本プロトコルでは、ex vivoのEnterococcus faecalis根管モデルを用い、根管内消毒におけるダイオードレーザー、ツリウムレーザー、およびエルビウムレーザーを比較し、抗菌効果と根表面の温度を評価することで、安全かつ効果的な照射パラメータを特定します。
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研究記事
根管内汚染除去のためのツリウム、エルビウム、およびダイオードレーザー：Enterococcus faecalisに対する抗菌活性とex vivoでの熱安全性
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2026年9月11日
この記事について
サマリー
要約
レーザー補助灌流は、根管消毒のための有望な補助的手段として登場していますが、標準化された実験条件下で異なるレーザーシステムを直接比較したエビデンスは依然として限られています。本ex vivo研究では、Enterococcus faecalisに対する根管内除染において、808 nmダイオードレーザー、1940 nmツリウムレーザー、および2940 nmエルビウムレーザーの抗菌効果と熱的安全性を比較しました。標準化された感染ヒト根管検体に対し、臨床的に適切な照射パラメータを用いて処理を行いました。抗菌効果は、コロニー形成単位（CFU）の減少および細菌増殖曲線の解析によって評価し、熱的安全性は、レーザー照射中の根外表面の温度変化を測定することで評価しました。3つのレーザーシステムすべてにおいて、生理食塩水で処理したコントロールよりも高い抗菌活性が示されました。エルビウムレーザーは、30 mJで30 s照射した際に、根外表面の温度上昇を許容される熱的安全しきい値の10°C未満に維持しつつ、最高の平均抑制率（9.0%）を達成しました。ツリウムレーザーは同等の抗菌活性を示しましたが、最高照射設定では熱的安全しきい値を超えました。ダイオードレーザーは、試験条件下において、ツリウムおよびエルビウムレーザーよりも抗菌効果が低く、温度上昇が大きいことが示されました。このex vivoモデルの限界内において、2940 nmエルビウムレーザーは抗菌効果と熱的安全性の間で最も良好なバランスを示し、根管内消毒のための有望な補助的アプローチであることが示唆されました。
概要
歯髄炎および根尖性歯周炎の主な原因は、根管系への細菌感染です1。ある研究によると、根管治療後の慢性または再発性感染患者において、Enterococcus faecalisが主要な分離菌として同定されています2,3。この細菌はバイオフィルム形成を含む多数の毒性因子を有しており、象牙細管内に最大800 µmの深さまで侵入し、栄養制限条件下でも生存することが可能です2,3。これらの特性により、根管治療で使用される標準的な根管内消毒剤や、生体本来の防御機構に対する耐性がもたらされます。したがって、根管系から残存するすべてのE. faecalisを除去できないことが、根管治療失敗の重大な原因となっています4。
現在の根管治療では、根管システムから微生物を除去するために、器具による機械的デブライドメントと化学的洗浄を組み合わせて行われます5。機械的な器具操作は細菌数を減少させるのに非常に有効ですが、複雑な根管形態の内部には、器具だけでは到達できない領域が多く残されています5。そのため、根管システムの消毒において化学的洗浄剤が重要な役割を果たします。しかし、いかに強力な化学薬剤であっても、細菌バイオフィルムを完全に除去することはできないことが研究で示されています6。さらに、歯内療法で使用される一部の化学薬剤は、象牙質の構造的完全性を損なう可能性があります6,7。消毒効率を向上させ、根管システムから細菌バイオフィルムをより完全に除去するために、化学的洗浄剤を活性化させるいくつかの手法が検討されてきました。その中でも、レーザー活性化洗浄は、より有望な代替案の一つとして登場しました8。また、ダイオード、ツリウム、エルビウムレーザーについても、細菌の細胞壁やバイオフィルムを破壊しうる光熱効果および光機械的効果を誘発する可能性が評価されています9。
