血液回収 II

マウスやラットからの採血は、さまざまな科学的研究に必要であり、研究者は特定の実験目標を達成するためにさまざまな方法を開発しています。

第1回では、一般的な採血の考慮事項について説明し、眼窩後眼窩の眼出血、尾の切り傷と切り傷、および心臓内採血法をレビューしました。ここでは、顔面静脈、顎下静脈、伏在静脈、および大腿静脈からの採血の手順を概説します。これらの方法は侵襲性が低く、麻酔を必要としないため、麻酔薬の使用が血液結果やその他のデータを混乱させる可能性がある場合に最適な方法になります。

マウスの顔面静脈から血液サンプルを採取する手順から始めましょう。マウスには、頬を横切る簡単にアクセスできる顔の静脈があります。手順に適した機器を選択することから始めます。基本的には、採血用の小型遠心チューブと、さまざまなサイズで利用できるランセットが必要です。正しいランセットの選択は、動物の年齢、性別、体重、および収集するサンプルのサイズによって異なります。ランセット選択の詳細については、テキストプロトコルを参照してください。

スクラットテクニックを使用して動物を拘束することから手順を開始します。適切な拘束は、頭の左右の動きを最小限に抑え、ランセットによる正確で安全な静脈穿刺を確保するのに役立ちます。グリップがきつすぎると、血流が制限され、収集量が減少する可能性があります。動物が拘束されたら、外側眼瞼の下の目の長さと尾側の目の幅を測定することにより、顔面静脈のおおよその領域を見つけます。ランセットの先端で、顎の骨が終わるポイントを優しく感じます。容器に穴を開ける際の精度を高めるために、マウスを横向きに配置することをお勧めします。

次に、挿入部位で、先端がわずかに鼻を向くようにして、ランセットを皮膚表面に対して垂直に保持します。ランセットの先端が尾側を向いていると、外耳道に穴が開いて耳から出血するため、これは非常に重要です。静脈に穴を開けるには、しっかりと押して、ランセットショルダーまで皮膚を突き刺します。除去すると、血液が流れ始めます。流れを補助するには、頭を心臓より低くして動物を配置します。出血を止めるには、穿刺部位を吸い取って止血を達成し、過度の失血を防ぎます。最後に、首筋への圧力を解放し、動物をケージに戻します。収集量は異なりますが、サバイバル採血の最大量を超えないようにすることが不可欠です。推奨される最大収集量の詳細については、Blood Withdrawal Oneビデオのテキストプロトコルを参照してください。シリアルサンプルは、使用する側を交互に取る事が可能です。どちらの側も5〜7日ごとよりも頻繁に使用しないでください。

それでは、顎下静脈ブリード法を確認しましょう。これは顔面静脈出血の技術と非常によく似ていますが、機器にはバリエーションがあり、出血手順には微妙な違いがあります。

顎下静脈はマウスの下顎に沿って走り、顔面静脈と収束して頸静脈に入ります。ランセットの代わりに、この方法は針を使用して実行されます。しかし、ランセットと同様に、針ゲージの選択は、年齢、性別、動物の体重とサンプルサイズに依存します - 詳細については、テキストプロトコルを参照してください。

まず、顔面静脈出血と同じ方法で動物を首筋に切り、頭の左右の動きが最小限に抑えられるようにします。リコール - 握りすぎると採血量が減少することがあります。マウスを拘束しながら、口角から顔を横切る線と、目の外側眼角からの線を想像してください。これらの線の交点は、顎下静脈のおおよその面積です。これは、口角の尾側、顎のラインの少し下に見つかった小さな無毛のくぼみと一致しています。

精度を向上させるには、動物を横臥位に置きます(3.6.1)。次に、針を皮膚の表面に対して垂直に持ち、しっかりと押すように挿入します。斜角の先端を超えて針を挿入しないでください、それを超える挿入深さは、頭、首、口腔にある筋肉、神経、その他の血管に外傷を与える可能性があるためです。針を抜くと、血液が流れ始めます。顔面静脈出血の場合と同様に、マウスの頭を心臓より低くして配置し、血流を助けます。最後に、穿刺部位を吸い取って止血を達成し、首筋への圧力を解放して動物をケージに戻します。

それでは、伏在静脈から血液を採取する方法を学びましょう。この静脈は、足根関節を背側に、次に横方向に走る表在性の血管です。

この手順に必要な機器には、ラット用の柔軟なプラスチック製の拘束装置、またはマウス用の改造された50ミリリットルのプラスチック製円錐管を使用できる拘束装置が含まれます。チューブの端は呼吸穴を確保するために切り取られており、キャップの端から幅半インチ、長さ2インチの長さのスロットが切り取られていることに注意してください。動物の安全のために、端は血栓テープで覆われています。この手順では、3 ccの注射器と長さ0-2の非吸収性縫合糸、綿棒付きの3剤抗生物質軟膏を使用して製造された止血帯、皮膚と血滴の間の防湿バリアとして使用するため、バリカン、静脈穿刺用の22ゲージ針、採血用のヘマトクリットチューブも必要です。

