日焼け止めの有効性と耐久性を評価するための、マウスを用いたIn Vivo模擬海岸システムの構築

サマリー

本研究では、紫外線照射、海水への浸漬、波による洗い流し、および風による乾燥といった複雑な環境ストレス因子下における日焼け止めの保持率と光防御能を定量的に評価するため、マウスモデルを用いた模擬海辺システムを提示します。これは前臨床スクリーニングツールとして機能するものであり、標準化された臨床試験に代わるものではありません。

要約

紫外線（UV）放射は、皮膚の光老化、日焼け、および急性のUV誘発性皮膚損傷を引き起こす主要な環境因子である。日焼け止めは光保護の最も一般的な手段であるが、現在の評価法では複雑な海辺環境を正確に模倣できない、あるいは高コストや倫理的制約を伴うという課題がある。本研究では、複雑な環境ストレス下における日焼け止めの効果および持続性を定量的に評価するため、独自の生体マウスモデルと組み合わせた新規の模擬海辺試験システムを提案する。独自設計の試験装置は、制御可能な紫外線照射、模擬波を伴う海水浸漬、および風乾燥機構を統合している。脱毛済み BALB/c マウスに異なる日焼け止めを塗布し、標準化された120分間の模擬海岸環境サイクルに曝露した。日焼け止めの保持率は蛍光イメージングにより定量し、光保護効果はヘマトキシリン・エオシン（H&E）染色によって評価した。&E) 表皮の厚さおよび炎症性浸潤の染色。その結果、本システムは各種サンスクリーンの性能を効果的に区別できることが示された。具体的には、高保護・耐水性サンスクリーンが最も高い保持率を示し、紫外線および環境要因による損傷に対して最も優れた保護効果を示した。本プロトコルは、極端な環境を模擬した条件下でスキンプロテクション製品を探索するための、費用対効果が高く、再現性に優れ、倫理的配慮のされた前臨床スクリーニング法を提供するものであり、必須とされるヒトSPF試験の検証済み代替法というよりは、探索的橋渡しとしての役割を果たす。

概要

紫外線（UV）照射、特にUVAおよびUVBは、皮膚光老化、日焼け、および急性のUV誘発性皮膚損傷の主な原因となります^1,2,3。これらの悪影響を軽減するために、日焼け止め剤の使用が最も広く採用されている戦略です^4,5。したがって、日焼け止め剤の有効性を正確に評価することは、皮膚科学研究および化粧品業界の両方にとって極めて重要です。

現在、日焼け止めの有効性を試験する主な方法には、in vitroでの機器分析とヒト臨床試験があります^6,7。石英プレートや人工皮膚を用いたUV分光光度法などのin vitro法は、コスト効率が高く、再現性に優れています^8,9。しかし、生きた皮膚上での日焼け止め膜の形成、耐水性、および洗い流しに対する耐性といった複雑な動態をシミュレートすることはできません。対照的に、ボランティアの背中で最小紅斑量（MED）を測定するヒト臨床試験は、国際標準化機構（ISO）（SPF：ISO 24444、耐水性：ISO 16217）およびFDAのガイドラインに従った sunscreen protection factor (SPF) を決定するためのゴールドスタンダードと見なされています^{10,11,12,13,14}。信頼性は高いものの、臨床試験は費用と時間がかかり、個体差の影響を大きく受け、さらに倫理的な制約が厳しいため、特に過酷な環境や潜在的に有害な環境条件下での試験においては困難が伴います。

既存の評価手法における大きな制限は、実際の海辺の環境を包括的にシミュレートできないことです。海辺での活動中、日焼け止めは高塩分濃度の海水への浸漬と波による洗い流しという相乗的な分解プロセスにさらされます^15,16。これらの要因は、塗布した製品の密着安定性と保護持続時間を著しく低下させます。これらの制限を克服するため、本研究ではBALB/cマウスモデルを用いた新しい擬似海辺試験システムを導入します。このシステムは、UV強度、海水の塩分濃度、水温、波力、風速を含む複数の主要な環境パラメータを、単一の高度に制御可能なプラットフォームに統合したものです。このハードウェアに定量的蛍光イメージングと組織学的解析を組み合わせることで、本プロトコルにより、日焼け止めの保持率と生理学的保護効果の両方を精密に評価することが可能になります。この手法は、複雑で実用的な海洋シナリオにおける日焼け止めの性能を評価するための、信頼性が高く、低コストで効率的なソリューションを提供します。

