Name: アカゲザルの細胞性免疫応答のマルチカラーフローサイトメトリー解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-22T17:35:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: 学ぶアカゲザルのPBMCを用いたマルチカラーフローサイトメトリー解析法。CD4+およびCD8+T細胞サブセットの表現型と機能的特徴を詳細に解析し、HIV/AIDSワクチン研究に重要な免疫応答を明らかにします。

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マカク血とPBMCサンプルの博士PramodさんNehete夫妻バーティNehete、この作業は、部分的にNIHの助成金AI 46969からの資金によって支えられて、そしてすべての細胞培養培地は、中央メディア研究所で生産され、NIHの助成CAによって資金を供給され16672。

1）細胞調製と抗原刺激、2）表面マーカーの染色、3）細胞内サイトカイン染色、4）フローサイトメトリー：合計だけでなく、T細胞のメモリーのサブセットの詳細な表現型および機能解析のための手続は、4つの部分に分けることができます。分析。 1。細胞調製と抗原刺激<ol><li>両方たての分離だけでなく、凍結保存された末梢血単核細胞（PBMC）は、このプロトコルで使用されていました。 PBMCをFicoll -ハイパック（Histopaquen - 1077、Sigma - Aldrich社、セントルイス、MO）を用いて密度勾配沈降によるアカゲザルのヘパリンまたはクエン酸静脈血サンプルから単離された。 PBMCのアリコートを液体窒素で90％FCS、10％DMSO中で凍結保存した。 </li><li>低温保存されたPBMCを使用する場合は、冷凍PBMCのバイアルを液体窒素から取り出し、そして急速に穏やかに混合し、37℃の水浴中で解凍、凍結培地を除去するRPMI - 1640（HyClone研究所、ローガン、ユタ州）で洗浄し、完全なメディアに再懸[CM、10％を含むRPMI - 1640サプリメント熱不活化FCS（HyClone研究所）、2mMのL -グルタミン（Sigma - Aldrich社）、100U/mlペニシリン/ストレプトマイシン（Invitrogen社）、および6で培養 - ウェル組織培養プレート37℃で一晩加湿5％CO 2雰囲気でC。翌朝は、生存細胞数をトリパンブルーの色素排除法により決定し、CMに再懸濁した。 </li><li>細胞は、サイトカインの分析に続いて抗原特異的刺激に対する非特異的なために異なる方法で処理した：（a）ホルボール12 - ミリステート13 - アセテート（PMA）とイオノマイシン（I）（シグマ - アルドリッチ、セントルイスとの非特異的刺激に対してルイ、MO）、0.1ミリリットルの量で細胞のアリコート（1.0 × 10 6細胞/ウェル）を96ウェル組織培養プレート（BD Biosciences社、フランクリン湖、ニュージャージー州）の個々のウェルに播種した。 PMAとイオノマイシンは、それぞれ、50ng/mlおよび500ng/mlの最終濃度で使用されていました。 96ウェル組織培養プレートの最終的な総量は0.2ml/wellです：（b）の抗原特異的刺激の場合、容積1.0mlに1.0 × 10 6細胞を24ウェル組織培養プレート（BD Biosciences社の個々のウェルに播種した、井戸が以前に変更9で説明したように前処理したフランクリン湖、NJ）、。簡単に言えば、24ウェル組織培養プレートは4の50mmのTris溶液で2.5μg/ mlの/ウェルのヤギ抗マウスIgG（H + L）（キルケゴールとペリー研究所、ゲイサーズバーグ、MD）（PH 8.6）で被覆した° C一晩。プレートは滅菌PBSと共刺激抗体CD49dは、クローン9F10（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州）で2回洗浄した翌朝は、37℃で一時間インキュベートすることにより、10μg/ mlの時に追加/よく続いていた℃でインキュベーション後、プレートを室温で滅菌PBSで2回洗浄した。 six HIVエンベロープペプチド8のカクテルを含む、対象の抗原は、（各ペプチドの10μg/mlの最終濃度で添加した。単独でCMのセルを持つ追加の井戸をネガティブコントロールとして調製した。24各ウェルの最終的な合計容積ウェル組織培養プレートは1.0 mlであった。 </li><li>細胞は37℃、加湿5％CO 2雰囲気で、Cで6時間培養した。ブレフェルジンAは、（シグマアルドリッチ、セントルイス、MO）刺激の最終的な4.5時間のために10μg/mlで培地に添加した。その後、細胞を5 mlのポリプロピレンチューブに移し、冷たい（4℃）フローの洗浄緩衝液（ダルベッコPBS（DPBS、 カルシウム /マグネシウム2 -無料で洗浄し、2％熱不活性化と生活の技術を、ロックビル、MD）その後FCS）、および様々な蛍光標識抗体で染色するために処理。 </li></ol> 2。染色免疫蛍光表面マーカー<ol><li>刺激された細胞は、最初の4で1UL LIVE / DEAD修正可能なアクア蛍光反応性色素で染色した℃で30分間、暗所でC、コールドフローの洗浄緩衝液で1回洗浄。 </li><li>その後、次のように適切に滴定する蛍光標識モノクローナル抗体を細胞に添加した：抗CD3 PE - Cy7（SP34 - 2）、抗CD8 Alexa700（RPA - T8）、抗CD28 PerCP - cy5.5（L293） 、抗CD95 APC（DX2）と抗CD4パシフィックブルー（OKT4）、（サンディエゴ、カリフォルニア州）eBioscience社からCD4除くBD Biosciences社（フランクリン湖、NJ）からすべて、パシフィックブルー（OKT4）。細胞は暗所で4℃で30分間℃でインキュベートした。 </li><li>各実験のために報酬のコントロールと蛍光マイナス1（FMO）の両方は、10,11が利用されて制御します。補償のコントロールは、他の検出器に汚れ、個々の波及coeffecientsを決定するために利用された。