Name: 人間の膵島単離：パートI：膵組織の消化とコレクション (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-26T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 54 s
Description: 学ぶ 膵島単離法：膵組織をコラゲナーゼ溶液で自動灌流し消化・採取する方法。高品質なヒト膵島を効率的に分離し、移植治療に応用する技術を解説します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

イリノイ大学シカゴ校だけでなく、膵島細胞リソースセンターNIHの助成金（RFA - RR 05から003）、クリストファー財団、Efroymson財団、およびテラブス財団からの資金によって支え。

1。ファシリティのセットアップ<ol><li>人間の膵島分離には、チームワークを含む時間に敏感な手順であり、それゆえ、4人は、この手順を行うことが必要である。チームは、膵臓の解剖とcannulates外科医によるリードです。 </li><li>膵島分離は、チームはUIC膵島分離施設に入る分を開始します。チームメンバーは、必要なすべての計測機器が、遠心分離機のように、チェックされており、電源が入っていることを確認してください。彼らはまた、すべてのフードとの表面を適切にサニタイズしてください。 </li><li>二人は、カニューレ挿入のテーブル、スラッシュ自販機、消化回路、灌流装置、COBE浄化機、および外科テーブルを設定します。 </li><li>同時に、他の2つのチームのメンバーは、分離時に必要なメディアを準備します。 </li><li>次に、細菌学のチューブ（ボトル、チューブ、フォームおよび袋）、サンプリングチューブ（洗浄とプレ充填）、及び評価のチューブとプレートが用意されています。 </li><li>次のように設定された浄化チューブを準備します：第1回チューブ、空、150 mlでマーク、チューブ2-12は、ヒトアルブミン（洗浄ソリューション）を添加したM199培地200mlで埋め、230 mlでマークされ、そして最終的に1つ50 mlコニカルチューブ洗浄溶液50mlでいっぱい。これらの準備ステップが完了すると我々は、膵臓を作製し、灌流を開始する準備ができました。 </li></ol> 2。膵臓の準備と血流<ol><li>膵臓の準備と灌流を開始するには、演算子は、滅菌テクニックを使用してパッケージから臓器を削除します。外科医は、汚染除去のテーブルに膵臓を転送します。 </li><li>外科医はそれは準備された&quot;調達&quot;細菌学のボトルを埋めるために、それを使用する演算子、にオリジナルの膵臓保存液と手を使用すると、ワン60mlのシリンジを満たします。 </li><li>臓器は、膵島分離（膵臓が調達ま​​たは解剖学的に異常な中に破損している場合、それは膵島分離に使用されていない可能性があります）に適しているかどうかを判断するために目視検査の後、外科医は、コラゲナーゼを準備するためにオペレータが要求されます。この再懸濁の時間が異なる酵素のブランドと多くの間で変化することに注意してください。 </li><li>外科医の準備が整うと、汚染除去のテーブルに（Betadine、Fungizone /セファゾリンおよびHBSS）除染ソリューションを持参し、適切なコンテナにそれらを注ぐ。外科医は、分間除染液の各々に膵臓を洗浄する膵臓の汚染除去を行います。膵臓は、それは重量を測定されるに小さい殺菌した瓶に入れられます。重量は、バッチレコードに入力された後、膵臓は、いくつかの保存液とカニューレのパンに配置されます。 </li><li>外科医は、公開と部分的に主膵管を切開すると、カニューレと膵臓の各半分をカニューレを挿入するでしょう。カニューレは、縫合によって固定されます。膵臓を灌流するには、まず血流のユニットに移動し、流域に酵素液を注ぐ。総灌流時間は約10分、5分では80 mmHgの時、その後5分間で180 mmHgの時です。膵臓は灌流後に膨張した。 </li><li>脂肪組織が慎重に膵臓からトリミングされているカニューレのパンへの灌流膵臓を、移動する。その後10から12の部分に膵臓をカットし、消化のためにRicordiの商工会議所に移す。 </li></ol> 3。膵臓の消化<ol><li> 、消化のステップを開始する空のRicordiのチャンバーに膵臓を転送、Pulmozymeの1つの2.5 mlのバイアルを追加するには、（チャンバーを組織ブロックの大きな塊を避けるために）画面に置かれた、チャンバーを閉じ、システムをいっぱいに。 </li><li> 5分間のソリューションをポンピング開始。ゆっくりと均等に全体の温溶液を分散させるためにチャンバーを揺らし。 5分後、軽く全体の消化の段階のためのチャンバーを振る。 ˚Cで37℃の温度を維持する</li><li>温度が37℃に達するまでゆっくりとチャンバーを揺する、その後チャンバーを振る。サンプルを2分ごとに乗り、無料の島が、スコープの下に発見された場合に検出。バッチ記録の消化テーブル内の膵島評価情報を記録します。そのうちの50％が溶液中に遊離し、分離されたフローティングがあるまで、膵島の割合を監視し続ける。 </li></ol> 4。組織のコレクション<ol><li>かつて島の50％がサンプル中の遊離発見された、消化が回路内にコールドRPMI希釈液を加えることによって停止されます。組織を、500mlコニカルチューブヒトアルブミン30mlで事前入力で収集されます。一度チューブは、スピン清オフ吸引と冷洗浄溶液でペレットを洗浄している。 1分、4˚Cの、1100 RPM（毎分回転数）でコニカルチューブをスピン</li><li>シングル500ミリリットルコニカルに消化された膵臓の組織で中断されたすべてのコレクションチューブを組み合わせる。チューブは洗浄された組織の一杯になると、スピンし、すべての組織が複数回洗浄されるまで、洗浄工程を繰り返します。このチューブをスピンし、単一の250ミリリットルコニカルチューブに組織を移す。 250mlにボリュームをで持ち出すM199洗浄ソリューションでは、HAを補充し、サンプリングの準備。 </li><li>ピペットで1 mlのサンプルを取り、15 mlコニカルチューブ洗浄溶液9 mlをあらかじめ入力して追加します。その後、皿を数える直接グリッドに1ミリリットルからのサンプル、15 mlコニカルチューブゆるやかに転倒によって、本から混ぜる。細胞をカウントし、2500（10x250）の希釈係数を用いて細胞数を計算する。 </li><li> 250ミリリットルコニカルチューブをスピンし、UW（ウィスコンシン大学）は、通常、臓器温存のために使用する溶液の150mlを加える。 UWが追加されたときに、ピペットを用いて細胞懸濁液を混ぜる。 UWの開始時刻を記録し、精製のオペレータに通信する。氷と時折渦巻きにチューブ（s）を残す。今すぐ島をさらに精製することができる。 </li></ol>