プロトコル

脊椎動物を用いるすべての実験は、広東ライディ生物医学研究センター株式会社の実験動物管理および倫理委員会の承認（承認番号：LDSW2025050-4）のもと、機関のガイドラインに準拠して実施された。

1. 模擬海水環境室の設置

1. 試験チャンバーを組み立てる。このチャンバーは、透明で気密性のある金属製の箱（寸法：長さ40 cm、 × 30 cm 幅 × 動物用のアクセスポートを備えた高さ30 cmの容器。
2. UVシミュレーション装置を統合する：チャンバーの上部にUVランプ（6W）を設置し、約2 mW/cm²の強度を確保する²これは、平均的な強い真夏の正午の海岸付近の日光を模擬したものである。
   注意：紫外線は目および皮膚に危険です。紫外線装置を使用する際は、チャンバーが完全に密閉されていることを確認し、適切な安全ゴーグルおよび保護衣を着用してください。
3. 水環境ユニットを統合する。内蔵水槽に人工海水を満たす。
4. 純水1 kgに対して市販の海水塩を1 kgの割合で溶解することにより、人工海水を調製する。± 0.05 kg）の塩を30 L（± 0.5 L）の水。水温コントローラーを設定し、25℃の一定温度を維持する °C (± 1 °C）。
5. 波打ち際の中程度の波による機械的摩擦を模擬するために、約10 L/minの流量で波発生装置を起動する。
6. ブロワーファンを配置して、動物飼育エリアに気流を向ける。海辺のそよ風を模擬するために、風量を1分あたり35立方フィート（CFM）に調整する。
7. すべてのコンポーネントを中央制御インターフェースに接続する。テストに先立ち、制御システムに目標環境パラメーターを入力し、対応する測定機器を用いてキャリブレーションを行う。
   注：この初期検証は、外部の携帯型デジタルUV放射計、防水温度計、および風速計を用いて行い、UV強度（2 mW/cm²）、水温（25 °C）および風速（35 CFM）が生物学的実験を開始する前に所定の設定値と一致していることを確認する。
8. 実験中に、UVランプ、波発生装置、および排水をオンまたはオフに切り替える を介して 交互に浸漬および露出の各段階を正確に実行するためのインターフェース。

2. 動物モデルの調製

1. 成虫を飼育する BALB/c 標準条件下で飼育されたマウス（体重約20 g～25 g）を用い、実験開始の1週間前から馴化させる。
2. 1.5% イソフルランを用いて、マウスを短時間麻酔する を介して ストレスを最小限に抑えるため、吸入麻酔を行う。動物用脱毛装置を用いて、マウスの背部の毛を事前に剃る。
3. 次に、市販の化学的除毛クリームをマウスの背部皮膚に均一に塗布する。3〜5分後、温かい湿ったガーゼで毛を優しく拭き取る。
   注意：組織学で使用される化学的除毛剤およびパラホルムアルデヒドは毒性および刺激性がある。これらは換気の良い場所で取り扱い、保護用手袋を着用すること。廃棄：すべての化学廃棄物（パラホルムアルデヒド）および生物学的廃棄物（動物の死骸および組織）は、機関および地域の規制要件に厳密に従い、指定されたバイオハザードおよび化学廃棄物容器に廃棄すること。
4. 脱毛処理後のマウスをさらに2日間飼育して回復を待ちます。実験前に背中側の皮膚を視覚的に確認し、脱毛処理による発赤や刺激が完全に消失していることを確認してください。
5. 黒色のマーカーを用いて、露出した背部の皮膚に十字線を描き、領域を4つの明確な象限（象限1～4）に分割する。

