5.15: 滅菌のティッシュの収穫

1. 準備

1. 一般的な材料は、ホヤの瓶、滅菌 20-25 g 針、アイリスのはさみと親指鉗子 (皮膚に 1 つ) と内部の組織の 1 つ、ペーパー タオル、生殖不能の外科医の手袋、滅菌ペトリネットの滅菌器具の 2 つのパックで 70% アルコールを含む料理、生殖不能媒体と滅菌生理食塩水。
2. フードのファンは、手続きの前に、少なくとも 15 分間実行する必要がある、それは 70% アルコールで消毒する必要があります。
3. フードには紫外線殺菌ランプが装備されている場合は、さらに作業面の消毒に使えます。
4. フードのセットアップのきれいな手袋が着用されます。機器は、彼らが使用する、通常左から右への順序でフードに読み込まれます。きれいな項目を汚染からダーティな項目を防ぐ方向ワークフローで実施する作業が可能になります。これは、動物の死体からの偶発的な汚染から収穫された組織や臓器を保護します。
5. パッケージの生殖不能の内部を尊重する滅菌器パックが開かれます。無菌性を維持、パックをテーブルのセンターに配置、各フラップは滅菌フィールドまたはパックの内側に交差することがなく開かれます。非滅菌の人は、彼/彼女のそれを離れて反射によって最初の上部フラップを開きます。各フラップの両方の手の 1 つを使用して側フラップを開きます、-パックからそれらを引っ張る。最終的なフラップは、パックの内側のサーフェスのいずれかに触れることを避けるために世話、パックを開く人に向かって引っ張られます。
6. ボンネットにペーパー タオルを置き、アルコールとそれらをウェットします。
7. 非滅菌の人が動物を安楽死させます。
8. 不妊の人は、滅菌手術用手袋の 2 つのセットを着ています。
9. 非滅菌の人はペーパー タオルに死体を配置し、70% アルコールで死体を完全に浸します。
10. 滅菌はさみと鉗子のセットを使用して、(男性) の包皮や (女性) で骨盤の骨にちょうど前方皮膚の水平カットを作る。腹部の筋肉を切断を避けます。
11. 楽器置いておきます。

2. 組織の収穫

1. 女性と男性の包皮の上に骨盤にちょうど前方の小さなカットを作る。
2. カットの下で親指を置き、カットの頭蓋の端を把握します。もう一方の手を使用して、安全に後肢を保持、尾の頭に向かって皮膚を引っ張りながら。
3. 皮膚は後肢のすぐ上の体から引き離すだろうし、頭や前足にインサイド アウトになることが。これは効果的に器官の収穫時期に髪の汚染物質を削除します。
4. 70% アルコールで再び体を浸すし、滅菌は、もはや手袋の表面的なペアを削除します。
5. 滅菌器具を使用して腹腔内を開きます。
   1. 脾臓
      1. 脾臓を収穫、体は右横ずれの臥床に配置されます。
      2. 脾臓は腹部の筋肉を視覚化できます。
      3. はさみカットは、脾臓の上に直接行われます。
      4. 脾臓は優しく体腔から取り消されます。
      5. 脾臓、胃、膵組織のすべての添付ファイルをカットするときは、穿刺または器官を引き裂くことを避けてください。
   2. 肝臓
      1. その他の腹部の臓器を収穫、体は背臥位に。
      2. 腹部の筋肉を持ち上げて切り取る、腹腔内に直接開く楕円形を残してします。
      3. 腹腔内を公開した後横隔膜から尾側の肝臓を反映します。
      4. 横隔膜に肝臓をアタッチする任意の膜を慎重に断ちます。
      5. カットをする血管を通って背骨に垂直な肝臓と横隔膜の間表示されます。
      6. 肝臓を持ち上げ、その下にある添付ファイルを視覚化するダイヤフラムへ反映します。
      7. 胃と小腸は、中断する必要がありますに小さい肝葉をアタッチする薄い膜があります。
      8. その下側の肝臓の中心部に線維性のノードをつかんで、すべての添付ファイルを見つけるための器官。基になる臓器や組織から肝臓を分離します。
      9. 肝臓は壊れやすいと簡単にパンクすることができます血液の解放に終ってことを注意してください。したがって、それは注意深く扱われなければなりません。
   3. 腎臓
      1. 右腎を視覚化する左または左の腎臓を視覚化する右腹腔内を公開した後、腸をプッシュします。
      2. 腎臓を削除するには、体から臓器を分離する腎臓の下に把握する鉗子ブレードを使用します。体から腎臓をカットはさみやメス刃を使用します。腎臓の損傷を避けるために鉗子でカットをします。
      3. 腎臓を削除すると、任意の脂肪は臓器からトリミングことができます。
   4. 卵巣
      1. 腹腔内を公開した後、子宮を視覚化するため頭側腸に移動します。
      2. 左し、右の卵巣に子宮角に従ってください。
      3. 卵巣が小さいです。古い動物の彼らは脂肪に埋め込まれる可能性があります。
      4. 体からそれを分離するために卵巣の下で鉗子をスライドさせ、脂肪と卵管から無料でカットします。
   5. 精巣
      1. 腹腔内を開いたら、優しく鼠径の脂肪パッドを持ち、前方引き出します。
      2. これは陰嚢から精巣を引っ張ってくる。
      3. 精巣を露出すると、一度は、陰嚢や体から輸精管に添付ファイルをカットします。
      4. これは、それぞれの精巣。
6. 胸腔内の開いた胸部臓器を削除するには
   1. 体は背臥位に。胸腔臓器を収穫する場合皮膚が頭の上にも反映されるが不可欠です。
   2. 剣状突起と肋骨にちょうど尾側腹部の筋肉のカットを許可するリフトを把握します。両側に胸郭の下のカーブに沿ったカットを拡張します。横隔膜の可視化できるようになります。
   3. 胸郭のそれぞれの側に可能な限り最も外側の点をカット小することによって横隔膜を穿刺します。肋骨からダイヤフラムをカットします。
   4. 胸部の臓器を視覚化する剣状の肋骨を持ち上げます。
   5. 両側、胸骨の上部に横方向のカットを拡張し、胸を開きます。
   6. 心臓と肺は最も簡単に一緒に削除されます。
      1. 鉗子を気管に垂直に置き、気管をしっかりと把握します。
      2. はさみを使って気管鉗子にちょうど前方に垂直カットをします。このカットは、気管と食道を断つ必要があります。
      3. 気管のグリップをゆるめることがなく立ち上がって尾側気管を持ち上げます。