<ol><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).</li>
<li>Nano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+isolation+for+allotransplantation%3A+variables+associated+with+successful+islet+yield+and+graft+function%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Islet isolation for allotransplantation: variables associated with successful islet yield and graft function.</a> Diabetologia. 48, 906-912 (2005).</li>
<li>Barbaro, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+human+pancreatic+islet+purification+with+the+refined+UIC-UB+density+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Improved human pancreatic islet purification with the refined UIC-UB density gradient.</a> Transplantation. 84, 1200-1203 (2007).</li>
<li>Lakey, J. R., Rajotte, R. V., Warnock, G. L., Kneteman, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pancreas+preservation+prior+to+islet+isolation.+Cold+ischemic+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human pancreas preservation prior to islet isolation. Cold ischemic tolerance.</a> Transplantation. 59, 689-694 (1995).</li>
<li>Fridell, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+and+University+of+Wisconsin+solution+for+organ+preservation+in+clinical+pancreas+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Comparison of histidine-tryptophan-ketoglutarate solution and University of Wisconsin solution for organ preservation in clinical pancreas transplantation.</a> Transplantation. 77, 1304-1306 (2004).</li>
<li>Potdar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initial+experience+using+histidine-tryptophan-ketoglutarate+solution+in+clinical+pancreas+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transplant%22%5BJournal%5D)">Initial experience using histidine-tryptophan-ketoglutarate solution in clinical pancreas transplantation.</a> Clin Transplant. 18, 661-665 (2004).</li>
<li>Salehi, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+islet+isolation+outcomes+from+pancreata+preserved+with+Histidine-Tryptophan+Ketoglutarate+versus+University+of+Wisconsin+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Human islet isolation outcomes from pancreata preserved with Histidine-Tryptophan Ketoglutarate versus University of Wisconsin solution.</a> Transplantation. 82, 983-985 (2006).</li>
<li>Ricordi, C., Lacy, P. E., Scharp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+islet+isolation+from+human+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Automated islet isolation from human pancreas.</a> Diabetes. 38, Suppl 1 140-142 (1989).</li>
<li>Hanley, S. C., Paraskevas, S., Rosenberg, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Donor+and+isolation+variables+predicting+human+islet+isolation+success%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Donor and isolation variables predicting human islet isolation success.</a> Transplantation. 85, 950-955 (2008).</li>
<li>Toso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+human+islet+of+Langerhans+isolation+yields%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Proc%22%5BJournal%5D)">Factors affecting human islet of Langerhans isolation yields.</a> Transplant Proc. 34, 826-827 (2002).</li>
</ol>