補償制御の場合は、サルのいずれかから細胞懸濁液を含むチューブの完全なセットが個別に単一の色の染みのような蛍光コンジュゲート抗体で染色した。 FMOは、すべての試薬が関心のいずれかを含む多色染色の組み合わせであり、正の間の境界を決定するために使用されます自家蛍光レベルと完全に染色されたサンプル中に存在するデータを複製することで、ND負の人口。 </li><li>染色した細胞はその後、コールドフロー洗浄バッファーで洗浄し、固定/膜浸透溶液（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州）で修正された（この段階で細胞を4℃で一晩保存することができます° Cを暗所で）少なくとも10分間細胞内サイトカイン染色を行う前に。 </li></ol> 3。細胞内サイトカインの染色<ol><li>固定された細胞はフローの洗浄緩衝液で洗浄し、その後、紹介予定/（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州）洗浄バッファーを製造者の指示に従って追加されました。簡単に言えば、細胞は4℃で10分間1Xパーマ/ Wash Bufferを0.1ミリリットルでインキュベートした。·ダークのC。 </li><li>その後、細胞を4℃で60分間、適切に滴定し、FITC標識抗IFN -γ（B27）と抗IL - 2、PE標識（MQ1 - 17H12）とともにインキュベートした。·ダークのC。 </li><li>その後、細胞は細胞膜透過液でさらに2回洗浄し、 </li><li>最終洗浄後、細胞をDPBSで1％パラホルムアルデヒドで再懸濁し、24時間以内にフローサイトメトリー分析にかけた。 </li></ol> 4。フローサイトメトリー分析<ol><li>またはシアンADP（Dako社、カーピンテリア、カリフォルニア州）、染色した細胞はLSR IIフローサイトメーター（サンノゼ、カリフォルニア州BD Biosciences社）に買収された。 FACSデータがFlowJoソフトウェア（木スター、オレゴン州アッシュランド）を用いて分析した。 </li><li>図。 1は、代表的な動物とは異なるT細胞サブセットの解析に利用さゲーティングスキームを示しています。リンパ球は前方散乱光（FSC）対側方散乱（SSC）を介して第ゲートであり、その後のライブリンパ球は、SSCとアクア陰性人口に基づいて同定された。 T細胞はCD3 CD4の検出+ CD8 -（CD4 + T細胞）に続く発現とCD4 - CD8 +（CD8 + T細胞）によってその後CD3 + T細胞集団内の個体積極的に同定された。 CD4 +およびCD8 + T細胞は、さらにナイーブ（Tnは、CD28 + CD95 -）、中央のメモリ（TCM、CD28 + CD95 +）とエフェクターメモリー（TEM、CD28 - CD95 +）細胞と同様にCD28とCD95の発現に基づいて異なるサブセットに区別された文献5、10で説明しています。 </li><li>図。 CD4 +およびCD8 + T細胞の異なるサブセットがPMAとイオノマイシン（PMA + I）による刺激に応答サイトカイン産生の点で機能的能力（INF -γおよび/またはIL - 2）について評価されたかを図2に示す。 </li></ol> 5。代表的なFACSデータアカゲザルのPBMC組成物は、FACS分析を用いて決定した。図1は、代表的な動物とは異なるT細胞サブセットの解析に利用さゲーティングスキームを示しています。リンパ球は前方散乱光（FSC）対側方散乱（SSC）を介して第ゲートであり、その後のライブリンパ球は、SSCとアクア陰性人口に基づいて同定された。 T細胞は、その後、CD3の発現により同定した。 CD4 + CD8 -（CD4 + T細胞）とCD4 - CD8 +（CD8 + T細胞）はCD3 + T細胞集団内の個体数も測定した。図2に示すように、CD4 +およびCD8 + T細胞は、さらにナイーブ（Tnは、CD28 + CD95 -）、中央のメモリ（TCM、CD28 + CD95 +）とエフェクターメモリー（TEM、などのCD28とCD95の発現に基づいて異なるサブセットに区別されたCD28 - CD95 +）細胞。図2Aは、INF -γを示し、非刺激およびPMA /イオノマイシン刺激CD4 + T細胞、およびサブセット、および図2Bにおいて、IL - 2産生は、INF -γおよび非刺激およびPMA /イオノマイシンはCD8を刺激+ T細胞におけるIL - 2産生を示し、およびサブセット異なるサイトカインプロファイルは、各サブセットの刺激によって誘発さに注意してください。 <img src="/files/ftp_upload/1743/1743fig1tmb.jpg" alt="図1" border="0"> アカゲザルmacqauesのPBMC成分のフローサイトメトリー解析に使用する図1。ゲーティング戦略。してください<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1743/1743fig1.jpg">ここをクリックして</a>図1の拡大バージョンを参照すること。 <img src="/files/ftp_upload/1743/1743fig2atmb.jpg" alt="図2a" border="0"> <img src="/files/ftp_upload/1743/1743fig2btmb.jpg" alt="図2b" border="0"> 図2。 （A）総CD4 + T細胞とサブセット。のサイトカイン産生プロファイル合計CD8 + T細胞とサブセットの（B）サイトカイン産生プロファイル。してください<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1743/1743fig2a.jpg">ここをクリックして</a>大きな2aのバージョン、見て<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1743/1743fig2b.jpg">ここにまたはを</a>図2bの大きいバージョンのために。