脾臓を収穫、右外側の臥床で体を配置します。脾臓は腹部の筋肉を介して表示されます。脾臓の上に直接にカットをすることはさみを使用し、優しく体から臓器を撤回します。脾臓、胃、膵臓の組織間のすべての添付ファイルをカットが、穿刺や器官を引き裂くことを避けるため。

すべての他の腹部の臓器を収穫、背臥床で体を配置します。その後、持ち上げ、腹腔内に直接開く楕円形を残して腹部の筋肉を切り取る。肝臓を収穫、横隔膜から尾の方の臓器を反映します。今はさみを使用して、2 つの構造間の膜を慎重に切断します。次に、血管を通って背骨に垂直カットをします。肝臓を持ち上げて、下にある添付ファイルを視覚化するダイヤフラムへ反映します。胃や小腸に小さな肝葉をアタッチする薄い膜があります。下側の肝臓の中心部に線維性のノードをつかんで、すべての添付ファイルを見つけるための器官。今基礎となる組織から器官を区切ります。肝臓は壊れやすい、血液の過剰なリリースで簡単にパンクすることができることに注意してください。したがって、それは注意深く扱われなければなりません。

腎臓を収穫、右腎を公開する左または左の腎臓を公開する権利、腸を押してください。今腎臓と体から臓器を削除する鉗子の下をカットするはさみを使用して下に把握する鉗子ブレードを使用します。

収穫の卵巣を子宮を視覚化するため頭側腸に移動します。卵巣は左と右子宮角に従ってください。これらの小器官でありより古い動物の彼らは脂肪に埋め込まれる可能性があります。体からそれを分離し、脂肪と卵管から無料でカットするために卵巣の下で鉗子をスライドさせます。

男性の精巣を削除、そっとつかんで鼠径の脂肪パッド、前方。これは陰嚢から精巣を引っ張ってくる。彼らは見えるようになる、一度は、陰嚢や体からこれらの構造体を解放する精管に添付ファイルをカットします。

多くの実験では、切除した組織から細胞を採取する必要があります。このような場合、組織採取手順を無菌的に行うことが不可欠です。研究動物に由来する細胞株や組織培養物を使用することで、多くの実験をin vitroで行うことができ、その結果、研究における動物の使用を減らすことができます。

