Name: ランゲンドルフ灌流ラット心臓の光学的マッピング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-11T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 48 s
Description: 学ぶランゲンドルフ灌流ラット心臓の光学マッピング法。ポテンショメトリック色素di-8-ANEPPSを用いて心表面の活動電位伝導を高時空間分解能で可視化し、不整脈メカニズムの解明に活用します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

とボストン小児病院で心臓伝導基金への拠出、この作業は、研究の国立衛生研究所からの補助金（HL088206 HL068915）によってサポートされています。

パート1：準備のソリューションと分離された灌流心臓システム<ol><li>以前に[5、6]を説明するように実験の朝に、クレープス-ヘンゼライト溶液の4.0 Lが用意されています。 </li><li> 11ミリモル/ L 2,3 - ブタンジオンmonoxime（BDM）は手順1.1で作成した灌流液からデカントクレープス - ヘンゼライト溶液の1.0 Lに溶解させる。 </li><li>クレブス - ヘンゼライトの追加の150mLの手順1.1で作成した灌流液から除去し、5モル/ Lジ- 8 - ANEPPS（ジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解した10ミリモル/ Lストックから希釈）と混合される。 </li><li> 5％のCO 2ガスを、これらの3ソリューションは、それらが41.0℃に予め温めておいたし、0.2μm、フィルタ処理された95％O 2を用いて水中バブラー（ラド）と酸素化されている水ジャケット付きガラスリザーバー（ラド）に転送されます。 3ストック貯水池からのソリューションは、MasterFlex™L / S蠕動ポンプと低吸収シリコーンチューブ（コール - パーマー）と壁掛けランゲンドルフシステムに圧送されています。 </li><li>組立て前に、ランゲンドルフシステムガラス製品（ラド）は細心の注意を払って、E - TOXA - CLEAN試薬（Sigma - Aldrich社）で洗浄し、徹底的に0.1 M / LのHCl、100％エタノール、蒸留水でリンスする。 </li><li>非循環ランゲンドルフ装置は、水ジャケット加熱コイルとバブルトラップ（ラド）[7]で心臓から分離される3つの別個の酸素貯蔵所、約70ミリメートルHg定圧を提供するために構築した。 3つの独立した灌流ラインは私達が正確に1.3〜ステップ1.1で作成したソリューションの配信を制御できるように、2つの3ウェイコックで心臓の上に収束する。水ジャケットガラス製品はMasterFlex PharMed BPTチューブ（コール - パーマー）と直列に接続し、℃の蒸留水で2 E100サーキュレータ（ラウダ）を使用して39に加温する。加熱コイルとバブルトラップに圧力ヘッドタンクを接続する白金硬化シリコンチューブ（コール - パーマー）による熱損失は、37℃灌流液が心臓に到達するまでになりました。 </li></ol>パート2：収穫ラットの心臓とセットアップランゲンドルフ灌流<ol><li> 200〜250グラムのルイスラットで深い全身麻酔を誘導するために、100 mg / kgのケタミンおよび10 mg / kgのキシラジンを腹腔内腔に注入される。この混合物に、我々は、植手順の実行中に血液凝固や心筋虚血を防ぐために、500 U / kgのヘパリンを追加します。 </li><li>心臓や大血管へ簡単にアクセスするには、前胸壁が削除されます。その後、周囲の組織は注意深く切開し、心膜袋が開かれます。 </li><li>下大静脈の同定に続いて、この容器は、5から0絹（エチコン）と連結されており、全体の心肺ブロックは、外植されています。組織はすぐに氷上に50 mLのビーカーに含まれる氷冷クレブス - ヘンゼライト溶液中に配置されます。 </li><li>上行大動脈を素早く特定し、周囲の組織から解剖される。適切なサイズのカニューレは、（ハーバード装置）大動脈基部に遠くカニューレを挿入することによって冠状動脈の義務灌流を中断しないように注意しながら、大動脈に挿入されます。カニューレは、5から0絹（エチコン）で上行大動脈に固定されている。 </li><li>ラットの心臓は、カニューレ内に気泡を導入することなく、ランゲンドルフ装置上に配置されます。逆行性冠血管灌流は、現在のステップ1.6に説明した圧力ヘッドから暖かい、酸素クレブス - ヘンゼライト溶液を用いて確立されます。 </li><li>肺を含む余分な組織が、、今削除され、心臓は、機能の回復を可能にし、リズムを安定させるために20分間灌流される。この時間の間に、非常に薄い熱電対温度プローブ（コール - パーマーは）左室内腔に導入し、5から0 Prolene縫合糸（エチコン）で所定位置に縫合。プローブは、心臓の温度が水の循環ポンプの設定を調整することによって37℃に維持されるようにサーモコントローラー（Digi - Keyはセンス）に接続されています。心尖​​部から滴り落ちる灌流液からの動きは、排水容器にガーゼを配置することによって最小化されます。 </li></ol>パート3：電位差色素で心臓をロードし、電子写真、光信号を取得する<ol><li>ジ- 8 - ANEPPS（Invitrogen）を三方活栓を用いて蛍光色素を混合したクレブス - ヘンゼライトを含む灌流ラインに切り替えることで、心臓にロードされます。さらに、18Gカニューレは、左及び/または右心房に配置され、それらが十分に冠状動脈を介して導入された染料で灌流されていないため、色素溶液の追加の50mLを徐々にこれらのチャンバーのそれぞれに投与される。 </li><li>ロード手順3 ECGのリード線（ハーバード装置）の間に穏やかにマッピングするのに使用される光学系を向いていない心臓の表面に配置されます。電極N O 1は、後部尖左心室の一部、N左心房のO 2、およびN上に位置している<su>大動脈基部（図1）の参照電極としてp&gt; O 3。心房と心室の電子写真信号はその後、増幅、デジタル化、およびソフトウェア（留年選手イメージング）（図2）を用いた光信号の横に表示されています。オシロスコープ（テクトロニクスモデルTDS 1002）もリアルタイムで表面ECGのを視覚化すると、適切なペーシングを保証するために使用されます。 </su></li><li> ECGアンプ（ヒューゴサックスElektronik社）の設定：ハイパスフィルター：0.1 Hzの ローパスフィルタ：150Hzの</li><li> CMOSカメラ（留年選手イメージング）とmacroscopeは、心臓の表面に焦点が合っていると買収のフレームの中央になるようにXYZの調整を使用して配置されている。カメラと光学系は共振周波数を最小限に抑えるために（マイナスKテクノロジー）防振テーブル上に搭載されています。それと同時に、同軸ペーシング電極（ハーバード装置）は、隔離された、S48電気刺激装置（グラス）で制御右心房上に配置され、心臓は毎分300ビート（図1）でのペースです。 </li><li>電気刺激（グラス）の設定： レート：1秒あたり5パルス ディレイ：0.2ミリ秒 期間：2ミリ ボルト：6月12日V モード：リピート パルス：シングル</li><li>収縮からのモーションアーチファクトを欠いている光学録音の場合、心臓に電気機械的に非結合する必要があります。我々は再び11ミリモル/ LのBDMを含むクレブス - ヘンゼライト溶液に灌流ラインを切り替えることによってこれを行います。買収の間に、心臓は、準備の生存を守るために純粋なクレブス - ヘンゼライトで灌流される。 </li><li>記録パラメータは、次の買収の設定でソフトウェア（留年選手のイメージング）を使用して設定されます。 設定：2,000 Hzの、128 × 128ピクセルの配列 フレームの間隔：0.5ミリ秒 カメラのアンプ利得：5倍 オンチップゲイン：8X - 12Meウェル シャッター：500ミリ秒の遅延 フレーム数：4000 期間：2000ミリ秒</li><li>すべてのお部屋と設備のライトがオフになっているか、録音中にバックグラウンドノイズを除去するためにシールドされています。 LEDライトは光退色と色素の毒性を軽減する唯一の光記録中に、心を照らす。光源のシャッターは、コンピュータのD -対基板（留年選手イメージング）の方法でコントロールパネルを介して配信5 Vのパルスで制御されます。 </li></ol>パート4：赤シャツ党員のイメージングソフトウェアを使用して取得する情報を分析<ol><li>買収後、データが異なるフィルタ設定を使用して処理されます。我々は一般的にバンドが44.0で左の境界と98.0で右の境界に設定されているフィルタを、ストップ/合格調整する場合を除いてデフォルト設定を使用します。その後記録された情報が処理され、ムービーが（留年選手の画像）が生成されます。 </li><li> 1回の収集からのデータは2秒の期間にわたって心臓の表面上の16384のサイトで地元の電気的活性化に対応しています。ソフトウェアは、これらのローカル信号を直接互いにと心房と心室の電子写真記録と比較することができます。データは、色に地元の電気的活性化をマッピングし、心臓の表面上に時空間の電気的活性化を示すアニメーションとしてこの情報をレンダリングにより可視化です。このようなアニメーションを作成するために、我々はソフトウェアを使用します。 <ul><li>時間的および/または空間的にデータをフィルタ</li><li>アニメーションの開始時刻と終了時刻を選択</li><li>各ピクセルの静止光強度に基づいて、色にマップされた光信号</li><li>心臓の絵と結果の色のデータをオーバーレイ</li><li>アニメーションを生成する</li></ul></li></ol>パート5：代表的な結果灌流心臓標本の記録中に静止していた場合、光信号は、ジ- 8 - ANEPPSの発光強度の変化に関係するすべてのピクセルの1つの異なるピークを示す。対応する動画（図3および4）心臓の心外膜面だけでなく、同​​時に取得した電子写真記録（図2）を介して伝播する励起波の前面を示す。 <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure3.jpg" alt="心臓ペーシング研究のためのランゲンドルフ心臓セットアップ図、番号付きコンポーネントを強調表示。" data-altupdatedat="1754907201000" data-alt="図1"> 図1。ランゲンドルフ灌流心臓標本の写真は、右心房のペーシング電極の位置を描いたとECGは、ステップ3.2で説明つながります。 <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure4thumb.jpg" alt="信号付きの生物学的プロセス図。蛍光顕微鏡検査結果のデータ解析" border="0" data-altupdatedat="1754907201000" data-alt="図2"> 図2。灌流ルイスラットの心臓からの代表的な光信号と電子写真記録。パネルは、光学イメージングに使用心外膜面の像を示しています。パネルBの時間をかけて蛍光発光の変化を示すために選択した画素の位置は、色付きの矢印で示されている。電子写真の信号は心房興奮及び心室の信号に対応するライトブルーのラインを示す赤い線とパネルCに示されています。してくださいve.com/files/ftp_upload/1138/Figure4.jpg"&gt;この図の拡大バージョンを見るにはここをクリックしてください。

