Name: マウス乳腺上皮細胞は乳腺刺激分化の過程でMammospheresを形成し、 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-06T16:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 51 s
Description: 学ぶマウス乳腺上皮細胞HC11における乳腺刺激分化の誘導とマンモスフィア形成の評価方法。分化状態を定量化する実用的なマーカーとして、ドーム状構造の観察と計測技術を解説する。

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議会監督医学研究基金助成金（DAMD17 - 01から0264）からMLカトラーとMLカトラーへの米軍癌研究所の資金は、作業を支持した。

<ol><li> HC11細胞を10％ウシ胎児血清、5μg/mlインスリン、10mMのHEPES、能力を確立するために10ng/ml上皮成長因子（EGF）を添加したRPMI 1640培地で6日間コンフルエントまで増殖させた。 </li><li>細胞をPBSで洗浄し、24時間EGFのない増殖培地中で維持した。 </li><li>乳腺刺激分化細胞を分化培地中でインキュベートしたを誘導するために、デキサメタゾン（10 -6 M）、インスリン（5μg/ mlの）とプロラクチン（5μg/ ml）を持つ、すなわちRPMIはDIPと呼ばれる。 </li><li>記載時間後のDIPのほかでは、mammospheresは、デジタルカメラ、オリンパスIX71顕微鏡を用いて位相差顕微鏡により撮影し、計数した。 </li></ol>代表的な結果： 正常乳腺上皮細胞単層と複数のmammospheresだけでなく、単一のmammosphereのハイパワーの倍率の低消費電力の倍率はそれぞれ、図1に示されています。 <img src="/files/ftp_upload/1265/1265fig1.jpg" alt="" /> 図1。 Mammospheres。（）正常乳腺上皮細胞単層は、コンフルエント細胞の平らな層として表示されます。 （B）DIP刺激の3〜5日後に複数のmammospheresが表示されます。 5日に撮影された写真は、DIP加算を投稿する。 DIPさらに後5日間でmammospheresを含む単一のフィールドの（C）高倍率。

<ol><li>Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vectorial+secretion+by+constitutive+and+regulated+secretory+pathways+in+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Epithelial+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells.</a> Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).</li>
<li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoid+induced+expression+of+connective+tissue+growth+factor+contributes+to+lactogenic+differentiation+of+mouse+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells.</a> J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).</li>
</ol>

この手法を成功させると最高の品質のためにためには、上皮細胞は乳腺刺激ホルモンで誘導される前に合流する地点に維持する必要があります。定量化が困難に多数のmammospheresが、ある状況があるかもしれません。従って、定量的な目的のためにそれはmammospheresの数がカウントされることができるとき時点でmammospheresを撮影するのが最善です。 乳腺上皮細胞の乳腺刺激分化の程度を決定するために使用される様々な分子マーカーが存在しますが、二次元培養で増殖した細胞のために使用されるいくつかの形態学的マーカーがある。牛乳のタンパク質が蓄積することができる小型のドーム構造を形成する上皮細胞の単層の能力は、この発達過程中に発生した形態学的変化を監視できるようにするためのモードが用意されています。

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Invitrogen</td><td>21870076</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Quality Biological, Inc.</td><td>118089060</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>インスリン</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>12585-014</td><td></td></tr><tr><td>デキサメタゾン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1756</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>オリンパス株式会社</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>デジタルカメラ</td><td>QImaging</td><td>Retiga 2000RV Fast 1394</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス乳腺上皮細胞は乳腺刺激分化の過程でmammospheresを形成し、

