Name: 非ヒト霊長類の脳の公平な立体学を：大切なのを知ること (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-14T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: 学ぶ非ヒト霊長類の脳における公平な立体学的手法を用いた神経細胞数の正確な推定法を。ステレオタキシックアトラスと光学ディセクターを活用し、脳構造と機能の関係を解明する神経科学研究に貢献します。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者は、彼の継続的な技術サポートのためにIkiel Ptitoに感謝します。 MPにNSERC助成金。

パート1：組織の前処理が行われるのは、Burkeらによると行う必要があります。 （2009）5。 <ol><li>簡単に言えば、組織はよくパラホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、またはホルマリンで灌流してください。これは通常、他の臓器を収穫するために使用される標準transcardial灌流によって達成することができます。本研究では被験者は深く、（10 mg / kgを、IM）塩酸ケタミンで鎮静したペントバルビタールナトリウムの過剰投与（25 mg / kgを、IV）を使用して、安楽死させ、完全に放血するまで0.1MのPBSでtranscardially灌流。これは、5分（〜1リットル）のためのPBS中4％パラホルムアルデヒド溶液が続いている。組織はよくparaformaldeyhde、グルタルアルデヒド、またはホルマリンで灌流してください。脳が定位、ブロックされた頭蓋骨から削除すべきである、凍結保護、および5冷凍、、定める量を重量を量った。 </li></ol>第2部：組織の系統的サンプリング、Burkeらによると。 （2009）6。 <ol><li>この例では、ベルベットモンキーの脳の前頭葉に焦点を当てた。参照のスペースは中央の溝から左半球の前頭極への皮質組織を含むように定義されていました。我々の目的のためにシリーズは50μmので切片化、皮質全体の10分の1のセクションに設定した。つの完全なシリーズは、クレシルバイオレット（シリーズ＃1）で染色した。シリーズ2は、分割されたので、セクションの半分は、ミエリンの啓示とアセチルコリンエステラーゼのための残りの半分のステンドグラス（特定の皮質下の領域の描写のため）のために金の塩化物で染色した。すべての他のシリーズは、当社の長期的な研究計画の一環として、抗原の保護区でバンクレジスタれた。 </li></ol>パート3：立体学（詳細については、ムートン2002を参照してください）4 <ol><li>細胞数の合計推定（N）は次式に基づいて計算されます。 N = SSF -1 xのASF -1 xのTSF -1 xのΣQ - SSFは、セクションのサンプリングの割合です、ASFは、地域のサンプリング率、厚さのサンプリング割合に応じTSF（組織の測定された厚みがディセクタ高さで割ったされている場所）、およびΣQです-カウント対象となるオブジェクトの合計数です。解剖する人の中。このプロトコルの次のセクションでは、SSF、ASF、TSFとΣQを決定する方法を示します。 </li><li>節のサンプリング分数（非コンピュータベース） <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li>全体の基準のスペースは十分前方から後方と腹側の背側に定義する必要があります。この例では、前頭葉に興味を持っていたと前頭極（前方）の先端から中心溝（後方）と外側溝（腹側）までの領域として定義されており、島を除外しています。 </li><li>この特定の主題の前頭葉のために760のセクションの合計は、体系的にクレシルバイオレットで76ステンドグラスを収集した。ターゲットは、基準空間の全体にわたって10個のセクションだったので1月6日クレシルバイオレット染色された切片は1 / 60のセクションのサンプルの分画につながる、サンプリングされた。我々は、ランダムに最初の6クレシルバイオレットで染色したセクションのいずれかで開始し、体系的に、その後1 / 6サンプリング。 13セクションの合計は、選択対象（図2）のために採取した。 </li></ol></li><li> エリアのサンプル画（コンピューターベース） <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li>パイロット研究では、約100から300 disectorsで参照空間をサンプリングするために、最適なグリッドサイズ、エリアサンプリングの分数を示します。前頭葉内に、2500μm2であるのグリッドサイズは、この主題は254 disectors（図2）の平均値が得られた。 disectorの大きさは、このケースでは、0から5まで約カウントオブジェクトの間の神経細胞を生成する必要があります。 </li></ol></li><li>厚さのサンプルのフラクション（コンピューターベース） <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li>各disector場所で、組織の高さを測定し、この高さの割合は、サンプリングされ、これは厚さサンプリング分数として知られています。最後のオブジェクトにフォーカスが出たばかり表示されるまで測定された厚さを決定するために、最初のセルまで、z平面でフォーカスは、セクションの上部、すなわちにわずかにバックアップし、子音が鳴ります。細胞がボケがほとんどになるまで、組織の底を確認するには、z平面でフォーカス。 </li><li> z平面を通じて着目し、細胞はすべての深度で染色する必要がある、そうでない場合、これはセクションを再染色されるべき場合には、組織の染色または不均一な脱水の不完全浸透している可能性があります。この予防措置は、比較的厚い組織切片を通じてimmunoprobesの浸透を必要とする免疫染色組織のために特に重要です。このような理由から、免疫染色組織は軽く好塩基性染色（例えば、クレシルバイオレット、HEMAで対比されるべきであるtoxylin）正確にセクションの上部と底部を決定し、抗体の浸透性を確認するため。本研究ではセクションが50μmのミクロトーム設定でスライスされた。すべての組織の処理が完了した後、測定された組織の厚さは約65％の平均収縮で、17.9μm（図2）を平均した。これらの結果は、ルーチン組織プレパラート7で処理された組織の典型的な収縮を表すことに注意してください。 </li><li>典型的な研究のためのデフォルトのdisectorの高さは、10μmである。 disector高さと測定されたセクションの厚みの違いは、ガードの高さは、生物学的機能がカウントされていない組織の体積である。