マウスを拘束するには、マウスをチューブに入れ、最初に鼻を動かします。次に、後ろ足をスロットにそっと導き、人差し指と親指を使用して安定させます。その後、ホックから窒息まで脚の外側から髪を剃ります。次に、三重抗生物質軟膏の非常に薄い層を無毛領域に塗ります。その後、止血帯をできるだけ頭蓋に当てて締めます。膝から足首にかけて外面を横切る伏在血管がいっぱいになり始め、盛り上がって見やすくなります。

次に、22ゲージの針を血管の真上に持ち、皮膚の表面に対して垂直に保持します。そして、針を深く挿入しすぎて筋肉や骨に穴を開けないように注意しながら、血管に穴を開けます。血液は脚の表面にビーズ状に集まり、ヘマトクリットチューブに収集されます。血液が採取されたら、止血帯を緩め、止血のために穿刺に圧力をかけます。出血が止まったら、動物を拘束具から外し、ケージに戻します。この方法で収集される量は10から150の間です。L、サンプリングの周波数によって異なります。また、サンプルの品質は変動し、ティッシュ製品が含まれている可能性があります。

最後に、ラットの採血のもう一つの選択肢である大腿静脈からの採血方法を学びます。大腿静脈は、鼠径部から膝関節まで後肢の内側を走り、膝を横切って外側伏在静脈になるため、簡単にアクセスできます。

大腿静脈出血の利点は、伏在静脈からよりも大量のブリードを簡単に収集できることです。不利な点は、意識のある動物では、この手順には2人が必要であることです。この手順に必要な機器は、止血帯を必要としないこと、および好ましい拘束装置が柔軟な円錐体であることを除いて、伏在静脈法と似ています。正しい円錐を選択するには、動物の体の長さに対して測定し、大腿部の高さに楕円形の穴を開けます。

動物を拘束するには、最初に鼻をチューブに入れます。次に、コーンの端を折り、小さなバインダークリップを使用して閉じ、動物が出ないようにします。次に、楕円形の開口部から後ろ足を引っ張って、大腿静脈にアクセスします。血腫の形成を悪化させる可能性があるため、強く握りすぎないでください。次に、脚の内面を鼠径部から膝にかけて削り取り、無毛部分にトリプル抗生物質軟膏を薄く塗ります。その後、拘束者は大腿静脈を閉塞し、脚の内面を採血する人に向けてラットをつかむ必要があります。22ゲージの針を血管に対して垂直に保持し、静脈に直接穴を開け、皮膚表面にビーズ状になる血液をヘマトクリットチューブに集めます。穿刺は、このサイトの前方で将来のサンプリングを可能にするために、できるだけ膝に近づける必要があります。また、穿刺の深さが針の斜角の長さより深くないことを確認してください。血流を助けるために、ラットの脚を心臓より低く配置します。最後に、脚への圧力を解放し、穿刺部位に圧力を加えて止血を達成し、過度の失血を防ぎます。この手順を使用すると、はるかに多くの血液を収集できることに注意してください。

採血技術の基本について説明した後、これらの手順が科学研究に役立つ理由についていくつかの例を確認しましょう

ワクチン開発中の免疫応答を確認するために血液がよく分析されます。ここでは、研究者たちは膀胱がんに苦しむ動物にペプチドワクチンを送達しました。次に、顎下静脈から採血し、血清を分離して、ワクチンの有効性の指標となるさまざまなサイトカインのレベルを検出しました。

採血は、糖尿病のグルコースレベルなど、人間の病気のバイオマーカーを研究することにより、治療の有効性をテストするためにも一般的に行われます。これらの研究者は、糖尿病動物の尾静脈を介して送達される新しい遺伝子治療の有効性を検証することに興味を持っていました。注射後、これらの研究者は、血糖値に対するさまざまな治療プロトコルの影響を分析するために、いくつかの時点で伏在静脈から血液を採取しました。

最後に、一部の実験では、炎症やストレスのレベルなど、動物の基本的な状態を知ることが重要です。この例では、ストレスの多いイベントの前後にラットから血漿を採取しました。そして、ご覧の通り、ストレスの多い出来事の10分後には、コルチコステロン、またはストレスホルモンのレベルが動物で高くなります。

JoVEのマウスとラットの血液離脱技術に関する第2回をご覧になりました。これらのビデオの両方を見た後、これらの動物からの採血に関する考慮事項と手順、およびそれらが今日の生物医学研究でどのように使用されているかについて理解を深めることができるはずです。いつものように、ご覧いただきありがとうございます!