3. 日焼け止めの塗布および前処理

1. テスト用サンスクリーンを調製する。市販のサンスクリーンを無作為に3種類選び、A、B、Cとする。
2. 指定された部位に日焼け止めを20 μLマイクロピペットを用い、滅菌済みの手袋を着けた指先で10秒間優しく円を描くように均一に塗布し、以下の通り均一な皮膜が形成されるようにする：
   注： 指先に加える圧力をすべての象限で一定に保つこと。不均一な塗布や圧力の過剰は、フィルム厚さの不均一を引き起こし、その後の保持能評価の再現性を直接損なう可能性がある。
3. 第1象限（左上）：20 mg/cmを適用² サンスクリーンAの
4. 第2象限（右上）：20 mg/cmを適用² 日焼け止めBの
5. 第3象限（左下）：20 mg/cmを適用² 日焼け止めCの
6. 第4象限（右下）：処理を行わず放置（保護なし対照）。
7. マウスを5分間安静状態に置き、日焼け止めが背部の皮膚に均一かつ安定して分布するようにする。

4. 日焼け止めの残留評価

1. サンスクリーンA、B、およびCに、安全な蛍光マーカー（重量比0.01％のSulfo Cy7）を混合する。
2. セクション3で述べたように、蛍光標識された日焼け止めをマウスの背部皮膚に塗布する。
3. 背中側の皮膚の初期ベースライン蛍光画像（F0）を、 生体内 蛍光イメージングシステム
   注：各動物において、露光時間および焦点面を含む画像取得パラメータが厳密に固定されていることを確認すること。不正確なベースライン（F0）の取得は、日焼け止めの残留率の最終計算結果を無効にする。
4. マウスを試験用チャンバーに入れます。紫外線ランプを消灯し、水温を25℃に設定します。 °C.
5. 水位を上げ、マウスの頭部が水面より常に安全に保たれた状態で30分間の浸水フェーズ（泳行）を行うように波発生装置を作動させる。
6. 次に、波発生装置をオフにし、チャンバー内の階段状の金属製プラットフォームを露出させるために水位を低下させる。マウスがプラットフォーム上で安全に休憩できるように、30分間維持する（離水フェーズ）。
7. 30分間の浸水工程と30分間の脱水工程をもう1サイクル繰り返す（合計120分）。
8. 曝露後の蛍光画像（F1）を以下の条件で取得する 生体内 イメージングシステム
9. 式を使って保持率を計算する：
   保持レベル = (F1 / F0) × 100%      (1)
10. 式を使用して相対蛍光強度を計算する：
    蛍光強度 = (F1(X) / F1(A)) × 100%      (2)
    F0はベースラインの蛍光強度、F1は実験後の蛍光強度、F1(A)はサンスクリーンAを塗布した部位の実験後の蛍光強度、F1(X)はサンスクリーンBまたはCを塗布した部位の実験後の蛍光強度である。
    注意：蛍光観察実験中は、紫外線による蛍光の消光を防ぐため、UVランプが点灯しないようにしてください。総照射時間は120分であり、実験中は動物の状態を常に監視してください。' 浸漬期間中の呼吸数および活動状態を確認し、苦悶や疲労の兆候がないことを確認する。

5. 光保護効果の検出

1. セクション3で説明されているように、標準的な（蛍光のない）日焼け止めをマウスの背部に塗布する。
2. マウスの首上部に、黒色の紫外線遮断テープを貼付し、紫外線遮蔽内部コントロールとして用いる。皮膚のベースライン状態を記録する。 を介して マクロ写真撮影
   注意：波洗浄工程中に水の浸入やテープの意図しない剥離を防ぐため、テープの端部をしっかりと押さえ付けてください。テープが剥離した場合、内部コントロール領域が紫外線および水に曝露され、組織学的ベースラインが混濁する可能性があります。
3. セクション4で記述したのと同じ水位循環プログラムを、UV模擬装置を稼働させた状態でマウスに適用する。すなわち、水位を30分間上昇させ（浸漬段階）、次に30分間低下させ（露出段階）る操作を、合計120分間で2サイクル繰り返す。
4. マウスをチャンバーから取り出し、マクロ撮影により皮膚の紅斑、剥離、または硬化の有無を記録する。
   注：チャンバーの寸法（40 cm）に基づく × 30 cm × 30 cm）および動物' 光源に対する活動空間において、120分間のサイクル中に照射される累積UV線量は約2.5 J/cmと推定される²この用量では、測定可能な表皮の肥厚および急性炎症を効果的に誘導しつつ、マウスの安全性を確保し、動物福祉の限界を厳密に維持することができる。³.
5. 実験終了時点で、米国獣医師会（AVMA）の『動物の安楽死に関するガイドライン』に厳密に従い、深麻酔状態（イソフルラン麻酔）下で頸椎脱臼法によりマウスを人道的に安楽死させ、その後の組織学的評価のために皮膚組織を採取する。背中側の皮膚組織を4つの象限領域およびテープで保護した領域からそれぞれ摘出する。
6. 4％パラホルムアルデヒドで組織を24時間固定した後、標準的な脱水、パラフィン包埋および切片作成を行う。
7. ヘマトキシリンおよびエオシン（H&E）で切片を染色する&E) パラフィン切片をキシレンで脱パラフィンし、段階的エタノール溶液で再水和した後、ヘマトキシリンで5分間染色し、流水で洗浄し、エオシンで1分間カウンター染色する。その後、脱水を行い、樹脂性封入剤で封入する。
8. 光 microscope 下で染色した切片を観察する。表皮の厚さを測定し、侵入している炎症細胞を数えることで皮膚炎症の程度を評価する。
   注：このサイクル中に照射されるUV線量は、有効性評価のために急性紅斑を誘導するのに十分であるが、試験サイクル後にマウスが重度の全身的損傷の兆候を示さず、通常の身体活動を維持していることからも明らかなように、安全で致死的でない閾値内に十分に収まっている。

