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方法論記事

Langendorff灌流マウス心における心房および心室力学評価のための光学システム

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DOI:

10.3791/72264

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2026年8月14日

 , 
1Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del IPN, Unidad Monterrey

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

本プロトコールでは、マウス心臓の摘出とカニュレーションの手順、およびランゲンドルフ後向き灌流システムの準備と構成について説明します。この実験装置は、心房および心室の自然な動態を維持しながら、その機械的反応を評価するために設計された高解像度光学システムと組み合わされています。

要約

マウス心臓は、工学技術の進歩により、心血管研究において広く利用されているモデルです。しかし、マウス心臓はサイズが小さいため、心房および心室の収縮能の評価は依然として困難です。本研究では、摘出した無処置の心臓において、収縮能と心拍数を評価するための新しい手法を導入します。Langendorff灌流マウス心臓と高解像度光学システムを組み合わせることで、心房および心室の収縮能の評価が可能となります。この実験系は、高解像度信号を取得しつつ、心臓のサイズの小ささと収縮速度の速さに関連する課題を解決しています。420から660 beats per minute (bpm)の範囲における刺激周波数と心収縮周波数の同期は、auxotonic法による結果と一致していました。さらに、心室短縮および心房動態信号の測定により、心房心室収縮の判定が可能になります。本手法は、薬理学的または全身的な影響を受けずに、摘出した無処置の心臓における収縮能と心拍数を評価するのに適しています。これらの結果は、本光学システムが心室および心房の短縮反応の測定を可能にすることを実証しています。

概要

心臓生理学にはまだ多くの解明すべき点があります。心臓のペースメーカー機能や興奮収縮連関などの主要なプロセスは、絶えず研究されている中心的な教義です1。生物学的ノイズが心筋収縮能2やペースメーカー活動に及ぼす影響はまだ十分に理解されていませんが1、新しい光学イメージング手法によって、新たなパラダイムが提示されています3,4。

Langendorff系を用いた2つの実験手法が、心機能の測定に極めて重要な貢献をしてきました。1つ目は、左心室に挿入した小型バルーンから信号を得る等容性収縮法であり5,6,7、2つ目は、糸の一端を心尖部に、もう一端を機械的記録装置に縫い付け、心軸方向のオーキストニック収縮を測定して信号を得るオーキストニック記録法です2,8。しかしながら、マウスの心臓は極めて小さいため、心房および心室の収縮能を評価することは困難です。さらに、心臓は損傷を受けやすいため、処置には一定の慎重さが求められます9,10,11,12,13。

マウス心臓の機械的ダイナミクスを評価するためのこの光学システムには、いくつかの斬新な特徴と利点があります。第一に、本手法は薬理学的または全身的な影響がない状態で、摘出したままの完全な心臓における収縮能および心拍数を評価するのに適しています。また、本プロトコルは、薬理学的治療、細胞再生治療、または酸素療法に基づいた治療法を検討する際の虚血再灌流傷害の評価実験においても効果的に活用できます。

本論文では、高解像度光学システムを用いてマウス心臓の収縮機能の生物物理学的パラメータを記録するためのプロトコルを提示します。この手法は、単離した無傷の心臓における収縮能および心拍数の評価に有用です。さらに、心房および心室の収縮能の評価も可能です。本研究のランゲンドルフ法によるマウス心臓標本では、筋肉の収縮を阻害することなく、灌流液の温度低下とモーションアーチファクトを最小限に抑えるためのわずかな修正を加えた改良を導入しています。

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プロトコル

すべての動物実験は、動物実験およびケアに関する連邦規制に従って実施され、CINVESTAVの動物ケア委員会の承認を得ました（CINVESTAV Zacatenco, D.F., Mexico）。本研究では、体重 28–34 g、週齢 8–14 週のC57BL/6J雄マウスを使用します。プロトコルで使用したすべての材料および器具は、材料表に記載されています。補足ファイル 1–11には、本プロトコルの補足図、ソフトウェアガイド、解析プログラム、ペーシングデータ、およびアプリケーションファイルが提供されています。