ガードの高さを使用するには（例えば、失われたキャップ）のセクショニング面で組織の損傷を避けることができます。 </li></ol></li><li>カウントされたオブジェクトの合計数、ΣQ - <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li>認識誤りからのバイアスを避けるために、それは標準的な定義が関心のある特定の生物学的機能のために続いていることが不可欠です。このケースでは、我々は神経細胞を数えることにも興味があった。そのため、ニューロンがグリア細胞は、一般的に目に見える核小体と細胞質に欠けていたのに対し、目に見える中心部に位置する核小体と明確に定義された細胞質を持つものとして定義されました。この主題457ニューロンをカウントしたため。 </li></ol></li></ol>パート4：Stereologer -コンピュータによる立体学系（立体学リソースセンター、チェスター、MD） <ol><li> Stereologerシステムは、ユーザーがステップバイステップ方式で必要な情報を記入するよう求められます。 &quot;調査情報&quot;のセクションでは研究のパラメータが確立されています。基準スペースが研究のために定義する必要があるため、ボリュームのパラメータは（参照のスペースのためカヴァリエリの推定量を選択する必要があります）を選択してください。オブジェクトのボリュームも関心のオブジェクトの集団の数加重量を推定するためにここで選択することができる。この例では、基準空間の唯一のボリュームが選択されまし​​た。各オブジェクトの場合は、番号を選択し、この場合のニューロンで、興味の機能を定義します。 </li><li>ケースの初期化：このセクションでは、サンプリングの情報が確立されている。スラブサンプリング間隔を（組織の別のスラブが徹底的にスライスされ、各セクションを順番に配置されている場合は、ここで1を入力）を入力します。基準スペース（この場合は760）を介して行わセクションの合計数を入力してください。その後、セクションのサンプリング間隔を（この場合59）を入力します。システムは、サンプリングされるセクション（この場合13）の数を計算します。 </li><li>プローブパラメータ：このセクションでは、グリッドとdisectorのサイズを定義します。ボリュームの場合は、編集メニューの下のグリッド間隔を定義するために2.5倍、10倍の低倍率を使用してください。オブジェクトの倍率は100倍（NA 1.3または1.4）で行ってください。フレーム領域は、disectorの大きさですこの場合、我々は50％のスクリーンを使用。フレームの高さはdisectorの厚さであり、ここで10μm以下に設定。フレームの間隔は、グリッドのサイズです。私たちのパイロットスタディでは、150から200フレームの間の2500μmの利回りが比較的大きな基準空間を体系的、統一的な方法で間隔をあけていることがわかった。小規模な地域については、より小さいグリッドサイズを使用する必要があります。パイロット研究では、各特定の研究のための光プローブのパラメータを識別します。 </li><li>試験パラメータが確立されれば、組織を介してサンプリングすると、進むことができます。プログラムは最初のセクションをサンプリングするように要求されるステップ1：このプログラムは、セクションの参照領域をトレースするために、低倍率で、ユーザーに要求します。その後、システムはそのポイントが基準空間内に収まることを確認されるプローブのパラメータおよびユーザーに基づいて、セクションの上にグリッドを配置します。ポイントは基準空間内にない場合は、単にポイントをクリックすると、ボリュームに計算されませんステップ2：システムはフレームの間隔のパラメータに基づいて、基準空間上の新しいグリッドを配置します。交点は、基準空間内に収まることを確認してくださいステップ3：。。システムは、ユーザーがより高い倍率の目標に切り替え、最初のセクタにするためにステージを移動するプロンプトが表示されますは、 手順4：この時点でシステムはユーザが定義するプロンプトをセクションの上部と下部には、システムはz軸のサンプリング間隔を設定ステップ5：。その後、ユーザーは、z平面を通してdisector内にある各オブジェクトをクリックします。赤い線またはdisectorの底面に触れないオブジェクトはカウントされないことがあります。各オブジェクトがカウントされると、[次へ]をクリックします。ステージは次のdisectorと4と5が繰り返されるステップに移動します。一度、すべてのセクションに対してdisectorsのがカウントされている、システムは、検出対象に次の順番のセクションを挿入するようユーザーにプロンプ​​トが表示されます。シーケンシャルセクションのすべてが完了するまでステップ1〜5が繰り返されます。サンプリングされた。システムは、ASF、SSF、TSF、及びΣQの計算を提供します。これらのパラメータに基づいて、システムは、基準量を推定Nを生成し、CEの推定数とボリュームの両方になります。また、より効率的になることやCE（図2）を削減する勧告を与える。 </li></ol>パート5：代表的な結果： 公平な立体学は、基準空間内の細胞集団の効率的かつ信頼性の高い推定値を提供します。システマティックサンプリングと定義されている基準空間に依存するすべてが利用可能なコンピュータベースの立体的システムの数があります。我々は、0.042の平均CEで828百万​​（図3）以上になる2歳のvervetsの大脳皮質の総神経人口を推定するためにBioQuantライフサイエンスシステムを使用している。私たちは、その後、前頭葉は皮質ニューロン8の約半分数を占めていると推定するStereologerシステムを使用している。 <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig1.jpg" alt="図1" /> 図1コンピュータベースの立体学システム。立体学システムの基本的なアップセットは、電動ステージ（XYZ）と同じ、顕微鏡、ステージコン ​​トローラ、ビデオカメラ、コンピュータ、およびソフトウェアです。最終的に選択されているシステムは、効率性、必要性、およびコスト分析に基づいている必要があります。 <div style="border:1px #000000 solid"><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2">検査情報</td></tr><tr><td>スタディ名</td><td>前頭皮質</td></tr><tr><td>治験責任医師</td><td>メガバイト</td></tr><tr><td>種</td><td> AG </td></tr><tr><td>リファレンススペース前頭葉</td><td>皮質</td></tr><tr><td colspan="2">ノート</td></tr><tr><td colspan="2">ケース情報</td></tr><tr><td>データコレクタ</td><td>メガバイト</td></tr><tr><td>日</td><td>年、2008年4月30日</td></tr><tr><td>グループ</td><td>コントロール</td></tr><tr><td>対象と</td><td> O26 </td></tr><tr><td colspan="2">ノート</td></tr><tr><td colspan="2">サンプリング特性</td></tr><tr><td>スラブサンプリング間隔</td><td> 1 </td></tr><tr><td>セクションの合計数</td><td> 760 </td></tr><tr><td>節のサンプリング間隔</td><td> 59 </td></tr><tr><td>始まるセクション</td><td> 2 </td></tr><tr><td colspan="2">分別</td></tr><tr><td> ASF </td><td> 0.0002 </td></tr><tr><td> SlabSF </td><td> 1.0000 </td></tr><tr><td> SSF </td><td> 0.0169 </td></tr><tr><td> TSF </td><td> 0.5587 </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="6">結果の概要</td></tr><tr><td>パラメータ</td><td>プローブ</td><td>の名前</td><td>その結果</td><td> CE </td><td> SD </td></tr><tr><td>厚</td><td> --- </td><td> --- </td><td> 17.8996μ </td><td> --- </td><td> --- </td></tr><tr><td>数</td><td> Disector </td><td>ニューロン</td><td> 243833769.1473 </td><td> 0.0474 </td><td> N / </td></tr><tr><td>ボリューム</td><td>カヴァリエーリポイントグリッド</td><td>ボリュームを</td><td> 1719769397954.1284μ^ 3 </td><td> 0.0078 </td><td> N / </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2">勧告</td></tr><tr><td>プローブ</td><td>オブジェクト番号（ニューロン） </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0.0474 </td></tr><tr><td>推奨事項</td><td> CEは許容範囲です。 </td></tr></tbody></テーブル&gt; <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2">閲覧Disectorsの数が多すぎると、Disector間隔を増やします。 </td></tr><tr><td>プローブ</td><td>地域の音量（ボリューム） </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0.0078 </td></tr><tr><td>推奨事項</td><td> CEは許容範囲です。 </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="3"> SECTIONの結果</td></tr><tr><td>セクション</td><td>ニューロンNumObjectsニューロンNumCorners </td><td>ボリュームRegPoints </td></tr><tr><td> 1。 40 </td><td> 48 </td><td> 34 </td></tr><tr><td> 2。 26 </td><td> 52 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 3。 29 </td><td> 56 </td><td> 48 </td></tr><tr><td> 4。 39 </td><td> 100 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 5。 49 </td><td> 112 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 6。 53 </td><td> 156 </td><td> 120 </td></tr><tr><td> 7。 65 </td><td> 128 </td><td> 106 </td></tr><tr><td> 8。 45 </td><td> 108 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 9。 52 </td><td> 100 </td><td> 77 </td></tr><tr><td> 10。 26 </td><td> 64 </td><td> 60 </td></tr><tr><td> 11。 21 </td><td> 44 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 12。 11 </td><td> 36 </td><td> 32 </td></tr><tr><td> 13。 1 </td><td> 12 </td><td> 6 </td></tr></tbody></table></div> Stereologerシステムで得られた源泉のローブから図2の結果。前頭葉では、立体的プロセスの最も長い部分は、体系的なサンプリングとセクショニングにあった。地形、体積と神経細胞の推定値は、各科目の約1日で完了した。左半球を採取し数は両半球のおおよその見積もりにテキストを2倍に。 <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig3.jpg" alt="図3" /> 図3 BioQuantで得られた皮質神経人口推計。BioQuantシステムは前の細胞計数の正確な地形が必要です。その13セクションの平均値をサンプリングした。皮質地形とそれに続くボリュームの推定では、被験者ごとに15〜20時間の間にかかりました。地形は、2.5xの目的で行ったとカウントは、100倍油浸対物レンズ（NA 1.3）使用して行われました。すべての第百セクションは、サンプリングされた180 disectorsの平均と左半球全体に選ばれました。地形が完了した後は神経細胞のカウントは一日かかりました。左半球を採取し数は両半球のおおよその見積もりにテキストを2倍に。