分離の結果9,10に影響を与える要因はさまざまです。その中で、膵組織の消化は、重要な役割を果たしている。私たち自身の人間の膵島分離の経験に基づいて、我々は潜在的に膵島の収量と品質に影響を与えうる重要なポイントは、以下の要約。 <ol><li>酵素の様々なタイプが使用されると消化時間が異なっている。 </li><li>早く完全に腺房組織から分離膵島の40〜50％として、消化が希釈溶液を添加し、組織を冷却することによって直ちに停止する必要があります。 </li><li>穏やかな収集組織の処理、洗浄、そして混合。 </li><li>収集された組織とUW液の混合物が良い精製結果を得るために少なくとも30分間氷上に置く必要があります。 </li></ol>

<table><tbody><tr><td>氷スラッシュメーカー</td><td>設備</td><td>Taylor Company</td><td>K4036546</td><td>滅菌氷の作製</td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>設備</td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>424803</td><td></td></tr><tr><td>MZ6倒立顕微鏡 TLBD4.1</td><td>設備</td><td>Leica Microsystems</td><td>4103</td><td></td></tr><tr><td>2 mmグリッド付き細胞培養ディッシュ</td><td>設備</td><td>Nalge Nunc international</td><td>174926</td><td>膵島計数</td></tr><tr><td>デジタルウォーターバス EX7</td><td>設備</td><td>NesLab</td><td>105361058</td><td></td></tr><tr><td>温度計</td><td>設備</td><td>IBI:IR</td><td>60444</td><td></td></tr><tr><td>MonoBloc天秤 AB 104-S</td><td>設備</td><td>Mettler Toledo</td><td>1119430864</td><td>膵臓重量の測定</td></tr><tr><td>MasterFlex IIスピードコントローラー</td><td>設備</td><td>Cole-Parmer</td><td>J00006445</td><td>消化中の流速調整</td></tr><tr><td>デジタルサイト DS L1</td><td>設備</td><td>Nikon Instruments</td><td>217267</td><td></td></tr><tr><td>灌流ユニット</td><td>設備</td><td>カスタムメイド</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>灌流ユニット用クーラー</td><td>設備</td><td>Fisher Scientific</td><td>3013P</td><td></td></tr><tr><td>リコルディチャンバー</td><td>設備</td><td>University of Miami</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>RPMI希釈液</td><td>試薬</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>99783024</td><td></td></tr><tr><td>ウィスコンシン大学 (UW) 液</td><td>試薬</td><td>DURAMED</td><td>1000-46-06</td><td></td></tr><tr><td>Hank&amp;rsquo;s 平衡塩溶液 (HBSS)</td><td>試薬</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>99-597-CM</td><td></td></tr><tr><td>25% ヒトアルブミン</td><td>試薬</td><td>GRIFOLS</td><td>NDC 61953-0002-2</td><td></td></tr><tr><td>M199培地（洗浄液）</td><td>試薬</td><td>Mediatech, Inc.</td><td>99-784-CM</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ NB1 GMPグレード</td><td>試薬</td><td>SERVA Electrophoresis</td><td>N0002937</td><td></td></tr><tr><td>中性プロテアーゼ NB1 GMPグレード</td><td>試薬</td><td>SERVA Electrophoresis</td><td>N0002936</td><td></td></tr><tr><td>ベタジン</td><td>試薬</td><td>Cardinal Health</td><td>29906-004</td><td></td></tr><tr><td>セファゾリン</td><td>試薬</td><td>West-Ward Pharmaceutical</td><td>NDC 0143-9924-90</td><td></td></tr><tr><td>ジチゾン</td><td>試薬</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5130</td><td></td></tr></tbody></table>

人間の膵島単離：パートi：膵組織の消化とコレクション

Human Pancreatic Islet Isolation: Part I: Digestion and Collection of Pancreatic Tissue