1. ストック溶液の調製

  1. あらかじめ2種類のストック溶液を調製し、4 °Cの冷蔵庫で保存しておく。(1) ストックI、1 L（脱イオン水にて調製；g/Lあたり：76.13 NaCl、4.02 KCl、1 MgCl2(6H2O)、0.4 NaH2PO4）、および(2) ストックII、0.1 L（脱イオン水にて調製；g/Lあたり：73.5 CaCl2(2H2O)）。
    注：これらの溶液は調製後30日まで使用可能である。4 °Cで保存すること。

2. ランゲンドルフ装置の接続と洗浄

  1. 図1Aに示すように、リザーバー (1)、リザーバー恒温槽 (2)、灌流ポンプ (3)、サーペンタイン (4)、サーペンタイン循環装置 (5)、モニタリングシステム (6)、および排水システム (8) を接続する。
    注：モニタリングシステムと排水システムの接続については、付録ファイル1に詳細に示されている。
  2. ランゲンドルフ装置に50 °Cの脱イオン水1 Lを満たし、灌流ポンプおよび排水ポンプを開始する(Supplementary File 1, 排水システム)。約20–30分後、装置内から液体を取り除き、次のステップに進む。
    注：システムに漏れや圧力低下がないことを確認すること。漏れ等が発生した場合は、実験を続行してはならない。
  3. システムに1%酢酸（脱イオン水に溶解）1 Lを満たし、灌流ポンプと排水ポンプを停止して60分間待機した後、ポンプを起動して液体を取り除く。
  4. ステップ2.2を2回繰り返す。
  5. 溶液成分の付着を防ぐため、システムに70%エタノール（脱イオン水に溶解）を満たす。
    注：ランゲンドルフ灌流システムは、10回の実験ごと、または1ヶ月ごとに洗浄する必要がある。実験前の洗浄プロトコルについてはセクション4で説明し、実験後の洗浄プロトコルの詳細はセクション8に記載している。

3. 実験中のタイロード溶液の調製

  1. 以下の組成（mM）で溶液1 Lを調製する：130.25 NaCl、5.4 KCl、0.53 MgCl2(6H2O)、0.33 NaH2PO4、1.8 CaCl2(2H2O)、10 D-glucose、10 HEPESとし、NaOHを用いてpH 7.35 ± 0.05に調整する。
    1. ストック溶液I 100 mLを脱イオン水700 mLと混合し、定速で撹拌しながら溶液の温度を37 °Cまで上げる。図1A (1)に示すように、O2タンクをエアストーンに接続し、溶液に酸素を供給し続ける。
    2. ストック溶液II 3.6 mLと脱イオン水96.4 mLを加え、CaCl2(2H2O)濃度を1.8 mMにする。その後、NaOHを加えてpHを7.35 ± 0.05に調整する。
    3. 脱イオン水でメスアップし、Tyrode溶液を1 L調製する。
      注：溶液のうち100 mLを冷蔵庫（4 °C）で保存することを推奨する。この分量は後のステップ6で使用する。

4. ランゲンドルフ系の準備

注：実験当日にランゲンドルフ装置がエタノールで満たされていない場合は、手順を進めることは推奨されません。代わりに セクション2を繰り返してください。

  1. 灌流ポンプと排水ポンプの電源を入れます。灌流ポンプの流量を 3 mL/min に、排水ポンプを 10 mL/min に設定します。システム内を排水します。
  2. 37 °C の脱イオン水 1 L をシステムに満たし、その後排水します。
  3. ステップ 3 で調製した Tyrode 液をシステムに満たし、生理学的温度および一定の酸素供給状態を維持します。
  4. リザーバー用恒温槽とサーペンタイン再循環装置の電源を入れます。溶液を生理学的条件下に維持するため、リザーバーの温度（図 1A (2)）を 38 °C に設定します。サーペンタイン（図 1A (5)）の温度を 40 °C に設定します。これにより、Langendorff システム溶液の温度低下を補正します。
    注：システム出口における Tyrode 液の温度が生理学的温度（37 ± 0.5 °C）でない場合は、サーペンタイン再循環装置の温度を調整してください。温度が適切な値で安定するまで、ステップ 6 に進むことは推奨されません。
  5. 圧力モニター（補足ファイル 1、モニタリングシステム）の電源を入れ、0–200 mmHg の範囲で校正します。システムの校正には、モニタリングおよびペーシングアプリケーション（補足ファイル 3 および 補足ファイル 11）を利用可能です。
    注：システム内に圧力損失や気泡がないことを確認することが不可欠です。システム内に気泡がある場合は、一時的にサーペンタインの下部出口を塞いで上部バルブを開いてください。これによりカラムが充填され、気泡が外部に放出されます。この状態が確認されるまで、実験を進めることは推奨されません。