<ol><li>Ogg, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitation+of+HIV-1-specific+cytotoxic+T+lymphocytes+and+plasma+load+of+viral+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Quantitation of HIV-1-specific cytotoxic T lymphocytes and plasma load of viral RNA.</a> Science. 279, 2103-2106 (1998).</li>
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</ol>

ソリューションおよびバッファ<ul><li>フィコール - ハイパック（Histopaquen - 1077、Sigma - Aldrich社、セントルイス、MO） </li><li> RPMI - 1640培地（HyClone研究所、ローガン、ユタ州） </li><li>ウシ胎児血清（FBS）、（HyClone研究所、ローガン、ユタ州） </li><li> L -グルタミン（Sigma - Aldrich社、セントルイス、MO） </li><li>ペニシリン/ストレプトマイシン（Invitrogen社、カールスバッド、カリフォルニア州） </li><li>トリパンブルー試薬（シグマアルドリッチ、セントルイス、MO） </li><li> 50mMのトリス、pH 8.6、4でフィルタリングし、店舗° C </li><li>ダルベッコPBS（DPBS、Ca2/Mg2-free、生活技術、ロックビル、MD） </li><li>フローの洗浄緩衝液：2％FBSとDPBSサプリメント、4℃で保存</li><li> BD Cytofix / Cytoperm固定/透過処理ソリューションキット（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li></ul>活性化剤<ul><li>ホルボール12 - ミリステート13 - アセテート（PMA）（Sigma - Aldrich社、セントルイス、MO） </li><li>イオノマイシン（シグマアルドリッチ、セントルイス、MO） </li><li>共刺激抗体CD49dは、クローン9F10（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li><li>アフィニティー精製抗体のF（ab）ヤギ抗 - マウスIgG（H + L）の2フラグメント（キルケゴールとペリー研究所、ゲイサーズバーグ、MD） </li><li>特異的活性化剤は、ペプチドのプール、単一のペプチド、または蛋白質全体を含めることができます</li></ul>サイトカイン分泌の阻害<ul><li> Brefedin A（BFA、シグマアルドリッチ、セントルイス、MO） </li><li>ゴルジプラグは（;サンノゼ、カリフォルニア州BD Biosciences社）代わりに使用することができます。 </li></ul>抗体<ul><li> LIVE / DEAD修正可能なアクア蛍光染色キット（Invitrogen社、カールスバッド、カリフォルニア州） </li><li> CD3 PE - Cy7（SP34 - 2）、（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li><li> CD4パシフィックブルー（OKT4）、（eBiosciences（サンディエゴ、カリフォルニア州） </li><li> CD8 Alexa700（RPA - T8）、（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li><li> CD28 PerCP - cy5.5（L293）、（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li><li> CD95 APC（DX2）、（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li><li> IFN - FITC（B27）、（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li><li> IL - 2のPE（MQ1 - 17H12）、（BD Biosciences社、サンノゼ、カリフォルニア州） </li></ul>