1型糖尿病の管理は、年間1,000億ドルで、個人と社会の両方に、厄介です。グルコースモニタリングと新しいインスリン製剤の普及にもかかわらず、多くの個人はまだ壊滅的な二次的合併症を開発する。膵島移植は、糖尿病患者における正常血糖コントロールの近くに復元することができます<sup&gt; 1</sup&gt;、集中的なインスリン療法に関連付けられている重篤な低血糖エピソードのリスクなし。十分な膵島質量を提供することに成功した膵島移植のために重要です。しかし、ドナーの特性、臓器の調達と保存には、分離結果に影響を及ぼす<sup&gt; 2</sup&gt;。イリノイ大学シカゴ校（UIC）で我々は改善された精製勾配で成功した分離プロトコルを開発している<sup&gt; 3</sup&gt;。プログラムは、2004年1月に開始し、300人以上のアイソレーションは、2008年11月までに実施された。膵臓は冷たい保存液（UW、ウィスコンシン州またはHTKの大学、ヒスチジン - トリプトファンケトグルタル酸）に送られ、<sup&gt; 4月7日</sup&gt;膵島分離のためのUICにおける細胞分離の研究室へ。膵島は、もともとRicordiの記載された方法を改変したものですUIC方法を、用いて単離された<em&gt;ら</em&gt;<sup&gt; 8</sup&gt;。簡単に言えば、周囲の組織から膵臓をクリーニングした後、それは酵素溶液（Servaコラゲナーゼ+中性プロテアーゼまたはシグマV酵素）で灌流した。膨張した膵臓は、その後、Ricordiの消化槽に移し、変更、閉鎖循環配管システムに接続し、37℃まで加温した。消化中に、チャンバーを穏やかに振とうした。サンプルは、消化の進行状況を監視するために連続して撮影した。無料の島が顕微鏡下で検出された一度、消化酵素を希釈する循環システムへのコールド（4℃）RPMI希釈液（Mediatech、ハーンドン、バ​​ージニア州）をフラッシュして停止した。収集し、ヒトアルブミンを添加したM199培地で洗浄した後、組織は、事前に精製数をサンプリングし、精製前のUW液でインキュベートした。ヒト膵島の精製と​​文化：精製工程は、第II部で説明される。

ヒト膵島の高品質と適切な量を達成することが成功した膵島移植のための著名な前提条件の一つです。このビデオでは、我々は段階的に説明し、人間の膵島を分離するための手順：変更された自動化法を用いて（パートI消化および膵組織のコレクション）。