これらの各レーザータイプと、それらが相互作用する組織との間の相互作用は、波長によって大きく異なります。通常 808 から 980 nm の範囲の波長で光を放出するダイオードレーザーは、生体組織内の発色団に吸収され、タンパク質の変性と細菌の死滅を伴う光熱反応を引き起こします10。ツリウムレーザーは 1940 nm で動作し、水による高い吸収を示します。したがって、ツリウムレーザーは、洗浄液で満たされた根管を含む湿潤環境に適していることが示されています1。高い水吸収率のため、ツリウムレーザーを洗浄済みの根管に使用すると、液体を急速に加熱し蒸発させることができます。この蒸発によって衝撃波が発生し、細菌バイオフィルムの破壊を助ける可能性があります。エルビウムレーザー、特に 2940 nm で動作するものは、歯科用レーザーの中で水に対する吸収係数が最も高くなります12。洗浄済みの根管において、この特性は爆発的な蒸発と衝撃波を発生させ、周囲の象牙質への熱伝達を抑制しつつ、細菌を機械的に剥離させ死滅させることができます13。
根管治療におけるレーザー技術への関心は高まり続けていますが、異なるレーザーシステムにおける最適な臨床パラメータについては、依然として不明な点が多く残されています。現在の臨床的な使用方法は、通常、経験則やメーカー推奨のガイドラインに基づいており、根拠に基づいた裏付けは限定的です14。さらに、これまでの研究のほとんどはレーザーの抗菌効果を評価したものであり、レーザー治療の重要な側面である歯周組織への熱損傷のリスクについては、比較的注目されてきませんでした。一般的に、外根面の温度が10°C以上上昇すると、歯根膜や周囲の骨に永続的な損傷が生じる可能性があるとされています15。管理された実験条件下で、抗菌有効性と熱的安全性の両方を体系的に評価し、異なるレーザーシステムを直接的に比較した報告は見当たりません。
このex vivo研究の主な目的は、根管壁からE. faecalisバイオフィルムを除去するための3つのレーザーシステム（808 nmダイオードレーザー、1940 nmツリウムレーザー、2940 nmエルビウムレーザー）の抗菌有効性と熱的安全性を調査し、比較することでした。熱的安全性を維持しつつ効果的な細菌除去を実現するパラメータの組み合わせを特定するため、本研究では臨床的に関連のある照射パラメータを評価しました。これらの知見が、臨床医が根管消毒のための安全で効果的なレーザー補助的アプローチを選択するのに役立つことが期待されます。
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プロトコル
本研究は、同済大学医学院附属上海市第四人民病院の倫理基準に従って実施され、施設審査委員会（承認番号 2026013-01）の承認を得た。本研究に使用した抜去人歯は、矯正歯科的または歯周病的な理由で抜歯を受けた患者から収集した。検体採取前に、すべての参加者から書面によるインフォームドコンセントを得た。本研究の目的で、追加の臨床的介入は行わなかった。本研究は、抜去人歯の使用に関する施設要件に従って実施された。
検体の準備および選択基準
上海第四人民病院の同済大学附属口腔科より、最近抜去された単根の永久歯（下顎切歯および小臼歯）計141本を提供してもらった。すべての歯は、矯正歯科的または歯周病的な理由により抜去されたものである。各患者からインフォームドコンセントを得た。本研究の組み入れ基準は、歯周プローブで測定して根長が10 mm以上であること、う蝕や亀裂のない健全歯であること、根形成が完了していること、およびSchneider法による根管湾曲度が10度未満であることとした。除外基準は、多根管、根管石灰化、内部吸収、または過去に根管治療を受けたことがある歯とした。抜去後、歯周スケーラーを用いて、可視的な歯石および軟組織の残渣をすべて除去した。その後、脱水を防ぐため、歯は0.9%生理食塩水中で4°Cで保存し、すべての実験は抜去から3ヶ月以内に行った。検体は、あらかじめ定義された交互割り付けシーケンスを用いて実験群に割り当てた。具体的には、各群の必要サンプル数に達するまで、検体を各群に順次交互に割り付けた。正式なa prioriパワー計算は行わなかった。サンプルサイズは、過去の同等のex vivo研究、評価した照射パラメータの組み合わせ数、および適格な抜去歯の入手可能性に基づいて決定した。