アカゲザルの細胞性免疫応答のマルチカラーフローサイトメトリー解析

Multicolor Flow Cytometry Analyses of Cellular Immune Response in Rhesus Macaques

アカゲザルのモデルは、ワクチンや治療薬の開発のためだけでなく、病態の理解に関して、現在HIV - AIDSのための最善の利用可能なモデルです<sup&gt; 1,2,3</sup&gt;。ここで、我々は、細胞性免疫応答の詳細な表現型および機能解析、CD4で特に細胞内サイトカイン産生+およびCD8 + T細胞だけでなく、個々のメモリのサブセットのための方法を説明します。我々は、インターフェロンγ（INF -）とインターロイキン（IL）CD4 +とCD8の両方で-2 PMAプラスイオノマイシン（PMA + I）で刺激したアカゲザルPBMCから+ T細胞の生産のための正確な定量的および定性的な措置を得た。サイトカインプロファイルは、メモリセルの異なるサブセットに異なっていた。さらに、このプロトコルは、我々の研究室で開発されたHIVエンベロープペプチドのカクテルのワクチンで免疫したアカゲザルからPBMCサンプル中に抗原特異的CD4 +およびCD8 + T細胞サブセットの些細な分画を示すために感度を提供する。多色フローサイトメトリー法は、T細胞の異なる集団を正確に識別するための強力なツールです。<sup&gt; 4,5</sup&gt;サイトカイン産生能力を持つ<sup&gt; 6</sup&gt;非特異的または抗原特異的刺激後<sup&gt; 5,7</sup&gt;。

我々は、合計だけでなく、アカゲザルのCD4 +とCD8 + T細胞、HIV /エイズワクチン研究のための理想的なモデルのメモリのサブセットの詳細な表現型と機能解析のための多色フローサイトメトリーの有用性を実証する。