人間の膵島単離：パートI：膵組織の消化とコレクション

1型糖尿病の管理は、個人にとっても社会にとっても負担が大きく、年間1,000億ドル以上の費用がかかっています。...の広範な使用にもかかわらず、

この手順は、まず正常なドナーの膵臓組織を入手することから始まります。簡潔なトリミング工程の後、拡張した膵臓を均等な大きさに切断し、消化チャンバーに移動させます。膵臓にカニューレを挿入し、自動灌流装置を用いてカニューレからコラゲナーゼ溶液を注入します。最後に、膵臓組織を容量の大きい円錐形チューブに回収し、その後、次回のビデオで紹介する膵島移植に向けてさらに精製します。こんにちは、私はイリノイ大学シカゴ校外科部のHuman Islet Programラボのアメリカン・チーフです。こんにちは、バーバラ・バルベロです。私もHuman Islet Programに所属しています。本日は、ヒト膵島分離の手順について解説します。当施設では、臨床利用に向けた高品質なヒト膵島を回収するためにこの手順を採用しています。それでは始めていきましょう。ヒト膵島（アイレット）の分離は時間に制約がある手順であり、チームワークが必要となるため、この操作を行うには4名の人員が必要です。チームは、膵臓の解剖およびカニュレーションを行う外科医によって率いられます。膵島分離の手順は、チームがUIC膵島分離施設に入った瞬間から始まります。チームメンバーは、遠心分離機などの必要な機器がすべて点検され、電源が入っていることを確認します。また、すべてのフードおよび表面を消毒します。2名の担当者が、カニューレ挿入テーブル、スラッシュマシン消化装置、回路灌流装置、ユニットコープ精製装置、および手術台を設置します。同時に、他のチームメンバー2名が分離に必要な培地を調製します。次に、細菌学用試験管、サンプリングチューブ、評価用チューブおよびプレートを準備します。精製チューブセットを次のように準備します。まず、1本目のチューブを空にし、150 millilitersの位置に印を付けます。2番から12番のチューブにM1 99培地を200 milliliters充填します。この培地にはヒトアルブミンまたは洗浄液を添加し、230 millilitersの位置に印を付けます。最後に、50 milliliterのコニカルチューブ1本に洗浄液を50 milliliters充填します。これらの準備ステップが完了したら、膵臓の準備および灌流を開始します。膵臓の準備および灌流を始めるため、操作者は梱包から臓器を取り出します。外科医は無菌操作を用いて、膵臓を除染テーブルに移します。外科医は60 ccシリンジ1本に元の膵臓保存液を満たし、それを操作者に渡します。操作者はその溶液を用いて、準備済みの調達用細菌学ボトルを満たします。臓器がアイレット分離に適しているかを目視で検査した後、外科医は操作者にコラゲナーゼを準備するよう指示します。Prepareはchoateです。摘出時に膵臓が損傷しているか、解剖学的な異常がある場合は、アイレット（膵島）の単離に使用することはできません。Resus懸濁液の処理時間は、酵素のブランドやロットによって異なることに注意してください。外科医の準備が整ったら、除染液を除染テーブルに運び、適切な容器に注いでください。外科医は、膵臓を1分間洗浄して除染します。その後、各除染溶液に浸した膵臓を、重量測定用の小さな滅菌ジャーに入れます。重量をバッチ記録に入力した後、膵臓をカニュレーションパンに移します。保存液を用いて、外科医が主管を露出し部分的に切開し、膵臓の各半分にカニューレを挿入して縫合で固定し、膵臓に灌流させます。まず、灌流ユニットに移動させ、酵素溶液をバスに注ぎます。総灌流時間は約10分間で、そのうち5分間は80 mmHgで行います。その後、180 mmHgで5分間灌流させると、膵臓が膨張してきます。灌流後、灌流済みの膵臓をカニュレーション用パンに移し、膵臓から脂肪組織を慎重に取り除きます。次に、膵臓を10〜12個の断片に切り分け、消化のために記録室へ移します。消化ステップを開始するには、膵臓を空の記録チャンバーに移動させます。画面に表示されているPulmozymeの2.5 mLバイアル1本を、チャンバーを塞がないように注意して加え、チャンバーを閉じてシステムを満たします。その後、溶液を5分間ポンプで循環させます。チャンバーを静かに揺らし、温めた溶液を均一に分散させます。5分後、消化工程の全期間を通じてチャンバーを静かに振盪させます。温度は37 °Cに維持してください。2分ごとにサンプルを採取し、顕微鏡下で遊離したアイレットが見られるかを確認して、バッチ記録の消化テーブルにアイレット評価情報を記録します。遊離して溶液中に分散したアイレットが50%に達するまで、アイレットの割合のモニタリングを継続します。サンプルの50%のアイレットが遊離したことが確認されたら、冷たいRPMI希釈液を添加して消化を停止させます。回路組織を、30 mLのヒトアルブミンをあらかじめ充填した500 mLコニカルチューブに回収します。コニカルチューブを4 °Cで1100 RPM、1分間遠心分離します。チューブを遠心分離した後、上清を吸引し、ペレットを洗浄します。冷たい洗浄液を用いて、消化した膵臓組織を懸濁させたすべての回収チューブの内容物を、1本の500 mLコニカルチューブにまとめます。チューブが洗浄済み組織で満たされたら遠心分離し、すべての組織が数回洗浄されるまで洗浄工程を繰り返します。このチューブを遠心分離し、組織を1本の250 milliliterコニカルチューブに移します。ヒトアルブミンを添加したM1 99洗浄液を用いて液量を250 millilitersまで調整し、サンプリングの準備をします。ピペットで1 milliliterのサンプルを採取し、9 millilitersの洗浄液があらかじめ入った15 milliliterコニカルチューブに加えます。次に、15 mLコニカルチューブを穏やかに転倒混和します。このサンプルから1 mLをグリッドカウント皿に直接分注します。細胞数を計数し、細胞数を算出してください。希釈倍率2,500を用いて、250 mLコニカルチューブを遠心分離し、150 mLのUW（ウィスコンシン大学溶液）を加えます。UWを加えた後、ピペットで細胞懸濁液を十分に混合し、精製担当者に記録および連絡を行ってください。uwにおける開始時間です。チューブを氷上に置き、時々撹拌してください。ここでアイレットをさらに精製できますが、計数のために未精製の膵臓組織からサンプルを採取します。サンプルにジオン溶液を加えると、膵島細胞のみが赤く染色されます。これにより、それらの品質と数量を評価することが可能になります。ここでは、膵島移植を成功させるために重要となる、高品質なヒト膵島を多数単離するための手順を実演しました。我々の経験に基づくと、ヒト膵島が周囲の内組織から40～50%程度遊離した時点で、消化液の希釈および冷却を行い、速やかに消化を停止させる必要があります。また、回収、洗浄、および混和の過程で、組織を慎重に取り扱うことが重要です。高度に純化したヒト膵島の優れた回収率が得られるため、U Universityの優れたシカゴ精製法の使用を推奨します。この手法により、分離時間も大幅に短縮され、アイレットに伴う虚血性損傷を最小限に抑えることができます。以上です。ご視聴ありがとうございました。実験の成功をお祈りしております。