根管の形成および滅菌
各歯冠を、連続水冷下で低速ダイヤモンドソーを用いてセメントエナメル接合部で除去し、標準的な10 mmの根端セグメントを得た。作動長は、サイズ10のKファイルを用い、根尖孔から1 mm短い位置に決定した。根管形成には、製造元の指示に従いProTaper Universalニッケルチタン回転式システムを使用し、根尖部の形成サイズがF3に達するまで、S1、S2、F1、F2、F3の順に用いた。器具操作の間、回転式ファイルを1本使用するごとに約2 mLの5.25%次亜塩素酸ナトリウムで根管を洗浄し、1根管あたりの総洗浄量は約10 mLとした。最終すすぎとして、17% EDTA 5 mLで1分間洗浄した後、滅菌生理食塩水 5 mLで洗浄した。根管系を閉鎖系にするため、根尖孔をフローティングレジンコンポジットで封鎖した。形成後の歯根を121°Cで20分間オートクレーブ滅菌し、4°Cの滅菌リン酸緩衝生理食塩水（PBS）中に保存し、滅菌後24時間以内に細菌を接種した。
細菌株および培養条件
感染根管モデルの作製には、E. faecalis ATCC 29212を使用した。本菌株をBHI（brain heart infusion）寒天培地を用い、好気的条件下の37°Cで24時間培養した。単一コロニーをBHIブロスに接種し、37°Cで18～24時間インキュベートした。細菌懸濁液は、60 nmにおける吸光度（OD60）値が0.08～0.10となるよう調整し、0.5 McFarland標準に相当する約1.5 × 108 CFU/mLとした。
〜の確立 *E. faecalis* 感染根管モデル
感染根管バイオフィルムモデルを構築するため、セメント質からの細菌浸入を防ぐ目的で、滅菌済み根管の外面に透明なネイルポリッシュを2層塗布した。根尖孔をフローティングレジンコンポジットで封鎖した後、根尖部をコーティングし、細菌を接種できるよう根管口は未コーティングのままにした。滅菌済みのマイクロピペットを用いて、 10 µL の *E. faecalis* 懸濁液を個々の根管に注入し、液が溢れないように根管の全長を満たした。その後、接種した試料を滅菌済みの24ウェル培養プレートに個別に配置し、各ウェルにBHIブロス1.5 mLを加えた。試料を以下の条件で培養した。 37°C 好気条件下で21日間培養した。細菌の継続的な増殖に必要な栄養分を供給し、蓄積した細胞残渣を除去するため、2日ごとに培地を除去し、新鮮な滅菌済みBHIブイヨンに交換した。培地交換時にE. faecalisを追加的に接種することは行わなかった。培養期間の終了後、実験的評価に先立ち、緩く付着したプランクトン状細菌を除去するため、すべての生存サンプルをPBSで1回洗浄した。成熟したバイオフィルムの形成および象牙細管への細菌浸透を走査電子顕微鏡（SEM）で可視化するため、ランダムに選択した2つのサンプルを使用した。検体は2.5%グルタラールデヒドで固定し、 4°C 24時間おき、PBSで3回洗浄し、段階的なエタノール系列（30%、50%、70%、80%、90%、10%）を用いて脱水した（各工程10分間）。その後、縦方向に分割して風乾させ、アルミニウムスタブに固定し、金でスパッタコーティングを施した後、SEMにより観察した。
実験群およびレーザー照射プロトコル
感染した135個の根サンプルを、使用するレーザーシステムに基づいて、808 nmダイオードレーザー群、1940 nmツリウムレーザー群、2940 nmエルビウムレーザー群の3つの主要な実験群に分けた。各レーザー群には45個のサンプルがあり、それぞれを照射パラメータに従ってさらに細分化した。ダイオードレーザーは、平均出力1.0、1.5、または2.0 Wで動作させ、各出力設定を10、20、または30 sの間適用した。これにより、1サブグループにつき3サンプルとする9つのサブグループを設けた。ツリウムレーザーは、平均出力1.5、2.5、または3.5 Wで動作させ、各出力設定を10、20、または30 sの間適用し、同様に1サブグループにつき3サンプルとする9つのサブグループを設けた。エルビウムレーザーは、15 Hzの固定周波数で超短パルスモードで動作させた。パルスエネルギー10、20、または30 mJを10、20、または30 sの間適用し、1サブグループにつき3サンプルとする9つのサブグループを設けた。808 nmダイオードレーザーと1940 nmツリウムレーザーは、ともに連続波モードで動作させた。