<ol><li>Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of the heart.</a> Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).</li>
<li>Hucker, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Images+in+cardiovascular+medicine.+Optical+mapping+of+the+human+atrioventricular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction.</a> Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).</li>
<li>Entcheva, E., Bien, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macroscopic+optical+mapping+of+excitation+in+cardiac+cell+networks+with+ultra-high+spatiotemporal+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Biophys+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Macroscopic optical mapping of excitation in cardiac cell networks with ultra-high spatiotemporal resolution.</a> Prog Biophys Mol Biol. 92 (2), 232-257 (2006).</li>
<li>Entcheva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+imaging+of+electrical+activity+in+cardiac+cells+using+an+all-solid-state+system%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Fluorescence imaging of electrical activity in cardiac cells using an all-solid-state system.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 51 (2), 333-341 (2004).</li>
<li>Stamm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+endotoxin-induced+alterations+in+myocardial+calcium+handling%3A+obligatory+role+of+cardiac+TNF-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Rapid endotoxin-induced alterations in myocardial calcium handling: obligatory role of cardiac TNF-alpha.</a> Anesthesiology. 95 (6), 1396-1405 (2001).</li>
<li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+conduction+through+engineered+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).</li>
<li>Skrzypiec-Spring, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff---still+viable+in+the+new+millennium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolated heart perfusion according to Langendorff---still viable in the new millennium.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li>
<li>Fedorov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+blebbistatin+as+an+excitation-contraction+uncoupler+for+electrophysiologic+study+of+rat+and+rabbit+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+Rhythm%22%5BJournal%5D)">Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts.</a> Heart Rhythm. 4 (5), 619-626 (2007).</li>
</ol>