human-pancreatic-islet-isolation-part-i-digestion-collection

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ヒト膵島の高品質と適切な量を達成することが成功した膵島移植のための著名な前提条件の一つです。修正された自動化された方法を使用して：このビデオでは、我々は人間の膵島の分離（ヒト膵島の精製と​​文化部II）の手順をステップバイステップで説明します。...

人間の膵島単離：パートII：ヒト膵島の精製と​​文化

研究のための2型糖尿病膵島の供給が不十分です。ここでは、膵部分切除を受けた患者からの膵島を単離するための我々のプロトコルを共有しています。このアプローチは、2型糖尿病と基礎および臨床研究のための十分な数の臨床的にマッチした非糖尿病患者からの膵島を得るためのユニークな会場を表します。...

部分的に膵臓を摘出された患者からのヒト膵島の単離

膵島は、ランゲルハンス島とも呼ばれ、グルコース調節やその他の重要な生物学的機能のためのホルモンを産生する内分泌細胞のクラスターです。このプロトコルでは、最初にAmpulla of...

コラゲナーゼ灌流による膵島単離:膵島細胞を単離するための酵素的方法

糖尿病研究分野のための重要な課題は、膵島β細胞の複製を調節する分子機構を理解し、β細胞の再生を刺激するための方法を開発することです。本明細書中の小分子のβ細胞の複製を促進する活性を同定および評価するためのハイコンテントスクリーニング方法が提供されます。...

ハイコンテンツ<em&gt;インビトロ</em&gt;膵島β細胞の複製ディスカバリー・プラットフォーム

我々は、新生児マウスから無傷の膵島を単離するために、本明細書のプロトコルを記述します。膵臓は、部分的に洗浄し、ハンドピッキング続いて、コラゲナーゼで消化しました。 20から80膵島クラスタは、いくつかの島の研究に適しており、新たに生まれたマウスから膵臓ごとに取得することができます。...

新生児マウスの膵臓からの機能性膵島の効果的な分離

この島分離プロトコルは、外分泌組織を消化するコラゲナーゼ注射の新しい経路と、マウスから島を精製するための簡略化された勾配手順を説明した。これは、酵素消化、勾配分離/精製、およびアイレット手摘みを含みます。分離に成功すると、マウスあたり250~350の高品質で完全に機能する島が生じます。...

マウスからの膵島分離のための簡単な高効率プロトコル

ここでは、液滴ベースのマイクロ流体単一細胞RNAシーケンシング技術を用いて、単体ヒト膵島から単一細胞の高品質で大規模なトランスクリプトームデータを生成するプロトコルを提示する。...

ヒト膵島の単一細胞RNAシーケンシングと解析

膵臓の転生細胞は、膵臓腫瘍を引き起こす悪性細胞の前駆体です。しかし、無傷の生膵細胞を単離することは困難です。ここでは、膵臓組織を解離するための効率的な方法を紹介します。その後、細胞はシングルセルRNAシーケンシング(scRNA-seq)または2次元または3次元の共培養に使用できます。...

生存可能な単一細胞を単離するための膵臓組織解剖

本研究は、マウス膵臓から機能的な一次膵島および腺皮細胞を効率的に抽出する簡略化された方法を開発し、急性膵炎誘発性糖尿病の病因における細胞間コミュニケーションの研究に貴重なツールを提供しました。...

マウスから一次膵島および一次膵臓細胞を同時に分離するための簡単かつ迅速な方法

このプロトコルは、ルイスラット膵島の外科的収穫、酵素的消化、密度勾配精製のための標準化された方法を説明し、移植や in vitro...

酵素による消化および密度-勾配分離を用いたルイスラットからの膵島の分離と精製

学ぶ 膵島単離法：膵組織をコラゲナーゼ溶液で自動灌流し消化・採取する方法。高品質なヒト膵島を効率的に分離し、移植治療に応用する技術を解説します。

人間の膵島単離：パートI：膵組織の消化とコレクション

さらに動画を探す