いて核細胞濃度を測定します。標準取得の最適として、核生成細胞濃度を5 ×10 6 cells/mLと考えます。
    注: 細胞収率がこの閾値を下回った場合は、500 × g でさらに5分間遠心分離し、細胞密度を最大化するために懸濁バッファーの容積を慎重に減らします。
  6. 1管あたり5個×6個の核細胞を通常の染色用にアリコートします。試料回収が許す場合、高感度分析のために1管あたり最大1×10個7個のセルに入力を増やしてください。
  7. 個別に調整された抗体カクテルと、検証済みの染色パネル構成に従って、各チューブに材料表で指定された固定可能な生存性染料を加えます。ルーチン検証済みのパネルでは、製造元推奨の滴定が異なる抗体特異的体積を示しない限り、フルオロクローム結合抗体1体あたり5μLを使用します。
  8. 最適な抗体対抗原化学量論を維持するために、最終染色反応量を1回の試験で厳密に100μLに保つこと。標本を暗闇の室温で15分間孵化させます。
  9. 染色された細胞をウォッシュバッファーで一度洗浄し、最終ペレットを500μLの取得バッファーに再懸濁させます。
  10. 標本採取当日に補正ビーズを用いた単一染色補正制御を準備します。

4. 機器のセットアップとデータ取得

  1. 患者検体を取得する前に、フローサイトメーターの毎日の開始品質管理を実施してください。メーカーの指示に従い、校正ビーズを用いて流体、レーザーアライメント、検出器性能、蛍光ターゲット値を検証してください。
  2. 抗体パネルに含まれるのと同じフルオロクロムを用いた単一染色補償対照を準備します。患者獲得前に補償マトリックスを調整し、骨格マーカーがあらかじめ定められた蛍光ターゲット範囲内に収まっていることを確認します。
  3. 検証期間中に分析されたすべての試料に対して、同じ取得テンプレート、検出器設定、補償戦略、ゲート階層を用いてください。
    注: すべての検出器に対して専門のキャリブレーションビーズを用いて標準化されたターゲット中央値蛍光強度値を確立し、臨床データ取得前に同一サンプルがプラットフォーム間で類似の蛍光プロファイルが得られることを確認し、機器間の適切な調和を確保します。
  4. 同時発生を減らし、稀事象検出の精度を維持するために、低から中程度の流量でデータを取得しましょう。取得中はイベントレートを継続的に監視してください。
  5. 報告可能なMRD結果ごとに少なくとも50万件のCD45陽性核イベントを取得してください。標本の質と事象の安定性が許す場合は、特に低レベルの残存病害が疑われる場合は、取得を100万〜150万件の総イベントに拡大します。
  6. 流体不安定性、試料の詰まり、急激な事象発生率の変化、または散乱品質の目に見える劣化が発生した場合は、取得を一時停止または停止してください。適切な場合は試料を再ろ過または再混合し、安定した流れが回復した後にのみ試料を再採取します。