このビデオでは、実験動物から一般的に抽出された臓器を採取するための無菌法について説明します。そして、これに続いて、さまざまな研究目標を達成するためにこの無菌技術を使用したいくつかの実験例の簡単なレビューが続きます。

まず、動物組織採取中のスペース、器具、人員の無菌性を確保するために必要な準備手順から始めましょう。

この手順は、層流フードで行います。プロセスの前に、フードファンを少なくとも15分間作動させ、その領域を70%アルコールで消毒する必要があります。次に、ペーパータオルをフードに入れ、70%エタノールで濡らします。その後、滅菌機器をロードし、各機器が使用される順序(通常は左から右)に整理します。これにより、ワークフローを一方向に行うことができ、動物の死骸からの偶発的な汚染を防ぐことができます。

滅菌技術者を支援するために、非滅菌技術者が立ち会うことをお勧めします。両方のオペレーターはマスクとフワフワを着用する必要があります。滅菌技術者は、滅菌ガウンと2組の滅菌手術用手袋を着用する必要があります。ガウンと手袋は、開いた体腔、シャーレ、または滅菌培地に皮膚細胞が脱落するのを防ぐために手首を覆う必要があることに注意してください。

非滅菌者は、内面に触れずに滅菌器具のパッケージを開けるので、滅菌者は無菌的に器具を取り出すことができます。最後に、非滅菌技術者が動物を安楽死させ、死骸をペーパータオルの上に置き、70%アルコールで完全に浸します。

まず、脾臓、肝臓、腎臓、卵巣、精巣などの腹部臓器の摘出についてレビューします。

滅菌ハサミと鉗子のセットを使用して、男性の場合は包皮のすぐ前方、女性の骨盤骨のすぐ前方に皮膚に水平に切り込みを入れます。腹部の筋肉組織を切断することは避けてください。次に、親指を切り傷の下に置き、切り口の頭蓋端をつかみます。もう一方の手で、皮膚を頭に向かって引っ張りながら、後肢と尾をしっかりと保持します。皮膚は後肢のすぐ上の体から引き裂かれ、頭と前足を裏返すことができます。これにより、無菌臓器の摘出を妨げる可能性のある毛髪汚染物質を効果的に除去します。次に、70%アルコールで体を再び浸し、無菌ではなくなった表面的な手袋を外します。また、皮膚に使用されたすべての器具を廃棄してください。

脾臓を採取するには、体を右側横臥位に配置します。脾臓は腹筋を通して見えるはずです。はさみを使用して脾臓の真上に切り込みを入れ、臓器を体腔からそっと引っ込めます。脾臓と胃および膵臓組織との間のすべての付着物を切断しますが、臓器に穴を開けたり裂いたりしないでください。

他のすべての腹部臓器を採取するには、体を背側横臥に置きます。次に、腹筋を持ち上げて切り取り、腹腔の真上に楕円形の開口部を残します。肝臓を摘出するには、臓器を横隔膜から遠ざかるように尾側に反射させます。次に、はさみを使用して、2つの構造の間の膜を慎重に切断します。次に、血管を通して背骨に垂直に切り込みを入れます。次に、肝臓を持ち上げて横隔膜に向けて反射させ、その下にある付着物を視覚化します。小さな肝臓の葉を胃と小腸に付着させる薄い膜があります。肝臓の中央にある線維性結節を下側につかみ、臓器を持ち上げてすべての付着物を見つけます。次に、臓器を下にある組織から分離します。肝臓は壊れやすく、簡単に穴を開けて血液が過剰に放出される可能性があることに注意してください。したがって、慎重に取り扱う必要があります。

腎臓を摘出するには、腸を左に押すと右の腎臓が露出し、右に押すと左の腎臓が露出します。次に、鉗子の刃を使用して腎臓の下をつかみ、鉗子の下に切り込んだハサミを使用して臓器を体から取り出します。

卵巣を摘出するには、腸を頭蓋状に動かして子宮を視覚化します。左右の子宮角をたどって卵巣に向かいます。これらは小さな臓器であり、高齢の動物では脂肪に埋め込まれている可能性があります。鉗子を卵巣の下にスライドさせて体から隔離し、脂肪と卵管から解放します。

男性の場合、精巣を切除するには、鼠径部脂肪パッドをそっとつかみ、前方に引っ張ります。これにより、陰嚢から精巣が引き出されます。それらが見えるようになったら、陰嚢と輸精管へのアタッチメントを切断して、これらの構造を体から解放します。