5. 光学系14

  1. CMOSカメラを組み立てます（図1A, 10）、調整可能なカメラレンズ（LC）、および照明システム。
    注：照明システムは2つのLEDで構成されています（図1A, 9）、2枚の平凸照明レンズ（LI）、照明制御（図1A, 11）、データ収集カード（補足ファイル 1、モニタリングシステム）、および3D設計されたサポートパーツ（補足ファイル 1).
  2. 体積が約1,000 mm³のリファレンスオブジェクトを配置します。3 カメラのレンズから100〜200 mm（の）中心から 図1A).
    注：対象物はランゲンドルフ装置の心臓位置に配置する必要があります。この位置は、以下で確認できます。 図1B, 具体的に、光ビームが入射する画像の中央部分において。
  3. カメラキャプチャソフトウェアを起動し、サブサンプリングを4倍（4ピクセル＝1サブピクセル）に設定します。関心領域（ROI）を200 x 200サブピクセルに設定し、補足ファイル2).
    注：この構成により、750フレーム/秒（fps）の時間分解能が得られます。
  4. 照明システムをオンにします（補足ファイル 1）、光線を調整して参照物体に焦点を合わせ、均一な照明を実現します（図1B).
  5. 画像の露出オーバーを避けるため、参照物上の光強度を調整します。
    注：画像は以下のように見える必要があります。 図2A (または 図1C, コントローラーPC）。物体の表面（心臓）の反射は、輪郭の鮮明さを損なわない範囲で、可能な限り低減させる必要があります。これは、照明制御出力を調整するか、カメラ設定で露光時間を短縮することで行えます。
  6. リファレンスオブジェクトの鮮明な画像を得るために、カメラレンズのピントを合わせます（図1C、コントローラーPC）。リファレンス物体が視野の80%を占めるようにしてください（図2A）これにより、約……の換算係数を得る 61 µm サブピクセルあたり。
    注：カメラがキャプチャモードに設定されると、光学系によって照明システムが自動的に作動します（図1A および 補足ファイル 2）。オーバーヒートを防ぐため、カメラはスタンバイモードに維持し、照明システムはオフにしておき、実験データの収集期間中のみ起動させることを推奨します。