動物実験は、ボストン小児病院での動物実験使用の委員会が定めるガイドラインおよび規則に従って行った。

麻酔ラットから心臓の除去は、心筋虚血を避けるために迅速に実行する必要があります。虚血または不十分な冠灌流が発生した場合、心臓はおそらく不整脈を開発し、梗塞になることがあります。さらに、これらの心は有益なレコーディングとその後の分析のための不十分な蛍光発光が表示されます。色素をロードする前に、心筋細胞は電気的な刺激の安定のための生理的電解質の環境を確立および維持するために十分にクレブス - ヘンゼライト溶液で灌流する必要があります。灌流液の正確な製剤は、適切な臓器の生存能力と機能を維持するために必要です。電解質の濃度または灌流の不十分なフィルタリングの違いは、おそらく致命的な心筋機能障害、心臓のリズム障害につながる。光学録音の場合は、心臓が完全に膜電位感受性色素をロードする必要があります。これらのチャンバーは冠状動脈が十分に灌流されていないので、これは心房心筋のために特に重要です。我々は、心房の追加の内空洞のある血流が良い光信号を確立することを見出した。さらに、最高品質の電圧のトレーシングの買収は、潅流心臓が動かないことが必要です、そうでない場合、蛍光発光の変化は確実に信号ドリフトに起因するアーチファクトに起因する高忠実度と膜電位の変化を...

