エンリッチメント培養:選択的および差動媒体における好気性微生物と嫌気性微生物の培養

1. 準備

1. 始め前に手をよく洗い、適切な大きさの手袋を着用してください。
2. 5%の次亜塩素酸ナトリウム(漂白剤)で作業面を殺菌し、完全に乾燥させます。
3. 作業中にベンチトップに触れないように、空の120 mLエルレンマイヤーフラスコに接種ループを配置します。

2. 成長メディアと文化

1. 冷蔵庫からマンニトールソル寒天(MSA)、エオシンメチレンブルー寒天(EMB)、8種類の大豆寒天(TSA)の4枚を冷蔵庫から集めます(これらは市販で購入できます)。
2. 洗浄された作業領域にプレートを置きます。
3. 次のブロス培養物を収集する:大腸菌、黄色ブドウ球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、およびプロテウス・ブルガリス。注意:これらは好気性生物であるので、チューブのキャップはわずかに緩んでいる必要があります。
4. すべてのカルチャを、清掃された作業面の試験管ラックに置きます。

3. 文化の移転とインキュベーション

1. 手の届くところですべての材料を持ってベンチに立つか、座ります。
2. 無菌技術を使用して細菌をプレートに移すには、まずループをオレンジ色に光るまで炎上させ、次に空気中で冷却できるようにします。
3. ループが冷却される間、大腸菌のスープ培養を取り、その後、あなたの小指を使用してキャップを開きます。
4. チューブの開口部を素早く燃やします。これは汚染を防ぐ。
5. ループをチューブに浸し、生物をEMBプレートの最初の象限に取り付けます。
6. 最初のストリークが実行された後、ループを炎上し、最初のストリークを1回または2回だけ横切る2番目のストリークを実行します。これにより、単一のコロニーの分離が可能になり、汚染があるかどうかを判断できます。
7. プレートの 4 つの象限がすべて縞模様になるまで、この手順を繰り返します。
8. 次に、残りの 4 つの生物を同じストリーク メッキ方で転送し、最終製品が 1 つの MSA プレート、1 つの EMB プレート、および 2 つの別々の TSA プレートが生物ごとに 1 つずつあるようにします。
9. すべての生物が転送されたら、ループを最後に1回燃やし、それを片付けます。
10. 各生物を入れたTSAプレートをガスパケットに入れ、ガス袋を振ってからプレートと並んでチャンバーに入れます。しっかりとシールします。
11. すべてのプレートを一晩37°Cでインキュベートします。
12. 作業面を5%漂白剤で最後の1回殺菌します。

4. 結果の読み取りと記録

1. インキュベーターからプレートを取り出し、クリーンなラボベンチに置きます
2. ラボ ノートブックの各プレートの生物の成長に注意してください。特に、次の事項に関する詳細なメモを取ります。
   1. 各プレート上のコロニーの数とサイズ(存在する場合)、各めっきされた歪み
   2. MSAプレート上に成長するコロニーを取り巻く寒天の外観
   3. EMBプレート上で成長するコロニーの外観
   4. ガスパッケージ内と外側に成長したTSAプレート間の成長の違い