調製と細針吸引生検を実施するためにファントム病変を使用して

ファントム病変を準備するために、ベースプレートとして使用する6×6インチの段ボールを切ります。ベースプレートを0.5インチの厚さのコーキング剤で覆います。次に、2.5インチの長さに切ったバナナを、コーキング剤の中にゆっくりと押し込みます。

バナナをファントム病変のコアとして使用します。気泡が入らないようにして、コアをコーキング材に完全に埋め込みます。コアをラップで覆い、滑らかな山形に整えます。コーキング材が硬くなり、硬化した後は、暖かい場所でコーキングマウントをキュアさせます。

プラスチックラップを剥がし、バナナの芯から検体を回収するFNA（細針吸引細胞診）の習熟トレーニングと、塗抹標本作成の練習を行います。私はウィスコンシン大学医学部病理学教室細胞病理学部門のVino博士です。そして、私は同部門の細胞病理学フェローのGeorge Varszegi博士です。

本日は、入手しやすい簡単な器具と材料を用いて、FNAV（細針吸引細胞診）の手技習熟のための練習用擬似病変を調製する方法を実演します。一般的に、この手法は細胞病理学のフェローや病理学のレジデントに細針吸引生検の手順を導入するために用いられます。トレーニングが進むにつれ、フェローやレジデントは指導医の監督下で、実際に触知可能な病変に対して細針吸引を行い、技術を磨いていきます。

それでは、始めていきましょう。FNAB（微細針吸引細胞診）の練習セッションの1〜2日前に、擬似病変を準備します。開始前に、段ボール、コーキングガン、皮をむいていないバナナ、およびサランラップをベンチ上に用意してください。

ファントム病変を準備する最初のステップは、ベースプレートとして使用する6インチ四方の段ボールを切ることです。次に、ファントム病変のコアとして使用する、約2インチの長さのバナナの断片を切ります。ファントム病変のコアが準備できたら、コーキングガンを使用して、ベースプレート上に約0.5インチの厚さのコーキング剤を塗り広げます。

ファントム病変コアを濡れたコーキング剤に軽く押し込みます。次に、ファントム病変コアの上にさらにコーキング剤を加え、完全に埋め込みます。手袋を着用し、コーキング剤の中に気泡が入らないように注意してください。

コーキング剤を疑似病変コアに手で塗り広げ、完全に囲まれていることを確認します。次に、盛り上がった部分を6×6インチのプラスチックラップで覆い、滑らかな凸形状に整えます。コーキング剤の盛り上がりを暖かい場所に置き、使用したコーキング剤のブランドで推奨されている硬化時間よりも、さらに6〜8時間長く硬化させます。

コーキング剤は空気にさらされることで硬化します。盛り上げた状態のまま、華氏60度以上の室温で放置するか、または37℃でインキュベートして硬化を早めることができます。硬化後、コーキング剤が固まったところで、プラスチックラップを簡単に剥がすことができます。

FNAファントム病変が、FNAの手技練習に使用できる状態になりました。ファントム病変を準備し、硬化させたので、これを用いてFNABの手技を練習できます。ここでは機能性バルブ付きの組織採取器を使用していますが、基本的にはどのようなFNAシステムでも使用可能です。

THFBは、検体を穿刺するための針、吸引物を回収するためのニードルハブ、デバイス内部の圧力を制御するためのシリンジ、およびニードルハブとシリンジを接続・遮断するためのバルブで構成されています。まず、ニードルハブとシリンジを接続するバルブを閉じた状態で、FNAアセンブリを準備します。次に、シリンジピストンを引いて、シリンジバレル内に真空状態を作り出します。

次に、針先を病変部に挿入します。バルブを開いて、針のハブをシリンジバレル内の真空状態に接続します。真空によって、病変部から針、および針のハブへと物質が吸引されます。

病変部で針を前後に動かし、細胞成分の代表的なサンプルを吸引します。真空状態を維持したまま、針を異なる方向に病変部へ挿入し、異なる領域からサンプリングを行います。サンプリングが完了したら、バルブを回転させてシリンジバレル内の真空を解除し、バルブを開いて外気圧と等しくします。

次に、バルブを回転させ、外部およびシリンジバレルから切り離します。バルブを閉じた状態で、病変部から針を抜除します。バルブを閉じたままにすることで、ハブ端にわずかな陰圧が維持され、毛細管現象によって検体が病変部へ逆流することを防ぐことができます。

ピペッティングの原理と同様に、組織サンプルはニードルハブ内に保持されます。ディスロッジからニードルを抜き、吸引した内容物をガラススライド上に滴下して直接塗抹標本を作成します。スライド上に吸引物を1滴滴下したら、吸引物の性質に応じてさまざまな方法で展延させますが、通常はここで示す方法を用いて2枚のスライド間でサンプルを展延させます。

実際の検体において血液による希釈が見られる場合は、2枚目のスライドガラスを重ねる前に、スライドを傾けて余分な血液を排出してください。リンパ増殖性病変などの、微小断片を含まず主に懸濁液である吸引物の場合は、1枚のスライドの端を用いて別のスライド上にリブ状の塗抹を作成するリビング法（ribbing method）、または1枚のスライドを用いて2枚目のスライド上に薄層を作成する塗抹法（spreading method）で塗抹することが可能です。塗抹標本の作成後、さまざまな方法で処理および固定を行うことができます。

異なる染色法を用いる場合、最も適切な方法は、すべての塗抹標本を1〜2分以内に迅速に風乾させることです。厚みがある塗抹標本や水分が多い標本の乾燥を早めるには、スライドを空気中で横に動かすか、ヘアドライヤーまたは電池式の携帯扇風機を使用することが推奨されます。扇風機を使用する際は、特に感染が疑われる病変においてエアロゾルが発生しないよう注意してください。塗抹標本が乾燥した後は、実験目的に応じて適切に染色してください。

ここでは、Romanowski染色法の一つであるD quick stainを用いた、自然乾燥させた塗抹標本の染色の手順を実演します。メーカーの指示に従ってください。パパニコロウ染色された塗抹標本のこの例に示すように、自然乾燥させることで染色の鮮明度が大幅に向上することがわかっています。

これらの初回染色の分析により、選択的な細胞ブロック電子顕微鏡検査や微生物培養など、追加で実施すべき検査を決定します。擬似病変での習得に成功すれば、病変組織の適切な吸引が可能になります。本例では、バナナのペースト状の植物組織を使用します。この材料をガラススライド上に広げ、塗抹および染色の練習を行うことができます。

以上で、FNAB（細針吸引細胞診）の習熟トレーニングに用いるファントム病変の作製方法について説明しました。本実験を行う際は、コーキング剤が凝固するまでに時間を要するため、習熟度テストのセッションの少なくとも36時間前までにファントム病変を作製しておくことが重要です。また、FNAV（細針吸引）の手技を行う際に、最適な吸引物を採取するためには、適切な順序で真空状態を形成し、また解除することが重要なポイントとなります。

以上です。ご視聴ありがとうございました。練習に励んでください。ありがとうございました。