環境試料中のバクテリオファージの検出

1. 下水やファージを含む水のサンプルを取得します。
2. サンプル 1:10 と 1: 100 Tris バッファーを使用して希釈します。Tris バッファー 9 mL に文化の 1.0 mL を転送し、2 番目の十倍の希薄によってこれを行います。
3. スチームバスやオートクレーブにそれらを置くことによって軟寒天培地 (0.7% 寒天またはトリプチ豆乳寒天培地 3 mL チューブあたり) の 3 つの管を溶かします。
4. 45 ° c. に調整する寒天培地の温度を許可するように 15 分間 45-48 ° c の水浴の寒天を配置します。
5. 最初のチューブにエシェリヒア属大腸菌¹と原液のサンプル 1 mL のログ相スープ文化の 1 mL を追加します。
6. 水浴と軽く 2-3 s の懸濁液を混合する手の間ロックからチューブを削除します。
7. ペーパー タオルの管から水を拭くし、下の寒天 (通常寒天またはトリプチ豆乳寒天) を含む事前に準備されたペトリ皿に寒天を注ぐ。
8. すぐに上の寒天を広めるためプレートを回転させます。寒天は、全体の表面を覆うことを必ずください。
9. 軟寒天培地、細菌と各サンプル希釈 (図 2) 1 mL に 1 mL を使用しての他の 2 つの管で手順 5-8 を繰り返します。
10. 寒天が固化した後、シャーレを反転し、48 h. ノック、シャーレのふたを水分の 37 ° C で孵化させなさい。プラーク落ちる湿気の寒天培地の表面に広がるウイルスが発生します。
11. 、孵化後各希釈 (図 3) 上のプラークの数をカウントし、元のサンプルのバクテリオファージの集中を計算します。サイズや斑の外観の主要な相違点を記録します。

図 2。ファージ列挙体の上の寒天を使用して細菌の芝生の準備のための手順。

図 3。細菌の芝生のバクテリオファージのプラク。

¹大腸菌の菌株 ATCC 15597 通常下水試料からプラクの最大の番号が生成されます。栄養やトリプチ醤油スープ 100 mL を含む 250 mL 三角フラスコで一晩と 35 ° c. に条件を振って下培養それ成長する必要があります。3 h のファージ アッセイする前に 100 mL の栄養やトリプチ醤油スープと 35-37 ° C で揺れ水お風呂の場所を含む新鮮なフラスコにこの文化の 1 つの mL を接種します。これは成長のログの段階で細菌がいる保証されます。