<ol><li>West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22Aat+Rec%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Aat Rec. 231, 482-497 (1991).</li>
<li>Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Any+way+you+cut+it%3A+a+new+journal+policy+for+the+use+of+unbiased+counting+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods.</a> J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).</li>
<li>Sterio, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unbiased+estimation+of+number+and+sizes+of+arbitrary+particles+using+the+disector%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector.</a> J Microsc. 134, 127-136 (1984).</li>
<li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMouton%2C+PR+%22Principles+and+Practices+of+Unbiased+Stereology%22">Principles and Practices of Unbiased Stereology</a>. , The Johns Hopkins University Press. Baltimore. (2002).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+non-human+primate+brain+in+stereotaxic+space%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+banking%3A+Making+the+most+of+your+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Brain banking: Making the most of your research.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Manaye, K. F., Wang, P., O'Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+Quantification+Of+Dtg+APP%2FPS1%3A+Neuroimaging%2C+Stereology%2C+And+Biochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22AGE%22%5BJournal%5D)">Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry.</a> AGE. 29, 87-96 (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
<li>Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Batch+immunostaining+for+large-scale+protein+detection+in+the+whole+monkey+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
</ol>

霊長類の脳における公平な立体学は、他の生体試料のそれと似ています。しかし、霊長類の脳の大きさを考えると、慎重な処理計画が50μmの時にスライスするときにベルベットモンキーの単一の半球は、1200以上のセクションをもたらすので、推奨されます。まず、定位、ブロックおよびサブジェクト間のセクションの標準的な平面を提供するブロック間の部分的なセクションを最小限に抑え、かつ管理サイズのブロック5を提供する1センチメートルブロック、に脳をブロックすることを推奨します。立体学のための重要なステップは6-10セクションを参照領域を介して取得されるような体系的なサンプリングである。霊長類の脳では、これは我々は長期的な研究計画の6の保持抗原の組織をバンキング提案するそれぞれの脳から得られる潜在的なデータを最大限にするためにので、未処理材のかなりの量を残す。組織は、バンクされている場合、サルの脳内標的タンパク質を識別するための体系的免疫検出のアプローチは、立体学9で調製することができる。このような皮質や葉などの大きな領域は、その前の計画は潜在的な関心の最小基準空間を介して少なくとも10のセクシ...