5. 逐次ゲーティングと分母調整解釈

  1. 検証済みフローサイトメトリー解析ソフトウェアを使用してフローサイトメトリーデータを解析します。すべての試料に対して同じ逐次ゲーティング戦略を用い、オペレーター間の変動を減らす。
  2. 基準発現テンプレートとして、少なくとも20点の正常または再生中の骨髄標本を独立して取得・解析し、正常かつ再生する成熟パターンを確立します。
  3. 前方散乱および側散乱パラメータを用いて破片を除外します。前方散乱面積 と 前方散乱高さゲーティングを適用して単一セルを分離します。
  4. 材料表に記載された生存性染料ゲートを用いて、生存性のない細胞を除外します。これらの非生存細胞は、非特異的な抗体結合を示し、背景ノイズを人工的に高めたり、稀な異常集団を模倣したりするため、日常的に排除してください。
    注: 最適な下流解析のために最低生存率閾値を75%と定め、この値以下に低下する標本は稀事象の可能性がある場合、慎重に解釈するべきであることに注意。適切な側散乱特性を持つ生存可能なCD45陽性イベントにゲートをかけて白血球分母を定義します。
  5. B-ALL試料については、CD19陽性前駆体区画に分析を制限してください。抗CD19標的治療を受ける患者に対して代替ゲーティングフレームワークを導入します。
  6. CD19発現に依存しない白血病集団を捉えるため、一次評価をCD22、CD24、またはCD34陽性区画に移します。CD34、CD10、CD20の成熟パターンを評価し、CD38、CD58、CD81、CD66c、CD123、CD73またはCD304の発現パターンを用いて異常集団を特定します。
  7. AML試料については、CD45、側散乱、CD34、CD117の発現を用いてブラストまたは前駆体領域を定義します。
  8. CD13、CD33、HLA-DR、CD7、CD56、CD11b、CD15を含む骨髄系および交差系統マーカーの異常または非同期発現を評価する。
  9. 取得可能なCD45陽性イベントの総数を分母として、検体特異的検出限界(LOD)および定量限界(LOQ)を計算します。
     figure-protocol-2
      figure-protocol-3
  10. 最終的なMRD解釈は、MRD陽性、LOD未満、または解析的限定の3つのカテゴリーのいずれかに分類します。
    1. 明確で連続した異常事象のクラスターが標本特異的LODを超え、正常または再生する造血集団とは異なる内部的に一貫した免疫表現型を示す場合、結果をMRD陽性と割り当てます。
      注: 散在的で非クラスタ化の事象をMRD陽性と分類しないでください。ベースライン診断サンプルから追跡された白血病関連免疫表現型(LAIP)と、正常と異なるパターン認識(DfN)戦略を組み合わせた統合解析手法を用います。
    2. 稀な疑わしい事象が存在するが標本特異の報告閾値に達しない場合、結果をLOD未満として割り当てます。
    3. 分母サイズが不十分、血液希釈が大きい、標本の質が低い、または事前解析や解析の制限により確信のある否定的解釈が得られない場合、結果を解析的に限定的に割り当てます。
  11. MRD陽性および境界性低レベルの症例は、別の有資格分析官によって独立してレビューします。
  12. 定量的なポリメラーゼ連鎖反応や次世代シーケンシングの結果を含むペアの分子比較器データをレビューする前に、フローサイトメトリーの解釈を最終決定します。

6. 解析的検証手法

  1. 同じ溶解細胞懸濁液から複製アリコートを作製することで分析的再現性を評価します。少なくとも30個のペア標本を独立して取得・分析してください。
  2. 期待される低負荷範囲内の6つのレベルにわたる連続希釈を準備することで希釈直線性を評価する。希釈系列全体で観測されたMRD値と期待されるMRD値を比較します。
  3. 複数の有資格オペレーターおよび調和されたフローサイトメーターの基準標本を解析することで、オペレーター間および機器間での再現性を評価します。
  4. 統計比較前にlog10変換を用いてフローサイトメトリックおよびペア分子MRDパーセンテージを変換します。相関分析およびブランド・アルトマン分析を用いて定量的一致を評価する。

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結果

ルーチン実装データセットの特徴

研究期間中、197個の連続標本が適格性スクリーニングおよび事前分析品質評価に合格し、報告対象のワークフローに入りました。研究コホートには98名の患者が含まれ、そのうち62名(63.3%)はB細胞急性リンパ性白血病(B-ALL)、36名(36.7%)は急性骨髄性白血病(AML)でした。コホートは男性64名(65.3%)、女性34名(34.7%)で構成され、中央値年齢は32歳(四分位差[IQR]、13〜49歳;範囲2〜73歳)でした。中央値のベースライン芽凋病率は67.2%(IQR、56.9%から80.2%)でした。

分析された標本の多くは骨髄吸引(174/197、88.3%)であり、末梢血液標本は23/197(11.7%)を占めていました。事前に定められたモニタリング間隔によると、誘導療法終了時に86点(43.7%)、統合療法中に65点(33.0%)、造血幹細胞移植(HSCT)前に46点(23.4...