<table><tbody><tr><td>CardioCMOS-SM128f</td><td>機器</td><td>RedShirtImaging, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CardioPlex ソフトウェア</td><td>機器</td><td>RedShirtImaging, LLC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LUXEON LED 光源 460-490 nm </td><td>機器</td><td>Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA</td><td>LXHL-PB02</td><td></td></tr><tr><td>ECG アンプ Type 689 Hugo Sachs Elektronik</td><td>機器</td><td>Harvard Apparatus</td><td>730149</td><td></td></tr><tr><td>ダイクロイックミラー 505 nm</td><td>機器</td><td>Semrock</td><td>FF505-SDi01-25x36</td><td></td></tr><tr><td>エミッションフィルター 605 nm ロングパス</td><td>機器</td><td>SciMedia</td><td></td><td></td></tr><tr><td>THT サイドウェイズ</td><td>機器</td><td>SciMedia</td><td>25 BM-8</td><td></td></tr><tr><td>ミニボールジョイントホルダー</td><td>機器</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BS4 73-0177</td><td></td></tr><tr><td>小型刺激電極セット</td><td>機器</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BS4 73-0160</td><td></td></tr><tr><td>BM-6 ベンチトップ除振台</td><td>機器</td><td>Technology Inc., Inglewood, CA 90301</td><td>25 BM-6</td><td></td></tr><tr><td>単極ECG電極</td><td>機器</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BS4 73-0200</td><td></td></tr><tr><td>ローラーポンプ SCI 400</td><td>機器</td><td>Watson-Marlow Pumps Group</td><td>401U/D1</td><td></td></tr><tr><td>ローラーポンプ MasterFlex Easy Load II</td><td>機器</td><td>Cole-Parmer</td><td>Model 77201-60</td><td></td></tr><tr><td>チューブ Marprene #14</td><td>機器</td><td>Watson-Marlow Pumps Group</td><td>902.0016.016</td><td></td></tr><tr><td>MasterFlex チューブ</td><td>機器</td><td>PharMed, Westlake, OH 44145 USA</td><td>06485-25</td><td></td></tr><tr><td>S48 スクエアパルス刺激装置</td><td>機器</td><td>Grass Technologies</td><td>Model S48</td><td></td></tr><tr><td>SIU5 RF トランスフォーマー絶縁ユニット</td><td>機器</td><td>Grass Technologies</td><td>Model SIU5</td><td></td></tr><tr><td>5 リットル ウォータージャケッテッドリザーバー</td><td>機器</td><td>Radnoti Glass Technology Inc.</td><td>120142-5</td><td></td></tr><tr><td>2 リットル ウォータージャケッテッドリザーバー</td><td>機器</td><td>Radnoti Glass Technology Inc.</td><td>120142-2</td><td></td></tr><tr><td>0.5 リットル ウォータージャケッテッドリザーバー</td><td>機器</td><td>Radnoti Glass Technology Inc.</td><td>120142-0</td><td></td></tr><tr><td>0.25 リットル ウォータージャケッテッドリザーバー</td><td>機器</td><td>Radnoti Glass Technology Inc.</td><td>120142-025</td><td></td></tr><tr><td>10 ml 加熱コイル</td><td>機器</td><td>Radnoti Glass Technology Inc.</td><td>158822</td><td></td></tr><tr><td>コンプライアンスバブルトラップ</td><td>機器</td><td>Radnoti Glass Technology Inc.</td><td>130149</td><td></td></tr><tr><td>ルアー切り離しカニューレ</td><td>機器</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-1444</td><td></td></tr><tr><td>3方活栓、FLL to MLT、ポートカバーなし</td><td>機器</td><td>Harvard Apparatus</td><td>BS4 72-2630</td><td></td></tr><tr><td>熱電対温度計</td><td>機器</td><td>Cole-Parmer</td><td>WU-91100-40</td><td></td></tr><tr><td>Ultra Fine IT-Series フレキシブルマイクロプローブ </td><td>機器</td><td>PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA</td><td>IT-24P</td><td></td></tr><tr><td>オシロスコープ Tektronix TDS 1002</td><td>機器</td><td>Tektronix, Inc.</td><td>TDS 1002B</td><td></td></tr><tr><td>2,3-ブタンジオンモノオキシム </td><td>試薬</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン HCl</td><td>試薬</td><td>Hospira Inc.</td><td>RL-0065</td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>試薬</td><td>Lloyd, Inc.</td><td>LB15705A</td><td></td></tr><tr><td>E-TOXA-CLEAN&amp;#174;</td><td>試薬</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9029</td><td></td></tr><tr><td>Di-8-ANEPPS</td><td>試薬</td><td>Invitrogen</td><td>D-3167</td><td></td></tr></tbody></table>