<table><tbody><tr><td>Stereologer</td><td>Stereology Resource Center (Chester, MD)</td><td>www.disector.com</td><td></td></tr><tr><td>Stereology Tool-Kit Stereologerシステム</td><td>BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StereoInvestigator</td><td>MBF Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

非ヒト霊長類の脳の公平な立体学を：大切なのを知ること

Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain

ヒト以外の霊長類はヒトの脳の正常機能と疾患のプロセスを理解する上で重要な並進種です。公平な立体学、組織切片における生物学的なオブジェクトの定量化のための最先端のように受け入れられる方法<sup&gt; 2</sup&gt;、哺乳類の脳の生物​​学的機能の信頼性の高い構造データを生成します。<sup&gt; 3</sup&gt;。アプローチの主要なコンポーネントは、公平であり内のセルの番号とサイズ、繊維と毛細管の長さ、表面積、地域のボリュームと生物学的オブジェクトの空間分布の定量化と組み合わせて解剖学的に定義された構造（基準空間）、の（体系的ランダム）サンプリング基準空間<sup&gt; 4</sup&gt;。以前の方法に比べてこれらの立体的なアプローチの利点は、障害のある仮定と非検証可能なモデルに起因する系統的な（非ランダム）エラーの既知のすべての源の回避です。本研究では、ベルベットモンキーの脳の前頭皮質における総神経人口を推定するためにコンピュータ化された立体学の生物学的応用について説明（<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;）、2つの市販の立体学プログラム、BioQuantライフサイエンスとStereologer（図1）から支援を受けて。コントラストとBioQuant両方の結果の比較とに加え、<em&gt; Stereologer</em&gt;システム、本研究では、の詳細なプロトコルを提供します。<em&gt; Stereologer</em&gt;システム。