合計で6つの追加サンプルを加え、陰性対照群と陽性対照群にそれぞれ3サンプルずつ割り当てた。陰性対照群には滅菌生理食塩水を投与し、陽性対照群には5.25%次亜塩素酸ナトリウム（NaOCl）で30 s処理した。
レーザー群に対しては、標準化された照射プロトコルに従った。光ファイバーを作業長まで根管内に挿入し、照射期間中、根尖から根冠方向へゆっくりと連続的にらせん状に動かした。単一の交換可能なファイバーではなく、レーザー専用のデリバリーファイバーまたはチップを使用した。808 nmダイオードレーザーは20 µmのエンドファイアリングファイバー、1940 nmツリウムレーザーは200 µmのエンドファイアリングファイバー、2940 nmエルビウムレーザーは40 µmのラジアルファイアリングチップを用いて照射した。デリバリーファイバーまたはチップは、約1 mm/sの速度で後退させた。根管口に達した後、再び作業長まで戻し、割り当てられた照射時間が完了するまで根尖から根冠へのらせん状の動きを繰り返した。
ツリウムレーザーおよびエルビウムレーザーでは、水支援によるレーザー活性化をシミュレートするため、照射中に根管内を滅菌生理食塩水で満たした状態に維持した。照射前に、根管口のレベルまで満たすように、各根管に約 10 µL の滅菌生理食塩水を注入した。治療全体を通して根管内を液体で満たした状態に保つため、必要に応じて各照射サイクルの前に生理食塩水を補充した。ダイオードレーザー群では、808 nm ダイオードレーザーは水への吸収率が比較的低く、根管内で直接的な光熱殺菌効果を及ぼすために使用するため、照射前に滅菌ペーパーポイントで根管内を乾燥させた。対照的に、1940 nm ツリウムレーザーおよび 2940 nm エルビウムレーザーは水への吸収率が大幅に高く、水介在性の光熱効果および光機械的効果を促進させるため、生理食塩水で満たした根管に適用した。レーザー治療は、3日間連続して1日1回繰り返した。
根表面外側の温度測定
レーザー照射の初日に、根表面外側のリアルタイムな温度変化を測定した。各根標本を室温（2°C ± 1°C）でレトルトスタンドに垂直に固定した。デジタル温度計に接続したK型熱電対を、根の長軸に対して垂直に、根表面外側の中央3分の1の領域にしっかりと接触させた。熱電対プローブは調節可能なクランプを用いて配置し、測定期間中に確実かつ一定の接触を維持するため、耐熱性粘着テープで根表面に固定した。熱電対プローブは、沸騰水（10°C）と氷水混合液（0°C）を用いて、各測定セッションの前に校正した。照射期間（10、20、または30 s）を通じて、50 ms間隔で温度を記録した。各標本について、ベースライン温度およびレーザー照射中または直後に記録された最高温度の両方を測定した。ベースラインからピーク温度までの温度上昇をΔTとして算出した。ΔTが10°Cを超えた場合を、歯周組織への潜在的な損傷の閾値とした。
微生物学的評価：コロニー計数および抑制率
レーザー処理の抗菌効果を判定するため、各レーザー処理後にサンプルを回収した。根管内は滅菌済みのペーパーポイントで乾燥させた。サンプルの相互汚染を防ぐため、各検体に対して新しい滅菌済みサイズ40のヘドストロームファイルを用い、根管壁から象牙質チップを採取した。各象牙質チップを、1 mLの滅菌PBSを含む個別のマイクロ遠心チューブに移した。チューブを30 sの間激しくボルテックスし、象牙質チップから細菌を遊離させた。各希釈段階で、細菌懸濁液10 µLを90 µLの滅菌PBSに移すことで、10−1から10−6までの10倍段階希釈系列を調製した。各希釈液のアリコート（30 µL）を個別のBHI寒天培地に塗布し、37°Cで24 h培養した。コロニーを計数し、コロニー形成単位（CFU）として記録した。各希釈液を3枚のプレートに播種し、3枚のプレートから得られた平均コロニー数を分析に使用した。プレートは計数前にコード化され、コロニー計数を行う研究者は処理条件を伏せられた状態で作業を行った。