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

一般的にマウス乳腺上皮細胞培養における乳腺刺激分化の程度を決定するために使用される表現型の指標はmammospheresと呼ばれるドーム状のセル構造の形成である<sup&gt; 1</sup&gt;。 HC11細胞株は、乳腺乳腺刺激分化の両方の規制の研究のためのモデルシステムとして採用されている<em&gt; in vitroで</em&gt;と<em&gt; in vivoで</em<sup&gt; 2</sup&gt;。 HC11細胞は乳腺刺激ホルモンによる治療に反応して牛乳のタンパク質を区別して合成する。合流へHC11マウス乳腺上皮細胞の成長に続いて、乳腺刺激分化がデキサメタゾン、インスリン、およびDIPと呼ばれるプロラクチン、乳腺刺激ホルモンを含む組み合わせの添加により誘導した。分化誘導HC11細胞を120時間後に分化誘導し、列挙されたそれぞれの文化に登場mammospheresの数の倍、最大で撮影されました。個々のmammospheresの大きさは、分化の程度と相関し、これは、分化細胞の画像に描かれている。

HC11乳腺刺激分化はmammospheresと呼ばれるドーム型の構造体の形成によって特徴づけすることができます。構造は、乳腺刺激分化を定量化を支援するために、位相差顕微鏡で列挙することができます。

マウス乳腺上皮細胞は乳腺刺激分化の過程でMammospheresを形成し、

マウス乳腺上皮細胞培養において、乳生成分化の程度を判定するために一般的に用いられる表現型指標は、...の形成である。

こんにちは。私は、統一軍事大学（Uniform Services University of the Health Sciences）病理学部のMary Lou Cutler博士の研究室に所属しているBethany Morrisonです。本日は、HC11マウス乳腺上皮細胞からマンモスフィアを形成させる手法をご紹介します。当研究室では、乳腺分化の研究にこの手順を用いています。それでは、プロトコルを開始しましょう。まず、HC 11細胞を10%胎児牛血清、5 µg/mL インスリン、10 µM HEPES、および 10 ng/mL 上皮成長因子（EGF）を添加したRPMI 1640培地で6日間培養し、コンフルエントまで増殖させてコンピテンスを確立させます。これらの細胞は、組織培養フード内での遺伝子分化の調節を研究するために、Nancy HinesおよびBernard Gronerらの研究室で広く使用されてきました。その後、細胞をPBSで洗浄し、EGFを含まない増殖培地で24時間維持します。このインキュベーション後、乳腺分化を誘導するために、デキサメタゾン、インスリン、およびプロラクチンを添加したRPMIからなる分化培地で細胞をインキュベートします。分化培地において、デジタルカメラを備えたOlympus IX 71顕微鏡を用いて、マンモスフィアの撮影および計数を行います。位相差顕微鏡により、誘導後120時間にわたって、複数回マンモスフィアの撮影と計数を行います。この画像は、正常なメモリーの低倍率像を示しています。上皮細胞の単層細胞は、生殖腺ホルモンで刺激する前に、約3日間コンフルエントな状態で維持する必要があります。ここでは、誘導から3日後に形成された新生乳腺球体を低倍率で観察します。これらは、上皮細胞の間にランダムに配置された小さなドーム状の構造として現れ始めます。再び低倍率で確認します。ここでは、誘導から5日後に形成された複数のマンモスフィアを示しています。高倍率では、マンモスフィアの大きさおよび数ともに増加し続けていることが分かり、マンモスフィア特有の気泡状またはドーム状の形態が明確に観察できます。記憶乳腺上皮細胞を誘導し、腺分化のマーカーとして用いられるマンモスフィアを形成させる方法について説明しました。この手順を行う際は、誘導前に細胞をコンフルエントな状態に維持することが重要です。なぜなら、この期間に細胞はマトリックスタンパク質を産生し、腺性ホルモンに十分に反応するためにはこれらのタンパク質との相互作用が必要だからです。また、処理前に培地からEGFを除去することも重要です。EGFは分化プロセスを抑制するためです。以上となります。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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生物学

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学ぶマウス乳腺上皮細胞HC11における乳腺刺激分化の誘導とマンモスフィア形成の評価方法。分化状態を定量化する実用的なマーカーとして、ドーム状構造の観察と計測技術を解説する。

マウス乳腺上皮細胞は乳腺刺激分化の過程でMammospheresを形成し、

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