霊長類の脳の解剖学的組織は、ヒトの正常と病理学的状態に重要な洞察を提供することができます。公平な立体学が正確かつ効率的に所定の基準空間の合計ニューロンの数を（または他の細胞型）を推定するための方法です。<sup&gt; 1</sup&gt;。

非人間霊長類は、ヒトの脳の正常な機能および疾患プロセスを理解するための重要なトランスレーショナル種である。バイアスのない...

この手順は、まず基準空間を定義することから始まります。目的領域の境界を決定するには、脳立体定位アトラスが有用です。次に、スライドを整理し、切片のサンプリング頻度を決定します。サンプリングする最初の切片を顕微鏡にセットし、サンプリングパラメータを入力します。組織学的システムにおいて、参照空間上にグリッドが配置され、各交点において光学ディセクターによるサンプリングが行われます。各切片のすべての光学ディセクターのサンプリングが完了すると、ステレオシステムにより研究結果が提供されます。こんにちは。モントリオール大学検眼学部、視覚神経科学研究室のMark Burke博士です。こんにちは。同じくモントリオール大学検眼学部、視覚神経科学研究室のShaheen Zur博士です。こんにちは。モントリオール大学検眼学部、視覚神経科学研究室のディレクターを務めるMorris Petto博士です。本日は、非人間類類における不偏放射線学的解析の手順について解説します。当研究室では、さまざまな脳領域における全神経細胞集団を推定するためにこの手法を用いています。それでは始めていきましょう。あらかじめ灌流固定した脳を用いて本プロトコールを開始します。パラホルムアルデヒドなどの固定液で処理し、脳をステレオタキシス装置で固定した後、凍結保護処理を行い、凍結させておきます。これらのプロトコールの詳細は、当社の最近のJoVE論文「non-human primate brainの解剖」をご参照ください。定位固定座標系において、脳はすべての参照空間が含まれるように体系的に切断される必要があります。このプロトコルの詳細については、最近のJoVE記事「brain Banking, making the most of your research specimens」をご参照ください。本実験では、ベルベットモンキーの脳の前頭葉を使用します。一連の切片は皮質全体にわたって10分の1の間隔で設定し、50 µmの厚さで切断します。推定細胞数 N を算出するために、以下の式を用います。ここで、SSF は切片サンプリング分率であり、SF は面積サンプリング分率です。TSFは厚さサンプリング分率であり、組織の測定厚さをディセクターの高さで除したものです。また、cubeはディセクター内でカウントされた目的物の総数です。切片サンプリング分率を決定するには、参照空間全体の前後および背腹方向が明確に定義されていなければなりません。本手法では前頭葉に注目しており、これを前頭極の先端から中心溝および外側溝までの領域として定義します。この被験者の前頭葉の島皮質を除き、合計760枚の切片を系統的に収集し、そのうち76枚をクレストバイオレットで染色しました。リファレンス空間全体で10枚の切片を標的としたため、クレストバイオレット染色切片

knowing-what-counts-unbiased-stereology-in-the-non-human-primate-brain

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ヒト以外の霊長類は脳の正常な処理の理解のための重要な並進種です。霊長類の脳の解剖学的組織は、ヒトの正常と病理学的状態に重要な洞察を提供することができます。...

定位空間における非ヒト霊長類の脳を解剖

脳の銀行と生体物質の系統的サンプリングは、公平な立体学の基礎を提供し、各試料から得られる潜在的なデータを最大限に高めることができます。...