ランゲンドルフ灌流ラット心臓の光学的マッピング

Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

電位感受性蛍光色素による心臓の表面の光学的マッピングは、実験モデルでの電気的励起を調べるために重要なツールとなっているその細胞培養物からの全体の臓器へのスケールの範囲<sup&gt; [1、2]</sup&gt;。最先端の光学イメージングシステムを使用して、正常な心臓のリズムの間にまたは不整脈の開始と維持を通して活動電位の発生と伝播はほぼ瞬時に可視化することができます。<sup&gt; [1]</sup&gt;。最新の市販のシステムは非常に高い時空間分解能で情報を提供することができますし、当初より、従来の電気生理学的方法によって課される障害を克服するために開発された特注の機器に基づいていた<sup&gt; [1]</sup&gt;。高解像度と高速相補型金属酸化膜半導体（CMOS）カメラと極度に明るい、発光ダイオード（LED）だけでなく、電位感受性色素、光学、およびフィルタの進歩は、電気信号​​の取得を行うために始めているより多くの顕微鏡での作業に慣れている心血管細胞の生物学者のための実用的。 CMOSカメラの最新世代は、試料調製の種類に応じて、16,384ピクセルのアレイ上にフォトダイオードアレイ、レーザースキャニングシステム、および冷却電荷結合素子（CCDなどの老舗蛍光取得の技術を毎秒10,000フレームを取得することができますが、 ）カメラはまだダイナミックレンジに関しては、信号対雑音比を持ついくつかの明確な利点を持っている、と量子効率<sup&gt; [1、3]</sup&gt;。本研究では、ルイスラットの心臓を灌流した<em&gt;生体外で</em&gt; 37晶質灌流液（クレブス - ヘンゼライトソリューション）°変更ランゲンドルフ装置上にCと。 20分の安定期間の後、心臓を断続的に画像取得時の収縮に関連した動きを排除するために11ミリモル/ L 2,3 - ブタンジオンmonoximeで灌流した。光学マッピングでは、高速応答電位差プローブジ- 8 - ANEPPSと心をロードし<sup&gt; [4]</sup&gt;（5マイクロモル/ L）と簡単には475 ± 15 nmの励起光で準備を点灯。照明の典型的な2番目の期間中に、心の準備から放射される&gt; 605 nmの光は水平macroscopeに接続された高速のCMOSカメラで撮像した。このデモでは、心が分離された電気刺激装置に接続される同軸電極を毎分300ビートでペースだった。同時バイポーラ電子写真記録は、容易に利用可能なソフトウェアを使用して電圧信号と一緒に取得し、分析した。このように、ランゲンドルフ灌流ラット心臓の表面の活動電位は可視化と電子写真の信号に登録することができます。

この記事では、電位差色素（ジ- 8 - ANEPPS）を使用してランゲンドルフ灌流ラット心臓の表面に光学的に画像のアクション潜在的な動きに高い時間および空間分解能のテクニックを説明します。

電位感受性蛍光色素を用いた心臓表面の光学マッピングは、...における電気的な興奮を調査するための重要なツールとなっています。

こんにちは。私はChildren's HospitalおよびHoward Medical School麻酔科学科のDr. Cohenの研究室のYon Zivです。本日は、灌流したラットの赤色心における光学マッピングの手順について説明します。当研究室では、心表面における電気活動の伝播を研究するためにこの手法を用いています。それでは始めましょう。実験当日の朝に、Krebs Hensel light溶液を4リットル調製します。溶液を調製した後、真空ろ過を用いて200 µmのフィルターで未溶解の粒子を取り除きます。まず、調製したKrebs Henzel lite溶液1Lを用いて、11mmolのBDMを溶解させます。次に、別のKrebs Henzel lite溶液100mLを取り、DMSOに溶解した10mMのD8-NFSを加え、最終濃度が5µMのD8-NFS溶液になるように混合します。ここで使用しているウォータージャケット付きガラスリザーバー、バブラー、およびガラス器具はすべてred.Naughty社製です。2つの溶液を41 °Cに予熱したリザーバーに移します。0.2 micronフィルターを通したガスを用いて溶液に酸素を供給し、沈降式バブラーを使用します。3つのストックリザーバーから、壁掛けのLangendorff装置、ペリスタルティックポンプ、および低吸着シリコンチューブを介して溶液をポンプ輸送し、ラットの心臓を採取します。まず、200〜250 gのLewisラットにケタミンとキシラジンを腹腔内投与して深い全身麻酔を誘発し、摘出中の血液凝固および心筋虚血を防ぐためにヘパリンを投与します。ラットが完全に麻酔状態となり、足指のつまみ刺激に反応しなくなったことを確認した後、心臓の摘出に進みます。まず、心臓および大血管に容易にアクセスできるよう、前胸壁を取り除いて手術を開始します。次に、周囲の組織を慎重に剥離し、心膜嚢を切開します。下大静脈を特定した後、この血管を5-0 Proline縫合糸で結紮し、心肺ブロック全体を摘出します。直ちに組織を氷上の50 milliliterビーカーに入れた氷冷Krebs Henseleit溶液に浸し、速やかに上行大動脈を特定して周囲の組織から剥離します。大動脈に適切なサイズのカニューレを挿入します。カニューレを大動脈根に深く挿入しすぎて、冠動脈への必須灌流を妨げないように注意してください。カニューレを上行大動脈に固定します。その後、カニューレ内に気泡が入らないように注意しながら、ラットの心臓をLing Endorf装置に設置します。温めて酸素化したKrebs Hensel lite溶液を用いて、逆行性冠血管灌流を行います。Ling Endorf装置の圧力ヘッドから、肺を含む余分な組織を清掃後に除去し、心機能を回復させ、灌流中にリズムを安定