6. 統計解析

1. GraphPad Prism 9.5 を用いて統計解析を行います。定量変数は平均値として示します。 ± 標準偏差。一元配置分散分析（one-way ANOVA）を行い、その後テューキー法（Tukey）を用いて多重比較検定を実施する。’多重群間比較のための事後検定。統計的有意性は * で示した。p < 0.05, **p < 0.01、nsは有意差なしを示す（p > 0.05).

結果

試験システムの環境特性評価
～の前に in vivo 評価のため、シミュレーション海辺チャンバーの物理的パラメータを校正し、高い環境再現性を確保した。UVシミュレーションユニットには、340 nmにピーク波長を持ち、300から420 nmの広帯域スペクトルを放出する6 Wランプを使用した。この特定の分光分布により、主たるUVA放出に加え、生物学的に重要な UVB の一部が伴い、地表に到達する自然な正午の太陽光の典型的な紫外線スペクトルを効果的に模倣している。¹⁷造波機は10 L/minの流量で動作させ、緩やかな海岸の波による洗い出しに相当する、軽微な流体せん断応力を発生させた。さらに、送風ユニットにより35 CFMの一定の風量を提供し、これは試験領域上の風速で約3～4 m/sに相当する。これは、海岸沿いの気象条件に典型的な軽風（ビューフォート風力階級3）と相関している。¹⁸これらの複合的なパラメータにより、一般的な海辺のアクティビティ中に経験する周期的な機械的および環境的なストレス要因を確実に再現しています。

日焼け止め保持能の評価
まず、擬似海岸装置を組み立てた。図1Aに示すように、本システムは主に、風による乾燥、UV照射、海水への浸漬、および集中制御にそれぞれ使用されるブロワーファン、UV照射システム、擬似海水タンク、および制御システムで構成されている。マウスを装置内に配置しシステムを始動させることで、海岸における浸漬相と露出相の条件を正常に再現することができた（図1B）。このセットアップに基づき、まずこれらの条件下での日焼け止めの保持能を調査した。最初に、蛍光マーカーで標識した市販の日焼け止めA、B、およびCをマウスの背部皮膚に塗布した。続いて、これらのマウスをシミュレーション装置内で、30分間の浸漬（水泳を模倣）と30分間の露出相（海岸での日光浴を模倣）からなる交互サイクルに供した。波と風の完全なサイクルを経て2時間後、皮膚に保持された蛍光をin vivoイメージングを用いて検出した。図2A–Bに示すように、シミュレーション前と比較して、すべての日焼け止め群で蛍光強度の低下が認められ、海水の波による洗い流し効果によって相当量の日焼け止めが除去されることが示された。その中で、日焼け止めCを塗布した領域は比較的高い蛍光量を保持し、日焼け止めBは中程度の保持率を示し、日焼け止めAは最も低い保持率を示した（図2C）。これは、日焼け止めCおよびBが比較的強い保持能を有していることを示している。これらのデータは、本装置が複雑な環境ストレス下において、異なる処方の耐久性を定量的に区別できることを裏付けている。