6. 外科的手順およびカニュレーション手順

  1. ヘパリン化および麻酔
    1. チレタミン・ゾラゼパム（マウス体重1kgあたり40mg）およびキシラジン（マウス体重1kgあたり10mg）を含む麻酔混合液を調製し、その後、以下まで希釈する。 200 µL 生理食塩水で。
    2. 27G針を用いて、麻酔剤混合液を腹腔内投与する。マウスが深い麻酔状態になるまで待機する。
      注：四肢または尾に刺激を与え、反射がないことを確認してください（通常、10分間で十分です）。
    3. 27Gの針を用いて、非分画ヘパリン200 UIを腹腔内に注入し、約5分間待機してから実験を続行する。
  2. 摘出およびカニュレーション
    1. マウスを仰臥位に固定し、外科用鋏を用いて胸部の被毛と皮膚を除去する。
    2. 横隔膜の完全性を維持するように注意しながら、横隔膜の下で腹部切開を行う。
    3. 次に、横隔膜を横方向に切開し、肋骨を通して迅速に両側上行開胸術を行い、肋骨壁を除去します。
      注意：心臓を損傷させないよう注意すること。処置中に心臓が損なわれたり損傷したりした場合は、実験を中止することを推奨する。
    4. 微小ピンセットを用いて、大動脈弓および隣接する血管を含む心臓の上部構造を穏やかに保持する。緩やかに持ち上げ、下から上に向かって切開し、心臓と肺を合わせて摘出する。
    5. 速やかに、50 mLのタイロード液を含むペトリ皿に心臓を移します。 4 °C 初回洗浄用に。
      注意：横隔膜を切開した瞬間から、動物に呼吸困難が生じます。この時点から、ステップ6.2.3〜6.2.6を完了させるまでの時間は60秒以内としてください。この制限時間を超えると、虚血性損傷が誘発される可能性があります。
    6. 実体顕微鏡と精密鋏を用いて、肺および過剰な脂肪組織を除去し、大動脈弓を露出させる。
      注： 組織を洗浄する際は、大動脈弓を損傷させないように注意してください。腕頭動脈より下方で大動脈を切断すると、カニュレーションが困難になり、圧力漏れにつながる可能性があります。
    7. 心臓を、50 mLのTyrode緩衝液を含む特製のカニュレーションベースに移します。 4 °C そして、20 G針で特注したカニュラに大動脈末端を挿入します（補足ファイル 1).
      注意：大動脈弁を損傷させないように注意してください。弁が損傷すると、心臓が膨張し、冠循環による十分な洗浄が行われなくなります。
    8. 4/0シルク縫合糸を用いて、2つのカニューレ結紮結節を作成する。1つ目はカニューレ先端より遠位の陥凹部に、2つ目は腕頭動脈の手前に結紮する。補足ファイル 1).
    9. 室温のバッファーを満たした1 mLシリンジを用いて、タイロード液をゆっくりと注入します。冠状動脈組織が透過し、カニュレーションが適切に行われたことを確認してください。
    10. 心室および心房へアクセスするため、脂肪組織を除去する。
      注意：心臓の生存能を維持するため、カニュレーションは5分を超えないようにしてください。
    11. 心臓をランゲンドルフ灌流システムに移し、30分間安定させる。
      注： 心臓をシステムの中心に配置します（図1A,B）、垂直に吊り下げます。心臓を吊り下げる際は、気泡が形成されないよう細心の注意を払ってください。気泡が生じると、圧力が140 mmHgを超えて上昇し、心臓が膨張し始め、生存不能となります。
      注：心臓が機械的に安定した反応を示し、自然拍動数が約360回/分（BPM）であり、灌流圧が60〜110 mmHgの間にあるとき、ランゲンドルフ装置のセットアップは完了したとみなされます。