optical-mapping-of-langendorff-perfused-rat-hearts

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

この記事では、パノラマのイメージングシステムを用いてランゲンドルフ灌流ウサギの心臓、およびデュアル（電圧とカルシウム）画像診断法で光学マッピング実験を実施するための基本的な手順について説明します。...

ランゲンドルフ灌流ウサギの心臓のMultiparametric光学マッピング

そのまま孤立ランゲンドルフ灌流マウス心臓における本論文では詳細解剖の手順を、楽器のセットアップ、および実験条件膜電位の光学マッピング（VM）の間と細胞内カルシウムトランジェント（CAT）。...

マウスの心臓の活動電位およびカルシウムトランジェントの光学的マッピング

このビデオでは、孤立したマウスの心臓のランゲンドルフ逆行性灌流を行います。手術中、上行大動脈に挿入されたカニューレを使用して、冠状動脈を介して灌流溶液で逆行性に灌流することにより、心臓の心臓活動が維持されます。このモデルは、心臓の心臓病態生理を研究するために使用されます。...

ランゲンドルフ逆行性心臓灌流:単離されたマウス心臓を灌流するためのex vivo技術

孤立したラットの心臓は、虚血再灌流障害の永続的なモデルです。ここでは、ラットからin...

ランゲンドルフ灌流ラット心臓における虚血再灌流傷害の誘導と評価

この記事では、ランゲンドルフ灌流ウサギの心臓における詳細なプロトコルおよび膜貫通電位 （Vm）のデュアル光学マッピングとフリーイントラ筋小胞体（SR）のために必要な機器のCa 2+を説明しています。この方法は、無傷の中心部にあるV mとSRのCa 2+動態の直接観察と定量化を可能にします。...

イントラ小胞体のCaの光学マッピング<sup&gt; 2+</sup&gt;とランゲンドルフ灌流ウサギの心臓における膜電位

ここでは、高い空間分解能と時間分解能で、マウス右心房、特に洞房結節から電気活動の光学マッピングするためのプロトコルを提示します。...

マウス洞房結節の高分解能光学マッピング

このプロトコルを記述する高時空分解能、膜電位のデュアル録音を含む光学マッピング システムを利用したマウスの心房の電気生理学的評価と Ca2...

高解像度光学マッピングとマウスの心房の電気生理学的評価

本研究の目的は、翻訳動物モデルを用いて心臓動態を調べる方法を確立することにあった。記述された実験的アプローチは、孤立した無傷の豚の心臓モデルにおける電気的活動を評価するための電気生理学的研究と共に二重放出眼電図を組み込む。...

元ヴィヴォ・ランゲンドルフ・パーフュード・ハーツの眼電図と電気生理学研究

このプロトコルは、高い時間的および空間的分解能の膜貫通電圧および細胞内Ca2+...

カテコールアミン作動性多形性心室頻拍の RyR2R2474S ノックインマウスの心臓の二重色素光学マッピング

顕微鏡光学系をクリーンに保ち、高品質なイメージングのために重要です。ほこり、指紋、余分な液浸油、または上または顕微鏡で培地を取り付けるには、コントラストと解像度の低下を引き起こします。...

顕微鏡の適切な手入れとクリーニング

学ぶランゲンドルフ灌流ラット心臓の光学マッピング法。ポテンショメトリック色素di-8-ANEPPSを用いて心表面の活動電位伝導を高時空間分解能で可視化し、不整脈メカニズムの解明に活用します。

ランゲンドルフ灌流ラット心臓の光学的マッピング

さらに動画を探す