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ディスカッション

本研究の主な目的は、急性白血病における測定可能な残存疾患(MRD)の多色フローサイトメトリー評価のための標準化されたワークフローを確立することでした。信頼性の高いMRD評価は抗体パネルの選択だけでなく、一貫した検体取り扱い、取得パラメータ、データ解釈にも依存します11。本研究の結果は、調和された標本処理、制御された取得深度、分母調整された報告基準が、通常の臨床実験室環境における分析再現性を向上させることを示しています。これらの結果は、異なる機関や運営者間でフローサイトメトリムMRD評価の標準化を目指す最近の取り組みと一致しています。

このワークフローの重要な要素の一つが、塩化アンモニウムを基にしたバルク赤血球溶解手順です。稀事象MRD検出には、十分な分析感度を得るために大きな細胞分母の取得が必要です。標準化されたバルクリシス調製により、十分な核細胞数の安定回収が可能となり、しばしば1.00万〜150万件を超える獲得イベン...

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開示事項

著者たちは何も明かすことはありません。

謝辞

著者は、本研究のために検査施設と技術支援を提供してくださった内江第二人民病院臨床検査科に感謝します。また、著者は検体処理およびデータ収集の支援に協力した検査室スタッフおよび臨床スタッフにも感謝の意を表します。最後に、著者は本研究に貢献した残留臨床検体を提供した患者方々に感謝の意を表します。この研究は、公的、商業的、非営利の資金提供機関から特定の資金提供を受けていません。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
Acquisition bufferLaboratory-preparedPBS containing 0.5% BSA and 2 mM EDTA; final resuspension volume 500 µL最終的なフローサイトメトリ取得前の再懸濁
AML Tube 1 anti-CD117-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 104D2; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs早期の骨髄/芽球の同定
AML Tube 1 anti-CD13-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L138; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs骨髄系アンカー
AML Tube 1 anti-CD33-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: P67.6; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs骨髄系アンカー
AML Tube 1 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs未熟マーカー
AML Tube 1 anti-CD45-APC-H7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 2D1; fluorochrome: APC-H7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs白血球のバックボーンマーカーと定義の分母
AML Tube 1 anti-CD56-V500 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: NCAM16.2; fluorochrome: V500; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs芽球関連の異常な表現型
AML Tube 1 anti-CD7-V450 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: M-T701; fluorochrome: V450; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs異系統の異常の検出
AML Tube 1 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: G46-6; fluorochrome: PE-Cy7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs成熟度とサブタイプの区別
AML Tube 2 anti-CD117-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 104D2; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs早期の骨髄/芽球の同定
AML Tube 2 anti-CD11b-V450 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: ICRF44; fluorochrome: V450; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs成熟度の不一致の評価
AML Tube 2 anti-CD13-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L138; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs骨髄系アンカー
AML Tube 2 anti-CD15-V500 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: HI98; fluorochrome: V500; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs通常とは異なる骨髄パターンの評価
AML Tube 2 anti-CD33-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: P67.6; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs骨髄系アンカー
AML Tube 2 anti-CD34-PerCP-Cy5.5 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 8G12; fluorochrome: PerCP-Cy5.5; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs未熟マーカー
AML Tube 2 anti-CD45-APC-H7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: 2D1; fluorochrome: APC-H7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs白血球のバックボーンマーカーと定義の分母
AML Tube 2 anti-HLA-DR-PE-Cy7 antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: G46-6; fluorochrome: PE-Cy7; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs成熟度とサブタイプの区別
Ammonium chloride-based red blood cell lysis bufferLaboratory-prepared / commercial supplierAmmonium chloride-based lysis buffer; 10 mL/test; 10 min at room temperature大量の赤血球の溶解
Analysis softwareBeckman Coulter (Brea, CA, USA)Kaluza 2.1データ分析とシーケンシャルゲーティング
Automated hematology analyzerCommercial supplier核有細胞濃度と生存率評価に使用される自動血液分析装置核有細胞濃度と生存率評価
B-ALL Tube 1 anti-CD10-PE antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: HI10a; fluorochrome: PE; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsB前駆細胞の定義
B-ALL Tube 1 anti-CD19-FITC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: SJ25C1; fluorochrome: FITC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differsB系の同定と前駆細胞区画への入り口
B-ALL Tube 1 anti-CD20-APC antibodyBD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, USA) / Beckman Coulter (Brea, CA, USA)Clone: L27; fluorochrome: APC; staining volume: 5 µL/test in the routine validated panel unless antibody-specific titration differs成熟パターンの評価

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