Name: 収穫精子とマウスの人工授精 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: 学ぶマウスの人工授精法。雄から精子を採取し、発情期の雌に注入する技術を解説。凍結精子の利用や正確な交配タイミングの確保に有用で、発生生物学やトランスジェニック研究に応用できます。

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私はげっ歯類の生殖に関するPeromyscus遺伝株式の彼の貴重な洞察のためのセンター、忍耐、そして知識からマイクデューイに感謝いたします。

人工授精人工授精は、すべての女性が妊娠しますしていること可能性を高めるために、自然交配の代わりに使用されます。 2オス1個ごとに過排卵女性や発情期にあることが分かっている女性のために使用されていました。成熟した雄マウスからcaudaの複数形精巣上体は、9％のミルクの懸濁液中に配置され、18ゲージの針を使って開いてスライスしていた。精子は、数分間自由に泳ぐことを許可されており、その後上体が混合物から採取した。懸濁液を合流し、運動性の精子用顕微鏡を用いて評価した。鈍22ゲージ1 ½インチ長い針は、精子を管理するために使用された。 120 °の曲げ3 / 4 番目の針ダウン方法について置かれた。 0.05mls注射 - 針は曲げと0.025に膣にまで挿入した。アシスタントが適切な位置に女性を保持するために使用されている場合は、麻酔剤の使用は不要です。 準備<ol><li>女性6 4人の男性を使用してください</li><li>ビバリウムで男性を安楽死させる</li><li>粉ミルクから9％の牛乳の約5 mlを調製</li><li>小さなシャーレに1.5mlを入れ</li><li> epididymusと輸精管を切り取る</li><li> 9％の牛乳の1.5ミリリットルに入れ</li><li> 2つの18ゲージの針を使用して、そして針と長いカッティングモーションを使用して、精子を放出するepididymusと輸精管を切り開く</li><li>組織の上に左を取り出し、顕微鏡で精子をチェック</li></ol>注射<ol><li> 120 °の角度で鈍針を使用してください</li><li>手でマウスをホールドし、混合物を注入する。一人が保持していると注射が嫌いなら、二人は、使用することができます。これはプロシージャに影響を与える可能性があるか知っている人でとしてない麻酔は、使用すべきではありません。 </li><li>雌あたりの精子/ミルクミックスの0.05ミリリットルを使用して</li></ol>受信者の女性<ol><li>受信者の女性の膣スミアを実行してください（この時点で受信者の女性は、発情前期/発情期になるはず） </li><li> 5日目で発情期に達していない女性は、おそらく使用してはいけません</li></ol>

<table><tbody><tr><td>シャーレ</td><td>器具</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-30</td><td></td></tr><tr><td>18 G 針</td><td>器具</td><td>BD Biosciences</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>粉乳</td><td>試薬</td><td>メーカー不問</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL シリンジ</td><td>器具</td><td>National Scientific Company</td><td>S7510-1</td><td></td></tr><tr><td>ピンセット</td><td>器具</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>はさみ</td><td>器具</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s リン酸緩衝生理食塩水</td><td>試薬</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>22 G 鈍端針</td><td>器具</td><td>Give to me</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

収穫精子とマウスの人工授精

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

属のPeromyscus（鹿のマウス）のげっ歯類では最も普及しているネイティブの北米の哺乳動物です。 Peromyscus種は毒性学、疫学、生態学、行動、および遺伝学的研究を含む研究の幅広い分野で使用されています。ここで彼らは、人工授精のデモンストレーションのための有用なモデルを提供しています。 ここに表示されるものと同様の方法では、以前にいくつかの鹿のマウスの研究で用いられてきた、まだ詳細なプロトコルが公開されていない。ここでは、人工授精の基本的な方法を示しています。このメソッドは、精巣上体および精管から精子を分離し、齧歯類から精巣を抽出伴います。今ミルクの混合物で成熟した精子は、、排卵の時に女性の生殖器に配置されます。受精は胚発生のタイミングを0日としてカウントされます。胚は、所望の時間の時点で取得して操作することができます。 人工授精は、正確な胚のタイミングを得るために重要なまたは困難なげっ歯類の用途に使用できます。このテクニックはすぐに交尾および/または交配が評価しにくい場合があります種または菌株（最もPeromyscusを含む）に不可欠です。さらに、人工授精は、発達の進行および/またはトランスジェニック作業のマッピングのいずれかで胚発生の正確なタイミングを提供します。受精が保証されているので、動物の減少数は、使用することができます。このメソッドは、Peromyscusシステムを促進するために不可欠であったが、うまくいけば同様に他の人の利益になる。

このプロトコルは、男性の精巣から精子を抽出し、雌マウスをinseminatingための方法を示しています。正確な時間が発生試験と同様にトランスジェニック作業に必要な場合にこの手順が便利です。

Peromyscus属（シカマウス）のげっ歯類は、北米に自生する哺乳類の中で最も一般的である。Peromyscus種は、幅広い研究において利用されており...