7. ペーシングプロトコルおよびビデオ録画

  1. 心臓生存能
    1. 3 mL/minの灌流ポンプを用い、冠動脈圧が60～110 mmHgの範囲内にあることを確認する。冠灌流圧が60 mmHgを下回った場合は、灌流ポンプの流量をわずかに上げる（低圧になると心臓が蒼白になり、弛緩するため）。逆に、圧力が110 mmHgを超えた場合は、ポンプの流量をわずかに下げる（過剰な圧力は組織浮腫を誘発し、心停止に至るまで圧力が漸増するため）。
      注：前述の最適範囲外で灌流圧を長時間維持すると、心臓の生存能に不可逆的な悪影響を及ぼします。
    2. 心臓を正面に配置し、カメラで正面全体が映るようにします。両心房がカメラに映るよう位置を調整します（図2A).
    3. 白金電極を、右心房上部のペースメーカー結節にそっと表在的に配置します。カメラのフィードをガイドにして、電極を視野内に入れます。右心房を妨げないように電極を配置してください。カメラのライブビューで確認しながら、電極が心房組織に接触するまでゆっくりと進めます。この際、過剰な圧迫を加えないように注意してください（過剰に圧迫すると、画像上で右心房が押しつぶされます）。
      注：正しく行われた場合、カメラの視野は以下のようになります。 図2A.
    4. モニタリングおよびペースメーカーアプリケーションを起動します（補足ファイル 11)とし、データ収集カードの電源を入れます（図1A (6)). 刺激パラメータ値を以下のように設定する：振幅は2 V、周波数は毎分420、540、および720パルス（PPM）とし、デューティサイクル7 msの矩形パルスとする（挿入図の 図2A).
    5. 最低周波数から開始し、20秒間の刺激と、それに続く20秒間の回復期間（静止時間）を1サイクルとして、生存能刺激を適用します。
      注：カメラによるモニタリングで心臓の生存能を評価する。臓器が生理学的に機能している場合、印加された刺激と心臓の反応との同期が観察され、心房および心室の間で適切な協調運動が認められる。対照的に、生存能がない場合は、心腔間の協調性の喪失、または心房のみの単独収縮という形で現れる。
    6. 本実験は室内光や温度変動の影響を受けやすいため、チャンバーのドアを閉じてください。図1C).
      注：実験中はチャンバーのドアを閉じたままにする必要があります。カメラと灌流圧を用いて心臓の生存能をモニターしてください。
  2. データ記録
    1. 30秒間の矩形パルス列と、それに続く30秒間の無信号状態で構成されるペースメーカー刺激プロトコルを適用します。各ペースメーカー刺激列の刺激パラメータを、振幅2 V、デューティサイクル7 ms、周波数を360～720 PPMの範囲に設定してください。
      注：ペーシングプロトコルは360 PPMから開始し、各時点において60 PPMずつ増加させる（〜の拡大図 図2A).
    2. カメラキャプチャソフトを用いて、心臓前面からのダイナミクスの動画を.avi形式で連続的に記録する（補足ファイル 2各ペーシングトレインについて、20秒間のビデオ録画を行います。ペーシング開始から5秒後から始まる20秒間のセグメントを記録してください。代表的な生データ記録を（ ）に示します。 補足動画 1.
      注：コンピュータにより、印加されたペースメーカー刺激列（.xls、 補足ファイル 9) を、モニタリングおよびペーシングアプリケーション、およびカメラ撮像ソフトウェアによってそれぞれ生成された各録画ビデオ（.avi）に補足ファイル 2 および 補足ファイル 3).
    3. 刺激プロトコルの開始前に記録した最初のビデオと、プロトコルの適用後に記録した2番目のビデオを比較し、心臓の生存能を確認します（図2B).

8. ラングンドルフ灌流システムの実験後クリーンアップ

  1. 刺激装置およびECG白金電極を取り出す。系から心臓を取り出し、残っているTyrode溶液をすべて排出する。
  2. 光学系をオフにし、O2バルブを閉じる。
  3. 37 °Cの脱イオン水1 Lで系をすすぎ、系内の液を排出する。
  4. ステップ2.4および2.5を繰り返す。
  5. すべてのシステムおよび装置の電源を切る。