光保護効能
これらの日焼け止めのUV防御効果を擬似的な海辺の環境でさらに調査するため、マウスの背部皮膚の肉眼観察を行った。以下に示すように、 図3Aおよび3B未保護の対照群では、顕著な紅斑、赤み、および日光皮膚炎（サンバーン）を特徴とするUV誘導性損傷が認められた。対照的に、日焼け止めを塗布した部位では、日光皮膚炎の症状が有意に軽減していた。さらに、組織学的解析により Hを使用して&E染色を行い、 は、前述のマクロレベルでの観察結果と一致していた（図4A–B）。無保護の対照群を海辺シミュレーターに曝露させたところ、表皮の顕著な肥厚と炎症細胞の著明な浸潤が（図4C真皮において観察され、この模擬海辺試験システムが、実際の海辺の環境における皮膚の日焼けを効果的に再現できることが示された。日焼け止めの塗布により、これらの病理学的変化は有意に軽減された。特に、日焼け止めCを塗布した皮膚組織の表皮厚と炎症細胞浸潤は、同様の環境ストレスを受けたUV遮断内部コントロールと極めて類似していた。これは、日焼け止めCが高い保持率と固有の光保護特性を持つため、模擬海洋環境において最適な保護効果を発揮することを示唆している。

図1擬似海辺試験システムの概要。 (A装置の概略図。B）試験チャンバー内のマウス。このカスタムメイドの試験チャンバーは、UV照射装置、波発生器付きの水槽、およびブロワーファンを統合しており、実際の海辺の環境を効果的にシミュレートしている。本図は著者らによって作成されたものであるため、著作権上の問題はない。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図2日焼け止め残留量の蛍光分析 (A) 120分間の実験前後のマウス背部皮膚の代表的な蛍光画像。 (B) 蛍光保持能の定量分析 (C）相対蛍光強度分析。データは平均値として提示する。 ± SD（n = 5）。統計解析は、一元配置分散分析（one-way ANOVA）およびそれに続くTukeyのポストホック検定を用いて行った。*p < 0.05, **p < 0.01. こちらの図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図3環境曝露後におけるマウス皮膚の肉眼的外観。 (A) 擬似海辺環境に120分間曝露させた後のマウス背部皮膚の代表的な肉眼像。(B）日焼け止めで保護していない対照領域と、日焼け止めで保護した領域およびUV遮蔽した内部対照（正常）領域を比較し、紅斑と剥離の発生を示した局所拡大図。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図4光防御能の組織学的評価 (A) 代表的なH&環境曝露後のマウス背部皮膚の異なる処置部位におけるH&E染色切片。インジケーター線は測定した表皮の境界を示す。スケールバー = 250 µm. (B) 各指定領域における表皮厚の定量分析。 (C炎症細胞相対数の定量的評価（%）。UV遮断内部コントロール（Normal）をベースライン（100%）とした。データは平均値として提示している。 ± SD (n = 5)。統計解析は、一元配置分散分析（one-way ANOVA）およびそれに続くTukeyのポストホック検定を用いて行った。*p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001. こちらの図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

ディスカッション

本研究では、生きたマウスモデルと組み合わせた多因子模擬海岸環境試験システムを新たに開発し、その有効性を確認した。本統合プロトコルは革新的な装置を提供するにとどまらず、複数の環境ストレス要因が相互作用する条件下において、日焼け止めの持続性および光保護効果を動的に評価することを可能にする。これにより、単純化された in vitro アッセイおよび複雑な人間の臨床試験と同様に、本手法は皮膚バリア製剤が実際の海洋環境下でどのように機能するかを理解するための包括的な前臨床プラットフォームを確立する。