脳バンキング：あなたの研究の標本のほとんどを作る

出典: Olesen, M. V., et al.電気けいれん療法のラットモデルにおける細胞数を推定する光学分画器技術. J. Vis. Exp. (2017).

光分画器技術を用いたラット脳組織における新規生成ニューロンの定量化

主催脳の切断手順は決定的な神経病理学的診断と特定の神経精神現象を相関させる必要があります。脳挿し木は、様々な臨床学術不測の事態に基づいて異なる方法で実行されています。このプロトコルは、ヒトの脳の病理における半球の違いを調査し、現在および将来の生体分子/ニューロイメージング技術を最大限にするために、対称bihemispheric脳切断手順を説明します。...

対称Bihemispheric死後脳人間に健康と病理学的脳条件を研究するためにカッティング

このプロトコルは、選択的ニューロン集団の大規模な再構成を説明し、蛍光マーカーを発現する修正された狂犬病ウイルス、および独立した、公平なクラスタとラベルされた次の逆行性感染症は、それが明確なニューロンのサブクラス間の形態学的評価指標の包括的な特性評価を可能に分析します。...

大規模な再建と選択的集団のニューロンを分類するために形態学的指標に基づいて独立、不偏クラスタリング

ここでは、電気刺激刺激後のラット海馬における新しいニューロンの形成およびその生存を定量化するために使用される立体的方法、光学分画器を提示する。正確に実施されると、立体方法の感度と効率は、固定された所定の精度で正確な推定を保証する。...

電気ショック療法のラットモデルにおける細胞数の推定のための光学分画器技術

この作品には、標準的な顕微鏡装置 (すなわち、光学顕微鏡 (x、y、z のモーターを備えられたオブジェクト テーブルを使用してマウス中脳ドーパミン作動性神経細胞数の公平な薬剤推定手順プロトコル平面)、およびデジタル画像解析のためのパブリック ドメイン...

光分留と標準的な顕微鏡装置を用いたマウス中脳のドーパミン作動性ニューロン数の薬剤の評価

以下に概説する方法は、三次元(3D)印刷法とMRIデータ抽出の新しい組み合わせを用いた非ヒト霊長類(NHP)脳神経外科の調製のための包括的なプロトコルを提供することを目的とする。...

非ヒト霊長類の脳神経外科計画のためのMRIベースのツールボックス

このプロトコルでは、iDISCO+を使用して無傷のマウス脳の磁気共鳴イメージング、クリアリング、および免疫標識を行う方法について説明し、その後、ライトシート顕微鏡を使用したイメージングの詳細な説明、およびNuMorphを使用したダウンストリーム分析について説明します。...

MRI、組織透明化、ライトシート顕微鏡を用いた無傷新生児マウス脳の全脳単一細胞イメージングと解析

シリアル2光子断層撮影法(STPT)イメージングは、2光子イメージングと自動ステージ制御およびミクロトームスライスを組み合わせて、組織の塊を3次元形状でイメージングする技術です。ここでは、マーモセットの脳がその構造的特徴をよりよく理解するために、それを実装するためのプロトコルについて説明します。...

神経解剖学的解析のためのマーモセット脳全体の連続2光子断層撮影法

現代の神経科学は、実験室の齧歯類や人間を含む多くの種の違いを探る必要があります。しかし、大きな脳を持つ哺乳類が関わると技術的な困難が生じます。このアプローチは、非常に異なる哺乳類における神経細胞集団の種間変異に対応し、進化的パターンを明らかにするための類似結果を生み出します。...

異なる哺乳類の脳における定量的細胞計数研究の比較アプローチ

学ぶ非ヒト霊長類の脳における公平な立体学的手法を用いた神経細胞数の正確な推定法を。ステレオタキシックアトラスと光学ディセクターを活用し、脳構造と機能の関係を解明する神経科学研究に貢献します。

非ヒト霊長類の脳の公平な立体学を：大切なのを知ること

さらに動画を探す