9. ビデオ処理

  1. 各ビデオを解析ソフトウェアにインポートし、ビデオ正規化関数を適用することから開始します。15.
  2. 心臓領域を含む関心領域（ROI）を選択します。画像セグメンテーションを行い、背景ノイズ、電極、およびカニューレを除去します（補足ファイル 4).
    注記削除する画像領域を正しく選択するには、以下を参照してください。 補完ファイル 10
  3. 全体系の機械力学解析を実施（補足ファイル 5）。変動性とシグナルの例を以下に示す。 補足図 S1, 補足図 S2、および 補足図 S3.
    1. 各ビデオフレームにモルフォロジー演算を適用して心臓の外周を検出し、次に塗りつぶしフレームアルゴリズムを適用してマスクを生成します。15.
    2. 各フレームのセグメンテーション領域内の画素数をカウントし、このカウントを画像内の総画素数で正規化して、ダイナミックシグナルを算出します（挿入図 図2B および 付随図 S3).
    3. 得られた信号に対し、高周波ノイズおよび灌流滴下アーチファクトを抑制するため、3〜100 Hzの5次双方向バターワースフィルタを適用する。15.
    4. 記録された最大値および最小値を用いて、すべてのビデオ間で信号を正規化します。
    5. 各ダイナミック信号および刺激信号について、最大振幅値間の間隔（IAA (s)）を算出することで心拍数を決定する。
    6. 次の式を用いて、BPMで周波数を算出します。
      心拍数（BPM）を60をIAAで除した値とする周波数算出式。
    7. IAAデータからポアンカレ写像を作成し、短期的および長期的な変動を可視化する16,17,18 (補足図 S1 および 補足図 S2).
      注：詳細については、以下をご参照ください。 補足ファイル 10
  4. 心室の機械的ダイナミクスのセグメント分析を行う（補足ファイル 6).
    1. 画像の二値化を適用します。形態学的演算を用いて心室領域を画定し、ROIを損なわないように楕円形状に調整します。15.
    2. 各フレームの心室領域に最小楕円をフィットさせます。フレーム内のある遠位点の座標セットを抽出してください。Y軸に沿った各端点に10～20点のセットを使用します（図3A）。代表的な楕円推定の出力結果を以下に示す。 付随動画 2.
    3. 各ビデオにおけるY軸上の極値点間の平均距離として、心室短縮率を算出する。19.
    4. 得られた信号に対し、高周波ノイズおよび灌流滴下によるアーチファクトを抑制するため、3～100 Hzの5次双方向バターワースフィルターを適用する。15.
    5. 各ペーシングで得られたすべてのビデオに対して心室短縮信号を正規化し、ステップ9.3.5〜9.3.6と同様に心拍数と遅延を算出する。
      注：心室周期時間（DVE）、弛緩時間（DVW）、心室間間隔（IVV）、および心室振幅（VA）などのパラメータを算出する（図3A).
      注：詳細については、以下をご参照ください。 補足ファイル 10
  5. 心房の機械的ダイナミクスのセグメント解析を行う（補足ファイル 7).
    1. 2つのROIを使用して心房を画定します（図3C).
    2. それぞれの心房を個別に解析します。
      1. ROIを損なうことなく調整を行いながら、形態学的演算子を用いて心房を画定する15コントラスト強調アルゴリズムを使用して、各心房の輪郭を抽出する。20,21.
      2. 画像二値化を行い、1フレームあたりゼロ以外のピクセル数を定量化することで、心房動態信号を得る。
      3. 得られた信号に対し、高周波ノイズおよび灌流滴下アーチファクトを抑制するため、3〜100 Hzの5次双方向バターワースフィルターを適用します。15.
      4. 2つの心房信号の平均値を算出します（図3D).
    3. 各ペーシングで得られたすべてのビデオに基づき、心房短縮信号を正規化し、ステップ9.3.5～9.3.6に従って心拍数と遅延を算出する。
      注：心房周期時間（DAE）、心房間間隔（IAT）、心房振幅（AA）などのパラメータは、以下の方法で取得される（図3D）。詳細については、補足資料10を参照してください。
  6. 電気機械的解析を行う13,22 (補足ファイル 8).
    1. ペーシングデータを心房および心室の信号と比較して（図3D).
    2. 心伝導系における伝播時間を算出し、心房イベントと心室イベントの間の遅延時間を求めます（AVD）、印加した刺激を基準として。

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結果

心機能測定実験は、図に示すLangendorff装置を用いて行います。 図1A （上）モニタリングシステムおよび光学系により、照明制御がトリガーされた際にビデオ録画が可能となります。これは、以下の図に示されています。 図1A （下）. 図1C 周囲の温度変動や光から心臓を隔離して維持するように設計された、恒温制御キャビネットの外観を示しています。図に示されているように 図1B単離心は、ランゲンドルフ装置、光学系、および刺激系で構成される実験セットアップにおいて、参照物体として配置されます。

〜に示されているように 図2A、摘出した心臓を、逆行性灌流下で心房および心室の正面像を明確に得られ...

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ディスカッション

マウスの心臓は温度変化に対して非常に敏感です2,9,10,11,22。本実験では、灌流心臓を垂直に配置しました。また、Langendorff灌流法において灌流液の温度低下とモーションアーティファクトを最小限に抑えるため、わずかな修正を加えました。灌流液の温度を37 ± 0.5 °Cに維持し、温度低下を最小限にするためにサーペンチンに再循環ポンプを追加し、モーションアーティファクトを最小限にするためにドレナージベースを追加しました。さらに、Figure 1に示すように、光学系と、心臓組織を均一に照射するために両側に配置された2つの強度調整可能なLED光源を備えた断熱キャビネットを使用しました。

実験的な...