次に、心臓や肺などの胸部臓器を採取する方法を学びましょう。心臓と肺は一緒に取り外すのが最も簡単です。胸腔を開くには、動物を背側横臥に置くことから始めます。まず、剣状突起をつかんで持ち上げます。次に、腹部の筋肉を肋骨のすぐ尾側に切り込みを入れます。両側の胸郭の下側のカーブに沿ってカットを伸ばし、ダイヤフラムを露出させます。

次に、両側の可能な限り外側の点で胸郭に小さな切り込みを入れて、横隔膜に穴を開けます。次に、ダイヤフラムをリブから切り離します。次に、剣状突起の肋骨を持ち上げて、胸部臓器を視覚化します。横方向の切り込みを両側の胸骨の上部まで伸ばして胸を開きます。次に、鉗子を気管に対して垂直に置き、気管をしっかりとつかみます。次に、はさみを使用して、鉗子のすぐ前方に垂直に切り込みを入れます。これにより、気管と食道が切断されるはずです。気管のグリップを緩めずに、気管を尾側に持ち上げ、胸郭の脊髄表面に肺の付着物を切り取ります。心臓と肺を胸腔から持ち上げることができるようになるまで続けます。

心臓だけを切除するには、臓器を持ち上げ、心嚢を慎重に切り取ります。次に、鉗子で大動脈を保持し、鉗子の遠位に切り込みを入れます。次に、前大静脈、肺動脈、および静脈を切断します。その後、心臓を胸腔から持ち上げることができるはずです。

それでは、無菌技術を使用して脳を収穫する手順を確認しましょう。脳が収集される唯一の器官である場合、準備手順は同じです。

収穫を開始するには、体をアルコールで飽和させ、以前と同じように体から皮膚を剥ぎ取ります-頭蓋骨の上と上まで。これにより、この時点からすべてが無菌状態になります。次に、動物を再びアルコールで飽和させ、外側の手袋を取り外し、皮膚に使用した器具を廃棄します。次に、首のうなじに切り込みを入れ、背側の頸部から鼻の先端まで正中線に沿って伸ばします。

次に、専用の滅菌脳採取ハサミを使用して、頭蓋骨の基部で背骨に切り込みを入れます。頭蓋を開くには、はさみの先端を大孔に置き、正中線に沿って切ります。この脳採取手順では、片方の手があごの下に反射した頭蓋骨から皮膚をつかんで頭を安定させ、滅菌した手を使用して頭蓋骨を切断するため、非滅菌と見なされることに注意してください。その後、はさみの刃の平らな端を使用して、頭頂骨を脳から離します。そして、へらを使って、脳幹の神経付着と脳の下の視交叉を慎重に破壊します。最後に、閉じた鉗子を前方にスライドさせ、嗅球のアタッチメントを壊します。そして、脳は頭蓋骨から直接滅菌培地に落とすことができます。

無菌組織採取の要点を確認したので、生物医学研究におけるこの手順の多くの使用法のいくつかについて説明しましょう。

神経幹研究者は、無菌採取技術を使用してマウスの新生児脳から組織を抽出し、これらの細胞をin vitroで増殖させます。これにより、彼らは発生における神経幹細胞の役割と癌の進行を研究することができます。

組織採取を含む別の活発な研究分野は、サンプル中のさまざまな代謝物を分析することにより組織生理学を研究する代謝プロファイリングです。この例では、科学者は無菌技術を使用して、野生型マウスと無菌マウスから肝生検を収集し、核磁気共鳴分光法(NMR)を使用して、2つの動物集団の肝臓代謝プロファイルの違いを解明しました。

最後に、免疫学者は、感染の拡大を研究するために、無菌組織採取を行うことがよくあります。この特定の実験では、研究者は慢性肺感染症を誘発するために細菌Pseudomonas aeruginosaの気管内注射を行いました。その後、動物を安楽死させ、無菌技術を使用して肺を摘出し、感染後3、7、14、および28日での細菌負荷を決定しました。

JoVEのビデオをご覧になったばかりですが、これは無菌技術を使用して実験動物から組織を採取するものです。これで、収穫全体で無菌性が維持されるようにするために必要な手順をよりよく理解できるはずです。そして、これらの動物から腹部と胸部の臓器、および脳を組織に損傷を与えることなく抽出できるはずです。いつものように、ご覧いただきありがとうございます!