ここで、Cは陰性対照（生理食塩水）群の平均CFU数であり、Tは実験群の平均CFU数である。
細菌増殖曲線の解析
さまざまなレーザー処理が細菌の増殖速度に及ぼす影響を、増殖曲線をプロットすることで調査した。最終レーザー処理から3日後、根管内を5 mLの滅菌生理食塩水で洗浄した。根管内の内容物を滅菌ペーパーポイントで回収し、5 mLのBHIブロスを含む遠心チューブに移した。チューブをボルテックスし、細菌をブロス中に懸濁させた。細菌懸濁液を1 × 106 CFU/mLに調整した。細菌濃度は、あらかじめ作成したE. faecalis ATCC 29212の検量線を用いたOD60測定に基づいて調整し、その後、生菌数測定により確認した。懸濁液の分注量20 µLを、滅菌済み96ウェルマイクロプレートの各ウェルに添加した。さらに、蒸発を最小限に抑えるため、各ウェルに20 µLの滅菌ミネラルオイルを添加した。マイクロプレートを37°Cに維持された分光度計付きインキュベーターに設置し、OD60を24時間にわたり1時間ごとに測定した。各OD60測定の前に、細菌懸濁液を均質にするため、マイクロプレートを約30 rpmで10秒間オービタルシェーキングした。各サンプルは5つの複製ウェルで試験した。
統計解析
すべての数値データは平均値 ± 標準偏差 (SD) で表示しています。統計解析にはSPSS Version 26.0を使用しました。データの分布はShapiro–Wilk検定を用いて評価しました。3群以上の比較には分散分析 (ANOVA) を行い、続いてペアごとの比較にTukeyの正直有意差 (HSD) 検定を用いました。2群間の比較には独立標本 t検定を行いました。パラメトリック検定を適用する前に、Levene検定を用いて分散の均一性を評価しました。分散の均一性の仮定が満たされない場合は、適宜Welchの補正を適用しました。統計的有意性は P < 0.05 と定義しました。グラフの作成にはGraphPad Prism Version 9.0を使用しました。
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結果
E. faecalisに対する異なるレーザー処置の抗菌活性
3種類のレーザーシステムによるE. faecalisへの抗菌有効性を、3回連続の処置後のCFU数で評価した。結果を図1および補足図1に示す。滅菌生理食塩水の陰性対照群では大幅な細菌増殖が認められ、コロニー数の平均グレー値は396618.7 ± 6787.5であった。5.25% NaOClの陽性対照群では、全体の平均抑制率が47.2% ± 3.0%となり、個別の抑制値は46.8%、43.1%、および51.7%であった。
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ディスカッション
本ex vivo研究では、感染した根管からE. faecalisバイオフィルムを除去するための、808 nmダイオードレーザー、1940 nmツリウムレーザー、および2940 nmエルビウムレーザーの抗菌 efficacyと熱的安全性を比較した。3つのレーザーシステムすべてにおいて、5.25% NaOClよりも高い細菌抑制効果が認められたが、抗菌 efficacyと熱プロファイルには大幅な差があった。2940 nmエルビウムレーザーは、最高の抗菌活性と根表面温度の最小の上昇を兼ね備えており、全体として最も良好なバランスを達成した。1940 nmツリウムレーザーも強い抗菌 efficacyを示したが、最大の照射パラメータでは10°Cの熱的安全しきい値を超えた。808 nmダイオードレーザーは、相対的に抗菌活性が低く、熱的安全性が劣っていた。これらの知見は、根管内消毒と歯周組織の安全性のバランスを維持する上で、レーザーの波長と照射パラメータが重要な要因であることを示している16。しかし、各波長は異なる臨床的適応、デリバリーシステム、および作用機序を持つため、異なるレーザーシス...