本プロトコルが従来法に比べて有する主な利点は、高い環境再現性にある。標準的な耐水性試験では、通常、実験室の水槽を用いた静的水中浸漬が行われる¹⁹。対照的に、本システムは波動による機械的摩擦、高塩分海水による浸透圧ストレス、風による蒸発作用、および持続的な紫外線照射を統合している。これらの要因は相乗的に作用して日焼け止め膜を分解し、はるかに厳しく現実的なストレス試験を提供する。蛍光保持能の評価中は、蛍光体の消光を防ぐために紫外線ランプをオフにしたことに注意すべきである。したがって、この特定の試験は機械的洗脱および浸透圧ストレスに対する物理的耐久性を評価するものであるが、紫外線誘導的な化学的劣化要因は含まれない。これを補うため、その後の組織学的評価では紫外線モジュールをオンにして実施し、実用効果について包括的な評価を行った。その結果、すべての日焼け止めが一定の基礎的保護効果を示したものの、保持率（図2）およびそれに対応する組織学的保護（図4）は、製剤によって有意に異なった'これらの複合的な動的力に対する耐性。

使用 BALB/c マウスは優れたモデルを提供する 生体内 皮脂分泌、経表皮水分損失、動的な皮膚運動といった、人工皮膚モデルでは再現できない生物学的変数を考慮したプラットフォーム。120分間のサイクル中に照射される紫外線量は厳密に制御され、被曝した皮膚領域に急性の日焼けを効果的に誘導する一方で、全身性の毒性や重度の損傷を引き起こさず、BALB/cマウスにおける倫理的許容範囲内に厳密に保たれた。さらに、1匹のマウスを複数に分割することにより'個体間の生物学的変動を排除するためにサンプルを4象限に再分割したことで、異なる日焼け止め製品間の高精度な対応比較が可能となった。

このプロトコールにおける重要なステップは、脱毛後のマウス皮膚が完全に回復していることを確認することです。基礎的な刺激が残っていると、組織学的評価結果が混濁するためです。さらに、日焼け止め膜の均一な塗布、試験前の環境パラメータの安定した較正、および浸水および露出段階の正確な時間管理は、ロット間の高い再現性を確保するために不可欠です。トラブルシューティングに関しては、いくつか予測可能な問題が生じる可能性があります。日焼け止めの塗布が不均一である場合、ピペットの吐出量を再較正し、穏やかな円運動で塗布を行ってください。脱毛による紅斑が持続する場合は、回復期間を延長するか、該当する動物を除外してください。浸水中の動物の疲労を防ぐため、活動状態を厳密にモニタリングし、浸水段階中は休憩用の台が常に利用可能であることを確認してください。

このモデルの限界は、マウスの皮膚と人間の皮膚との間にある解剖学的および生理学的な差異（例えば、毛包密度および表皮の厚さ）にある。マウスの皮膚は毛包密度が高く、表皮がより薄いため、日焼け止め膜の形成に影響を与える可能性がある。多数存在する毛包の陥入部はマイクロレザーバーとして機能し、有機性製剤に比べて粒子状（無機性）日焼け止めの機械的保持を促進する可能性がある。このモデルは製剤のスクリーニングにおいて信頼性の高い比較ツールであるが、最終的なSPF表示のためにはヒトを対象とした臨床試験が依然として必要である。本システムの将来の応用範囲は広い。日焼け止めにとどまらず、本装置は厳しい環境条件下において、他の外用化粧品、バリアクリーム、創傷被覆材、さらには紫外線保護繊維の耐久性を評価するためにも応用可能である。本システムの導入により、R&Dプロセスは、ヒト試験に進む前に化粧品化学者および皮膚科学研究者に対して、迅速かつ費用対効果が高く、倫理的なスクリーニング手法を提供する。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
エオシン	Macklin	770427	H&E染色のために使用
エタノール	Macklin	E809059	H&E染色のために使用
除毛クリーム	Veet	TMG-001	産毛の除去に使用
ヘマトキシリン	Macklin	H810910	H&E染色のために使用
Image J			画像解析に使用
生体イメージングシステム	Perkinelmer	IVIS Lumina III	蛍光保持の検出に使用
イソフルラン	RWD Life Science	R510-22-10	マウスの麻酔に使用
パラホルムアルデヒド	Biosharp	BL539A	皮膚組織の固定に使用
シェーバー	Chemmole	CM700015	大部分の除毛に使用
塩化ナトリウム	Macklin	S805285	模擬海水の作製に使用
Sulfo Cy7	Ruixibio	R-Z54515	日焼け止めの標識に使用
UVランプ	Kanfu Lighting Technology	T5-6W	紫外線の照射に使用
キシレン	Macklin	X821391	H&E染色のために使用