この実験的なアプローチのための完全なテキストのプロトコルでは、利用可能です<a href="http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb1110/current/abstract?hd=author,Powers]">細胞生物学におけるカレントプロトコール</a> 。

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アフリカツメガエル女性から卵子を入手

Obtaining Eggs from Xenopus laevis Females

、そのまま溶解、及び/または分画アフリカツメガエルの卵は、実験の様々な場合に便利です。このプロトコルは、産卵を誘発卵を収集し、dejelly、及び損傷した卵を除去するために卵をソートする方法を示しています。

アフリカツメガエル（Xenopus laevis）の卵は、そのままの状態、溶出後、および／または分画後の状態で、幅広い実験に有用です。本プロトコルでは、産卵を誘導する方法を説明します。

Xenopus labisの卵抽出物は、核の構築や核タンパク質の輸送などの細胞内イベントをin vitroで再構成するための、細胞質およびオルガネラ材料のソースとして有用です。もちろん、卵抽出物を使用する前に、まず雌のカエルから卵を得る必要があります。こんにちは、私はマリー・クロスです。ジョージア州アトランタのエモリー大学細胞生物学部のマリーン・パワー博士の研究室で大学院生をしています。本日は、成熟したopus lavisの雌からゼリー卵を採取し、脱ゼリー化する方法について解説します。この手順には、妊娠したmarereを用いて卵を産ませるためのカエルのプライミング、ヒト絨毛性ゴナドトロピンを用いて卵を産ませるための血清性ゴナドトロピンの導入、および不良卵や細胞の選別が含まれます。それでは始めましょう。卵を産出させるため、まず成熟した雌のカエルに妊馬血清性ゴナドトロピンを投与してプライミングを行います。プライミングの手順を開始するには、カエルを飼育するための100 mM NaClを含む水槽を準備します。注射後、プライミング中のカエルは、1リットルあたり約1匹の密度で飼育してください。カエルを18 °Cで飼育することにより、最適な卵生産が維持されます。1 mil シリンジに取り付けた27ゲージの針を用いて、200 units/mil のPregnant mare serum gonadotropinを 0.5 mil、カエルの背側リンパ嚢に皮下注射します。プライム状態のカエルを100 mMの塩化ナトリウムを含む水槽に戻します。2〜3日後、100 units/mLのヒト絨毛性ゴナドトロピンを0.5 µL注入し、再び背側リンパ嚢に皮下注射することで産卵を誘導します。注射後、各カエルを100 mMの塩化ナトリウム溶液5 Lに入れます。カエルによって卵の質が異なるため、個別の容器に分けて入れることが推奨されます。ヒト絨毛性ゴナドトロピンの注射から約16〜22時間後、カエルをきれいな水槽に移し、卵をビーカーに回収します。注射部位に感染の兆候がないか、1〜2日間カエルを観察することが推奨されます。この段階では、各卵は透明なゼリー層に包まれており、卵同士が接触するのを防いでいます。ゼリー状の卵を洗浄するため、卵を一度すすぎ、2%L-cysteine pH 8で処理した後、カエル1匹あたり100 µLの2%L-cysteine溶液に入れ、約5分間インキュベートし続けます。室温で、5分後に卵を緩やかに周期的に攪拌してください。システイン溶液をデジェ卵から注ぎ捨て、0.25 x modified ringer溶液で3回洗浄します。解剖顕微鏡の下で、卵を100 mmのガラス製ペトリ皿に注ぎ、不純物を除去します。パステールピペットを用いて、ペトリ皿から不良卵を取り除きます。成熟したxip卵は、上半分が濃い色素を持ち、下半分は淡色をしています。成熟卵の濃色半球の中央には、卵母細胞の成熟を示すピンポイントサイズの白い斑点が見えるはずです。良好な卵とは、色素沈着が均一なものを指します。この白い点がないものは卵母細胞であるため、除去してください。白く肥大していたり、色素沈着が不均一な卵も同様に除去する必要があります。特に質の悪い卵は、半球間の境界が完全に不明瞭な白いふわふわとした球体に見えます。卵溶解バッファーを注ぎ、その後、卵が流れ出ないように注意しながらバッファーを慎重に捨てるという操作を2〜3回繰り返し、選別した卵を洗浄してください。これで卵を溶解し、抽出液を調製することが可能です。これまで、成熟したxenopus lavisの雌から卵を採取し、除ゼリー化する方法について説明しました。粗卵抽出液の調製方法、および分画卵抽出液を用いたin vitro核再構成の方法を紹介している、他の2つのビデオもぜひご覧ください。以上です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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Emory University.  、そのまま溶解、及び/または分画アフリカツメガエルの卵は、実験の様々な場合に便利です。このプロトコルは、産卵を誘発卵を収集し、dejelly、及び損傷した卵を除去するために卵をソートする方法を示しています。

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