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開示事項
利益相反：
著者らは、本研究に関連して競合する利益がないことを宣言します。雇用、コンサルタンシー、株式保有、謝礼、または有償の専門家証言を含め、金銭的または非金銭的な利益相反は存在しません。
謝辞
本研究は、虹口区衛生健康委員会の医学研究プログラムの支援を受けて実施されました。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 0.9% 生理食塩水 | Beyotime | ST341-50ml | 歯の保存、洗浄、および陰性対照 |
| 1.5 mL マイクロ遠心チューブ | Axygen | MCT-150-C | サンプルの回収および段階希釈 |
| 24ウェル培養プレート | Corning | 3524 | バイオフィルムの培養 |
| 96ウェルマイクロプレート | Corning | 359 | 細菌増殖曲線アッセイ |
| オートクレーブ | Tuttnauer | 2540E | 準備した歯根の滅菌 |
| Brain heart infusion (BHI) 寒天培地 | BD Biosciences | 21065 | 細菌培養およびCFU計測 |
| Brain heart infusion (BHI) 液体培地 | BD Biosciences | 23750 | 細菌培養および増殖曲線分析 |
| クリアネイルポリッシュ | Beyotime | C0187 | 歯根外面の封鎖 |
| ダイヤモンドソー（低速） | Buehler | IsoMet Low Speed Saw | 歯冠の切断 |
| デジタル温度計（K型熱電対対応） | OMEGA Engineering | HH802U | 歯根外表面温度の測定 |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | American Type Culture Collection (ATCC) | ATCC 29212 | 細菌株 |
| エチレンジアミン四酢酸 (EDTA), 17% | Sigma-Aldrich | E984 | 最終根管洗浄 |
| フローアブルレジンコンポジット | 3M ESPE | 6031A2 | 根尖孔の封鎖 |
| GraphPad Prism | GraphPad Software | Version 9.0 • RRID: SCR_02798 | グラフ作成 |
| Hedströmファイル, サイズ 40 | Dentsply Maillefer | 8060301042 | 象牙質チップの回収 |
| Kファイル, サイズ 10 | Dentsply Maillefer | 80-0210 | 作製長の決定 |
| レーザーシステム, 1940 nm ツリウムドープファイバー | Menovex Medical Technology (Shenzhen) Co., Ltd. (Arpadent) | TN20 | レーザー照射 |
| レーザーシステム, 2940 nm Er:YAG | PointNix Co., Ltd. | Modular-beam | レーザー照射 |
| レーザーシステム, 808 nm ダイオード | elexxion AG | Claros Nano | レーザー照射 |
| マイクロピペット | Eppendorf | 3123063 | サンプルの接種 |
| ミネラルオイル（滅菌済み） | Sigma-Aldrich | M5904 | 細菌増殖曲線アッセイ中の蒸発防止 |
| ニッケルチタン回転ファイルシステム (F3 準備) | Dentsply Sirona | ProTaper Gold | 根管形成 |
| 1940 nm ツリウムドープファイバーレーザー用光ファイバー | Menovex Medical Technology (Shenzhen) Co., Ltd. (Arpadent) | 40 µm diameter | レーザー照射 |
| 2940 nm Er:YAGレーザー用光ファイバー | PointNix Co., Ltd. | 60 µm diameter | レーザー照射 |
| 808 nm ダイオードレーザー用光ファイバー | elexxion AG | elexxion longlife 20, 20 µm (Art. No. 1063) | レーザー照射 |
| 周波数プローブ | Hu-Friedy | PCPUNC156 | 歯根長の測定 |
| 周波数スケーラー | Hu-Friedy | SJ34-35 | 歯石および軟組織の除去 |
| リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) | Gibco / Thermo Fisher Scientific | 101023 | 洗浄および細菌の希釈 |
| ピペットチップ (10 µL, 20 µL, 10 µL) | Axygen | T-30 / T-20-Y / T-10-B | 液体の分注 |
| レトルトスタンド | Biosharp | BS-IT-01 | 歯根検体の固定 |
| 走査電子顕微鏡 (SEM) | Hitachi High-Technologies | TM40Plus | バイオフィルムのイメージング |
| 振盪インキュベーター | Thermo Fisher Scientific | MaxQ 40 | 液体培地培養のインキュベーション |
| 次亜塩素酸ナトリウム (NaOCl), 5.25% | Sigma-Aldrich | 42504 | 根管洗浄および陽性対照 |
| 分光度計/インキュベーター（マイクロプレートリーダー） | BioTek / Agilent Technologies | Epoch 2 | 60 nmにおける吸光度 (OD60) の測定 |
| SPSS | IBM | Version 26.0 • RRID: SCR_02865 | 統計分析 |
| 滅菌済みペーパーポイント | Dentsply Maillefer | Absorbent Paper Points, ISO 20, 0.02 taper, 28 mm | 根管の乾燥および細菌サンプリング |
| 熱電対プローブ (K型) | OMEGA Engineering | 800 | 温度測定 |
| ボルテックスミキサー | Scientific Industries | Vortex-Genie 2 | 細菌懸濁液の混合 |
参考文献
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