アカゲザルモデルは、病原性の解明および開発に関して、現在利用可能なHIV-AIDSの最良のモデルである。

このビデオでは、末梢血単核細胞（PBMC）の刺激および染色の手順について解説します。多色フローサイトメトリー解析のため、全血から分離したPBMCを組織培養プレートに播種します。その後、細胞に化学的または生物学的な刺激を与え、免疫応答を誘導します。刺激後、発現している表面マーカーに基づいた細胞型の特定を行うため、抗体カクテルを添加します。次に、細胞を透過処理し、別の抗体カクテルを添加して細胞内サイトカインの発現を検出します。その後、フローサイトメトリーにより解析を行い、PBMCの特定のサブセットにおけるサイトカインプロファイルを決定します。こんにちは、テキサス大学MDアンダーソンがんセンター免疫学部のDr. Jagan SAS研究室のAmy Courtneyです。こんにちは。研究室のHongです。本日は、T細胞応答のマルチサイトメトリー分析についてご紹介します。私たちの研究室では、アカゲザルにおける細胞性免疫応答を研究するためにこの手順を用いています。それでは、開始しましょう。まず、トリパンブルー染色除外法を用いて、Reuss Maca由来のpbmcの生存細胞数をヘモサイトメーターで測定します。作業はラミナーフローフード内で行ってください。非特異的刺激のため、細胞を完全培地を用いて1 mLあたり1,000万細胞の濃度で懸濁し、96ウェル組織培養プレートの各ウェルに細胞懸濁液を100 µLずつ分注する。次に、PMAおよびCINを含む培地を100 µL加え、全量を0.2 mLとする。このとき、最終濃度はPMA 50 ng/mL、CIN 500 ng/mLとする。陰性対照ウェルには、完全培地のみを100 µLずつ加える。その後、細胞を37 °C、5% CO2の加湿雰囲気下で1.5時間インキュベートする。felden Aを最終濃度10 micrograms per milliliterになるように培養液に添加し、さらに4.5時間インキュベートします。felden Aは、刺激後の遠心分離で培地を除去し、200 microlitersの冷 flow wash bufferを加えて洗浄し、低速で遠心分離した後に、免疫染色による視認性を高めるためにgold G装置内でtrapp cytokinesに添加します。この洗浄操作を繰り返し、その後50 microlitersのflow wash bufferで再懸濁します。再懸濁した細胞が入った各ウェルにおいて、表面マーカーの発現を染色する準備が整いました。製造元の指示に従って調製したLive Dead Fixable Aqua蛍光反応性染料を1 µL添加します。細胞をインキュベートしている間、4 °Cの暗所で30分間静置します。マイクロチューブを用いて、染色に使用する染色溶液を調製します。まず、以下の成分を含む染色カクテルを適切に調製してください。力価調整済みの蛍光標識モノクローナル抗体（anti-CD3 PE SCI 7、anti-CD8 Alexa 700、anti-CD28 PerCP SCI 5.5、anti-CD95 APC、anti-CD4 Pacific Blue）およびInflow Wash Buffer。次に、補正コントロールを準備します。これは、各蛍光標識抗体を単色染色として個別にチューブに調製し、各染色剤から他の検出器へのスピルオーバー係数を決定するために使用します。最後に、目的の試薬以外のすべての試薬を組み合わせて、蛍光マイナスワン（FMO）染色を準備します。これは、完全染色サンプルにおける自家蛍光レベルとデータの重複を確認することで、陽性集団と陰性集団の境界を決定するために使用します。生死染色液で細胞をインキュベートした後、冷系のフロー洗浄バッファーで1回洗浄して過剰な染料を除去し、洗浄バッファーを吸引します。次に、調製した染色溶液を加えます。細胞を4°Cの暗所で30分間インキュベートします。過剰な抗体を除去するため、染色した細胞を冷たいフロー洗浄バッファーで洗浄します。次に、100 µLのBD固定透過液を加え、10分以上放置します。細胞は4 °Cの暗所で最大24時間まで保存可能であり、その後、細胞内サイトカインの標識に進みます。まず、100 µLの1X Perm Wash bufferで細胞を透過処理し、4 °Cの暗所で10分間インキュベートします。細胞のインキュベーション中に、以前と同様に1X Perm Wash bufferを用いて、染色用抗体、コンペンセーションコントロール、およびFMOコントロールを調製します。細胞を10分間インキュベートした後、遠心分離して1x Perm Wash Bufferを除去します。適切な染色抗体を添加してください。その後、細胞と抗体を4°Cの暗所で60分間インキュベートします。透過溶液で細胞を2回洗浄します。最後の洗浄後、細胞をDPBSで調製した1% Paraform aldehydeに再懸濁し、細胞を固定します。細胞は4 °Cの暗所で、使用まで最大24時間保存してください。細胞を染色した後、LSR II フローサイトメーターまたはCyan DP フローサイトメーターを用いて FACS を行います。その後、FlowJo または同様のソフトウェアを使用してデータを解析します。rhesus macaque における PBMC 組成は、FACS 解析を用いて決定されました。この図は、代表的な個体における異なるT細胞サブセットの解析に用いたゲーティングスキームを示しています。まず、前方散乱光（FSC）対側方散乱光（SSC）を用いてリンパ球をゲーティングし、次にSSCおよびAQUA陰性集団に基づいて生存リンパ球を特定しました。続いて、CD3発現によりT細胞を特定し、CD3陽性T細胞集団内において、CD4陽性・CD8陰性およびCD4陰性・CD8陽性の集団を決定しました。CD4陽性およびCD8陽性T細胞を、CD28およびCD95の発現に基づき、ナイーブT細胞、セントラルメモリーT細胞、およびエフェクターメモリーT細胞の異なるサブセットにさらに分画しました。この図は、非刺激およびpma・CIN刺激したCD4陽性T細胞およびそのサブセットにおける、インターフェロンγおよびIL-2の産生を示しています。刺激によって誘発されるサイトカインプロファイルが、各サブセットで異なることに注目してください。ここでは、PBMCのマルチカラーフローサイトメトリー解析の実行方法を解説します。この手順を行う際は、単色補正コントロールと蛍光マイナスワン（FMO）コントロールの両方を設定することが重要です。フローサイトメトリーデータの適切な解析には、これら両方のコントロールが必要です。補正コントロールの選択に関する詳細については、書面によるプロトコルをご参照ください。また、蛍光標識抗体を使用する際は、光曝露から保護するためにサンプルを遮光することが重要である点にご留意ください。以上となります。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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96 遺伝子の発現を量的に方法論が説明し、単一セルがex vivo、差動の同定を可能にする 18 の表面タンパク質は感染していない細胞を基準にしてウイルスに感染した細胞の遺伝子そして蛋白質を表明しました。+ T 研究 SIV 感染 CD4...