カリフォルニア大学アーバイン校のPaul Verana博士の研究室に所属しているAmanda Dliです。本日は、人工授精の手順について実演します。この手順では、オスから精子を採取し、その精子を排卵期のメスに注入します。この方法を用いる理由は、オスとメスが希望するタイミングで交配しなかったり、あるいは全く交配しなかったりする場合があるためです。また、非常に重要なマウス系統である場合は、凍結精子を用いてこの手法を行うことも可能です。多くのマニュアルや論文ではマウスの適切な取り扱い手順が示されていないため、この手順を実際に実演で確認することは非常に重要です。雌マウスには麻酔を使用せず、1人で保定および注射を行うことができます。これにより、雌マウスへの損傷を完全に避け、受精にとって最適な条件を確保することができます。使用する解剖器具は、鋭いピンセット2セットと鋭い鋏1本です。これらを用いて、精巣および脂肪組織の全域から最適な部位を分離します。その後、鉗子を使用して副精巣を分離します。精子を雌に輸送するためには、9%ミルクを使用します。これは、地元の食料品店で購入した粉ミルクで作った1つのXPBSで構成されています。これを小さなシャーレに単離して配置し、精子が局所的な領域に留まるようにします。18ゲージの針を使用して副精巣を切開し、精子がシャーレ内の9%ミルク溶液中に泳ぎ出せるようにします。精子が9%乳溶液中に存在することが確認され、共流性が得られたら、鈍端の22ゲージ針を用い、120度の角度で吸引します。これを1mLシリンジに取り付け、0.025mLを雌のピーナッツマウス、またはげっ歯類のPolyusに注入します。Para cusは実際には北米で最も豊富に存在する在来哺乳類であり、Polyusは米国のフロリダ南東部地域に生息しています。ご覧のように、目の方は mus musculus よりも少し大きくなっています。加えて、被毛の色がより淡いのが特徴です。これにより、フロリダ地方に見られる砂丘に紛れやすくなっています。これから、このマウスの精巣領域全体を単離します。この個体は1歳ですが、飼育下では4歳まで繁殖することが知られています。また、飼育下での寿命は実際には不明であり、最長で7年まで生存した例があるためです。まず最初に行うのは、このオスの下半身を70% ethanolで浸すことです。これにより、毛が妨げになるのを防ぎます。ご覧の通り、ここにある膨らみが精巣です。皮膚の外層を切開し、内壁に小さな切開を入れてから、大きな水平方向の切開を加えます。実際には、脂肪層が非常に大きく視認しやすいため、この時点で精巣を単純に押し出す方が簡単です。精巣を取り出した後、2箇所の切開を行います。1つは脂肪層を分離するためにその上部で行い、もう1つは精巣を反対側の壁に接続している副

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Research

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Biology

生物学

ここでは、マウス精子の凍結保存のための新開発のI•クライオキットを示しています。凍結融解精子を持つ二細胞期胚の開発は、このキットの使用で5マウス系統で一貫して改善された。...

I ·クライオキットを使用してマウスの精子の凍結保存と回復

マウス卵母細胞のマイクロインジェクションは、古典的なトランスジェネシス（ すなわち、トランスジーンのランダム組込み）およびCRISPR媒介遺伝子ターゲティングの両方に一般的に使用される。このプロトコールは、マイクロインジェクションの最新動向をレビューし、特に品質管理とジェノタイピング戦略を重視しています。...

卵母細胞のマイクロインジェクションによる遺伝子改変マウスの作製

精液液状精液のゲルから解放される精子に必要です。この研究は、女性の生殖器官の後膣から精液を収集し、精液液状化時間を測定するための手順を提供します。...

ポスト交配精液女性の生殖器官とマウスの精液の液状化測定からのコレクション

ここでは、受精卵母細胞の囲卵腔のレンチウイルスベクターの単純な注射によって transgene の統合および創設者トランスジェニック マウスに高効率の生産を促進するためにプロトコルを提案する.

レンチ ウイルス媒介トランスジェニック マウスの生産: シンプルで高効率な創設者の直接の研究法

ここでは、1細胞胚の凍結保存のための改変方法と、遺伝子組換えマウスの効率的な生成のための凍結解凍胚とエレクトロポレーションの使用を組み合わせたプロトコルを提示する。...

遺伝子組み換えマウスの高効率生産のための凍結解凍胚の使用

子宮内膜症の多くのげっ歯類モデルは、技術的な複雑さ、再現性、および/または免疫不全動物または特別なレポーターマウスの必要性によって制限されています。我々は、独立して検証可能な客観的なスコアリングシステムを有し、卵巣切り出しまたは生存手術の要件を持たない任意の実験マウスを使用して、病変誘導の簡略化されたシステムを提示する。...

自然サイクリングマウスを用いた子宮内膜症のシンジニアスマウスモデル

接合子のCRISPRエレクトロポレーションによるマウスの効率的なゲノム編集

提示された子宮頸部操作方法は、精管切除された雄と雌を繁殖させる必要なしに、マウスにおいて偽妊娠を誘発することができる。偽妊娠の誘導は、非外科的胚移植および非外科的人工授精の成功に必要であり、どちらも提示されている。...

非外科的胚移植または人工授精の前に精管切除された雄を必要とせずに雌マウスに偽妊娠を誘導する

ここでは、マウスにラウンド精子細胞注入法(ROSI)を行う方法を紹介します。これは、臨床応用が期待され、胚発生のメカニズムを調べるための有用性を持つ技術です。...

マウスラウンド精子細胞注射

ここでは、ICSIに起因する可能性のあるグルコース代謝の加齢に伴う変化を観察できるように、細胞質内精子注入(ICSI)-胚移植(ET)マウスを確立するためのプロトコルを提示します。...

細胞質内精子注入後のマウス仔の血糖値のモニタリング

学ぶマウスの人工授精法。雄から精子を採取し、発情期の雌に注入する技術を解説。凍結精子の利用や正確な交配タイミングの確保に有用で、発生生物学やトランスジェニック研究に応用できます。

収穫精子とマウスの人工授精

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