Name: 広視野顕微鏡を用いて長期的なイメージング哺乳類細胞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: 学ぶ広視野顕微鏡を用いた哺乳類細胞の長期ライブイメージング法。37度恒温環境と倒立型顕微鏡設定により、細胞分裂過程をリアルタイムで観察し、神経科学研究に有用なデータを取得する技術です。

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広視野顕微鏡を用いて長期的なイメージング哺乳類細胞

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

実際に行う手順としては、まずここに固定し、その後に交換します。では、可能な限り慎重に吸引します。よし。数秒間保持します。はい。大丈夫です。このライブセルイメージンググリッドの重要な特徴は、倒立顕微鏡であることです。つまり、対物レンズとサンプルが下側に配置されています。対物レンズは上を向いており、対物レンズとサンプルを含む顕微鏡のほぼ全体が37 °Cに保たれています。したがって、このプラスチックボックス内のすべてが37 °Cに維持されています。ステージのすぐ上に、空気とCO2の混合ガスが供給されています。濃度は5%CO2です。つまり、サンプルが実際にはセルの中にあり、あたかもセルインキュベーターの中にいるような状態にするのが狙いです。このように、こちらが空気とCO2のミキサーで、加湿および加熱された後、ステージ上のサンプルに配管されます。さて、本日は蛍光1チャンネルのGFP蛍光のみを行います。こちらが5% CO2が導入されるホースで、ステージホルダーにそのまま適合します。それは重要です。次に、これらを閉じて取り出し、最初のポジションへ移動します。まず、コントロールサンプルである最初の視野に向かい、画面上の表示に基づいてポジションを選択します。各ウェルに移動するたびに、必ず顕微鏡で確認するようにしてください。ウェルごとに焦点面が異なり、ディッシュの底部が完全に平らではないためです。したがって、ウェルを移動する際には微調整が必要になります。現在は最初のウェルにいますので、焦点を合わせます。まず、顕微鏡の透過光を点灯させます。そして、すべての光が接眼レンズに届いていることを確認します。接眼レンズを覗き、視野がきれいに確保されているかを確認してください。その後、透過光を消して蛍光灯を点灯させ、観察している細胞が健全であり、アポトーシスを起こしていないことを確認します。そして、これをオフにします。次に、送信を行います。ここから位置の選択を始めますので、光路をカメラに送る必要があります。こちらがカメラです。顕微鏡の設定をすべてカメラに送るようにするため、接眼レンズからは何も見えなくなります。そこで、顕微鏡を制御するソフトウェアで、今回の目的に適したフィルターセットであるpsyを選択し、その後、露光時間を設定します。私はこれらの細胞を非常によく知っており、露光時間が0.2秒で適切であることも分かっています。そのため、ソフトウェアにそのように設定し、「フォーカス」ボタンを押します。これは、基本的に生存している状態です。ライトが点灯し、細胞が見えるかと思いますが、ここが良好な視野である理由は、蛍光も含め、すべての細胞にアポトーシス細胞が見られないためです。アポトーシス細胞は非常に強く発光する傾向があり、また、視野内に汚れやゴミも存在しません。こちらに見えるのは、実際、これが中期

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Biology

生物学

リアルタイムでイメージング胚組織では、長期間にわたって挑戦されています。ここでは、高い空間分解能と時間分解能で長時間ニワトリ脊髄の細胞とサブ細胞の変化を監視するためのアッセイを示す。この手法は、神経系や胚の他の地域に適応することができます。...

開発神​​経上皮における細胞挙動の高解像度のライブイメージング

タイムラプスイメージングは​​、特定の行動のパラメータと異なる遺伝的病変の間に相関があるかどうかを判断するために乳癌リスクの遺伝子改変モデルマウス由来の初代前腫瘍性乳腺上皮細胞の挙動を評価するために使用される。...

乳がんの遺伝子改変マウスモデル由来の初代前癌乳腺上皮細胞のタイムラプスイメージング

細胞外マトリックスは、創傷治癒、炎症や腫瘍形成の間に、実質的なリモデリングを受ける。我々は、線維性のダイナミクスならびにエピ蛍光または二光子顕微鏡を用いて、高い空間分解能と時間分解能を有する網目状のマトリックス成分を可視化する新規な生体免疫蛍光顕微鏡法を提示する。...

落射蛍光による組織マトリックスのコンポーネントと二光子顕微鏡の長期生体内免疫蛍光イメージング

手元の発達プロセスには10日間の一時的な勾配で動作するため、胚性哺乳動物の蝸牛のライブイメージングは​​困難である。ここでは、培養した後、5日間にわたり蛍光レポーターマウスから採取した胚性蝸牛外植片組織を画像化するための手法を提案する。...

マウス蝸牛外植片の長期的タイムラプスイメージング

このプロトコルは、真空安定化イメージングウィンドウを使用して、無傷の肺の長期高解像度シングルセルイメージングをリアルタイムで行うための多光子顕微鏡の使用を説明しています。...

真空安定化撮像窓と肺における長期高分解能生体顕微鏡

ここで提示する方法は、マイクロパターニングと定量イメージングを使用して、哺乳類培養における空間的組織を明らかにする。この技術は、標準的な細胞生物学研究室で確立することが容易であり、インビトロでのパターニングを研究するための扱いやすいシステムを提供しています。...

マイクロパターンと定量イメージングを用いた哺乳類細胞の新しい空間組織のマッピング

ここに提示されるのは、覚醒した頭部拘束マウスにおける脳細胞の縦方向イメージングのための慢性頭蓋窓の移植のためのプロトコルである。...

覚醒マウスにおける 反復生体内 イメージングのための頭蓋窓の移植

ここでは、関心のある組織/器官および皮膚に直接接着することができる光学的に透明なシリコーン窓を使用して、長期の生体内イメージングのためのアプローチを提示する。これらの窓は、現在現場で使用されている他の窓よりも安価で汎用性が高く、外科的挿入は動物に限られた炎症および苦痛を引き起こす。...

透明なシリコーン窓による縦方向の生体内イメージング

このプロトコルは、交換可能な蓋(R.MIW)を備えた新しい乳房イメージングウィンドウを記述しています。R.MIWの移植後の生体内顕微鏡検査は、異なる発達段階の間に細胞分解能を有する健康および罹患した乳腺の縦方向および複数日のイメージングを可能にする。...

交換可能な蓋付き乳房イメージングウィンドウを使用した縦方向のバイタル内顕微鏡

本プロトコルは、フードラップ、透明シリコーン、およびカバーガラスを使用して、大きな(6 x 3 mm2)頭蓋窓を作成することについて説明しています。この頭蓋窓は、同じマウスでの in vivo...

インビボ 大きな頭蓋窓を用いたマウスからの広視野および2光子カルシウムイメージング

現在のプロトコルはイメージの定量化のための方法の眼球レンズの末梢構造の視覚化のための新しい全台紙のイメージ投射を記述する。これらのプロトコルは、レンズのマイクロスケール構造とレンズの発達/機能との関係をよりよく理解するための研究に使用できます。...

末梢レンズの構造、細胞形態、組織を可視化・定量化するためのホールマウントイメージング

学ぶ広視野顕微鏡を用いた哺乳類細胞の長期ライブイメージング法。37度恒温環境と倒立型顕微鏡設定により、細胞分裂過程をリアルタイムで観察し、神経科学研究に有用なデータを取得する技術です。

広視野顕微鏡を用いて長期的なイメージング哺乳類細胞

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