MRNA およびサル免疫不全ウイルス感染 cd4 表面タンパク質発現の単一細胞定量+ T 細胞孤立したアカゲザルから

ここでは、分離と CD4 のキャラクタリゼーションのためのプロトコル+ T 細胞サブセットひと末梢血からの説明。CD4 精製+ T 細胞は濾胞 T...

CD4 の分離+ T 細胞および循環の解析 T 濾胞ヘルパー (cTfh) 末梢血を使用して 6 色フローサイトメトリーから細胞のサブセット

ここでは、CD4 を識別するためにフロー フローサイトメトリーによるプロトコルを提案+および CD8+ T 細胞、γδ T 細胞、B 細胞、NK 細胞、7 つではなく 2 つだけ螢を用いたひと末梢血単球。このアプローチでは、5 つの追加のマーカーはほとんど流れの cytometers...

7 免疫細胞サブセット 2 螢光色素の差別フローサイトメトリー

本研究は、フローサイトメトリー、FcγR の活性化から生じる活性酸素種 (ROS) 生産を検出するための使用方法を示します。このメソッドは、抗菌および酸化還元シグナル免疫複合体、微生物のオプソニン、または直接 FcγR...

FcγR 架橋への応答におけるマクロファージの活性酸素産生の流れフローサイト メーターによる測定

ここでは、マウス変形性関節症の確立された外科モデルを利用して、マウス脾臓、骨髄、リンパ節および滑膜組織内の細胞外染色アッセイと細胞内染色アッセイの両方を使用して、単球/マクロファージおよびT細胞サブセットを同定するための詳細で再現可能なフローサイトメトリープロトコルについて述べた。...

変形性関節症モデルにおけるマウス脾臓、骨髄、リンパ節および滑膜組織における免疫細胞サブセットのフローサイトメトリー解析

解剖されたインプラントからの細胞の単離とフローサイトメトリーによる特性評価は、インプラントに対する免疫応答のパターンの理解に大きく貢献します。この論文では、解剖したインプラントから細胞を単離し、フローサイトメトリー解析のために染色するための正確な方法について説明します。...

解剖されたインプラント組織の免疫機能解析のための高次元フローサイトメトリー

T細胞シグナル伝達の尺度であるカルシウム流入は、T細胞受容体刺激に対する応答を分析するための効果的な方法です。Indo-1を細胞表面分子に向けられた抗体のパネルでマルチプレックス化するためのこのプロトコルは、フルスペクトルフローサイトメトリーの非常に柔軟な機能を利用しています。...

フルスペクトルフローサイトメトリーによる初代マウスT細胞におけるT細胞受容体誘導性カルシウム流入の解析

学ぶアカゲザルのPBMCを用いたマルチカラーフローサイトメトリー解析法。CD4+およびCD8+T細胞サブセットの表現型と機能的特徴を詳細に解析し、HIV/AIDSワクチン研究に重要な免疫応答を明らかにします。

アカゲザルの細胞性免疫応答のマルチカラーフローサイトメトリー解析

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