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開示事項

著者に申告すべき利益相反はありません。

謝辞

本研究は、科学・人文・技術・イノベーション事務局（SECIHTI）の助成金（助成番号：LN-2025-C-23）による支援を受けて行われました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
1 mL シリンジBD Plastipak302485外科的手順
20 G 針NIPROAH-2032大動脈カニューレ
25 mm 調節可能レンズ（倍率 8x-100x）GenericN/A光学システムカメラレンズ（調節可能カメラレンズとして言及）
27 G 針BD PrecisionGlide302358外科的手順
3D設計サポートパーツCINVESTAVN/Aカスタム3D設計サポートパーツ
4-0 シルク縫合糸AMERICAN SUTURETGSN0901大動脈カニューレ
40-A 電源STERENPRL-25LED電源
エアストーンN/AN/Aタイロード液の酸素供給
CaCl2 (2H2O)Sigma-AldrichC3306タイロード液
D-グルコースJ.T. Baker1916-01タイロード液
ドレナージポンプCINVESTAVN/Aカスタムドレナージポンプ（ドレナージポンプとして言及）
F = 25.4 mm 平凸レンズTHORLABSLA1951-A光学システム照明レンズ（平凸照明レンズとして言及）
氷酢酸Sigma-Aldrich695092ランゲンドルフシステムの洗浄
ヘパリンPiSA060M91抗凝固剤
HEPESSigma-AldrichH3375タイロード液
高出力LEDLuminiusCBT-90-G-L11-C12LED光源
照明システムCINVESTAVN/Aカスタム照明システム（照明システムとして言及）
KClCTR SCIENTIFICCTR02196タイロード液
LabVIEW ソフトウェア version 2018NATIONAL INSTRUMENTSN/Aモニタリングおよびペーシングアプリケーションの実行に使用するソフトウェア（モニタリングおよびペーシングアプリケーションとして言及）
MATLAB ソフトウェアThe MathWorksN/Aビデオの正規化、セグメンテーション、および解析プログラム用の計算ソフトウェア（計算ソフトウェアとして言及）
医療用酸素GRUPO INFRAN/Aタイロード液の酸素供給
MgCl2 (6H2O)CTR SCIENTIFICCTR02104タイロード液
可変流量ミニポンプCONTROL COMPANY3385灌流ポンプ
マウス外科手術キットKent ScientificINSMOUSEKIT外科的手順
NaClSigma-AldrichS5886タイロード液
NaH2PO4DEQDEQF290400250タイロード液
NaOHCTR SCIENTIFICCTR03108pH調整
NI USB-6009NATIONAL INSTRUMENTS779026-01データ収集カード
白金電極、径 0.25 mmSigma-Aldrich349402電気刺激電極
電源 (12 V, 30 A)KarnickPTA-12V30Aリサーキュレーター用電源
圧力モニターCINVESTAVN/Aカスタム圧力モニター（圧力モニターとして言及）
圧力トランスデューサLA BOUVETB17295ランゲンドルフシステム圧力モニター
純エタノールSigma-Aldrich493511システム洗浄用エタノール
循環式恒温槽 (LXC)PolyScienceL113A0412リザーバーリサーキュレーター
生理食塩水PiSA1118480.9% 塩化ナトリウム (NaCl) 液
蛇行管式恒温槽CINVESTAVN/Aカスタム蛇行管リサーキュレーター/恒温槽
実体顕微鏡N/AN/A外科的手順
実体顕微鏡照明N/AN/A外科的手順
uEye Cockpit ソフトウェアIDS Imaging Development System GmBHN/Aカメラ画像収集ソフトウェア（カメラ画像収集ソフトウェアとして言及）
UI-3360CP-NIR-GL Rev.2IDSAB00624高速CMOSカメラ（CMOSカメラとして言及）
キシラジンPiSA4001211麻酔剤
ゾレチル 100Virbac83048907チレタミン-ゾレパゼム麻酔剤（麻酔剤混合液として言及）

参考文献

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