Name: ショウジョウバエにおけるテングザル拡張レスポンス（PER）アッセイ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 28 min 40 s
Description: 学ぶショウジョウバエのテングザル拡張レスポンス（PER）アッセイによる昆虫の味覚行動解析法。餌やり条件の最適化と正負の対照実験を用いて、信頼性の高い神経行動データを収集できます。

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我々は、ビデオプレゼンテーションのカメラの男としてのためにポールグレアムに感謝。

飢餓<ol><li>最初に、ハエを餓死。 </li><li>空の瓶に水を浸した金ワイプの小片を置く。 </li><li>転送20から30も葉が空のバイアルに飛ぶ。 </li><li>紙が湿っていることを確認するためには12 -24時間を確認してください。 </li><li> 36〜72時間のフライを飢えさせる。 </li></ol>フライを修正<ol><li>アスピレーターで飛ぶものを取る。 </li><li>開口部に200μlの黄色い先端を置きます。同時に反転させてその上に吹き、あなたは黄色の先端にフライを絞ることができます。 </li><li>ゆっくりとそれが移動することはできませんポイントにフライを押し上げるために、いくつかの空気を適用します。 </li><li>カミソリを使用することにより、バックフライを吸うと先端を切断し、フライアイで約マークを付ける。 </li><li>優しく位置に戻ってフライを吹くが、ちょうど最後の最後に到達する前に、吻が置かれる予定の位置で切断傾斜を作る。この斜めカットすることなく行うことができますが、それは間違いなく、次のプロセスが容易になる。 </li></ol>ショ糖の芯を準備<ol><li>スレッドにキムワイプの6 mm幅のストリップ®紙をひねって、円錐状の形の芯（&lt;1 cm）の小片に引き離す。 </li><li>これらの小さな芯が接触してショ糖溶液または水に浸漬し、口吻に発表されました。 </li></ol>コントロールと実験動物を準備する<ol><li>どんな味物質をテストする前に、その場に4％ショ糖溶液を与える。これは、ポジティブコントロールとして機能します。応答しなかったどんなフライを捨てる。 </li><li>次に、その場でテストのdH 2 0。ネガティブコントロールとしてこの行為。それが応答しなかった場合にその場を捨てる。 </li><li>お味物質をテストした後にこれらのコントロールをテストします。 </li></ol>

<ol><li>Dethier, V. G. The Hungry Fly. , Harvard University Press. Cambridge. (1976).</li>
</ol>

本発表では、我々は、テングザル拡張応答アッセイのためのすべてのステップを経てきた。方法は非常に簡単に聞こえますが、他の多くの行動アッセイのように、多くの小さなものは、作業からアッセイを防ぐことができます。私達は細心の注意を必要とする多くのそのような手順を経ています。ここで、私は最も重要な要因のいくつかを再度強調。 その一つの要因は、芯の形状です。私は非常に良い例のいくつかを示しているが、もちろん、現実にはすべてが非常に良いと非常に悪いとの間の連続スペクトルとなる。初めに、あなたは非常に良い側に近いものを使用している可能性がありますが、日ごと、標準では、あまりいい範囲に少しずつシフトして開始する可能性があります。 &quot;良い​​&quot;という程度の人間の知覚は非常に簡単に無意識のうちにシフトすることができます。これを防ぐ一つの方法は、あなたが実験に使用した芯の写真を撮る、と側ですべての画像を並べて比較することです。または、少なくとも、非常にうまく芯の一つ写真を撮る、とPERSをテストする前に、しばらくそれを見詰める。 もう一つ重要なことは接触の影響レベルです。目標はできるだけ穏やかに接するようになるので、これは対処する方が簡単です。あなたがす...

<table><tbody><tr><td>HDR-HC1</td><td>カメラ</td><td>Sony Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SMZ800</td><td>顕微鏡</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P-IBSS</td><td>カメラアダプター</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x DC10LN</td><td>カメラアダプター</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>257010</td><td>カメラアダプター</td><td>Optem, Qioptiq Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TREKKER Mk2</td><td>三脚</td><td>BENBO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gorillapod SLR</td><td>三脚</td><td>Joby</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMac G5</td><td>コンピューター</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Power Mac G5</td><td>コンピューター</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>iMovie</td><td>ソフトウェア</td><td>Apple</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MPEG Streamclip</td><td>ソフトウェア</td><td>SQUARED 5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ショウジョウバエにおけるテングザル拡張レスポンス（per）アッセイ

Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila

テングザルの拡張レスポンスは（PER）ハエだけでなくミツバチで使用されている味の行動アッセイである。 ハエの口（唇弁）の表面に、味覚の神経細胞を収容する感覚器と呼ばれる毛のような構造があります。魅力的な物質が唇弁に接触するときに、ハエは材料を消費するため、その口吻を拡張します。テングザル拡張レスポンス（PER）アッセイは、この味の動作の応答を測定し、そしてそれは、単一のハエの食べ物の好みについて学ぶために有用な方法である。このようなショ糖、ブドウ糖、果糖など、様々な糖、、のソリューションは、フライに非常に魅力的です。甘い溶液中で混合したときに嫌悪物質の影響もPERの低下としてテストすることができます。 基本的な手順の単純さにもかかわらず、働くことを防ぐことができる多くのものがあります。注意を必要とする要因の一つは、ハエの応答可能状態です。適切な応答状態にフライをもたらすために必要な飢餓の時間は36〜72時間から大幅に異なります。私たちは、ハエの状態を評価する一連のコントロールを確立し、これは非応答またはハイパー応答個々の動物からスクリーニングすることができます。もう一つの重要な要因は、影響のレベルと言葉で記述することは困難であると唇弁に接触の位置、です。このビデオプレゼンテーションでは、この方法の再現性を増加させる他のいくつかの改良と、これらすべてを一緒に示しています。

テングザルの拡張レスポンスやPERはハエだけでなくミツバチで使用されている味の行動アッセイである。口吻が魅力的な物質と接触するときに、ハエは物質を消費するため、その口吻を拡張します。様々な糖のソリューションは、その場に非常に魅力的です。

ショウジョウバエにおけるテングザル拡張レスポンス（PER）アッセイ

吻伸展反応（PER）は、ショウジョウバエやミツバチなどの昆虫で用いられてきた味覚行動アッセイである。
ハエの口器の表面には...

こんにちは。このプレゼンテーションでは、ショウジョウバエにおける口吻伸展反応アッセイの方法について解説します。口吻伸展反応（Proboscis Extension Response: PER）は、ハチだけでなくハエでも用いられている味覚行動アッセイです。ハエの口吻が誘引物質に接触すると、ハエはその物質を摂取するために口吻を伸展させます。スクロース、グルコース、フルクトースなどのさまざまな糖の溶液は、ショウジョウバエにとって非常に魅力的です。PR（確率的反応）は、脚への接触によっても観察されますが、本プレゼンテーションでは口吻の接触に焦点を当てたいと思います。したがって、PRアッセイの最初のステップは、ショウジョウバエを飢餓状態にすることです。飢餓条件の最適化は、本アッセイにおいて最も重要な要因の一つです。ここで重要となる点は主に2つあります。一つは飢餓時間であり、もう一つは飢餓前のハエの体サイズです。そして、これら2つの間には正の相関があると考えられます。ハエが大きく太っている場合は、より長く飢餓状態にする必要があります。なお、体の大きさは、ハエの餌の栄養状態とバイアル内のハエの密度に依存します。それでは、適切な例をお見せしましょう。このバイアルを見ると、ショウジョウバエが過密状態ではないことがわかります。バイアル内には、およそ100から150匹のPPEがいる状態です。ハエがここから羽化した後、さらに3〜5日間新鮮な餌の中で保持し、その後、紙片を入れた空のバイアルに移します。この紙片は常に湿った状態に保ち、飢餓時間は24〜96時間まで変動させることができます。飢餓時間についての詳細は、後ほど説明します。PERのためにハエを固定する方法を説明します。まず、ハエ1匹とaspi aspiratorを用意します。次に、開口部に200 µLのイエローチップを装着します。次に、同時にひっくり返しながら、そこに空気を吹き込みます。ハエを黄色いチップの先端まで押し上げ、さらに軽く空気を送り込んで、ハエが動かなくなる位置まで固定します。カミソリを使用して、ハエの目のあたりに印を付けます。その後、ハエを吸い戻し、チップの先端を切断します。最後に、再び優しく空気を吹き込み、ハエを元の位置に戻します。ただし、最後の方に到達する直前で、probosが配置される位置にSLカットを入れます。SLカットなしでも可能ですが、あらかじめ入れておいた方が後の工程が確実に簡単になります。次に、ハエの下にある黄色いチップの先端を切り取り、底を粘土で埋めて直立させて固定します。先端にさらに粘土を加えることで、最終調整を行うことができます。重要な点は、フライを強く押しすぎないようにすることです。ここに集中して、もう少しだけ上に押し込んでみます。したがって、ショウジョウバエの頭部がその少し上に位置すること

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生物学

同定されたニューロンと摂食行動からカルシウム信号の同時記録キイロショウジョウバエ</em

キイロショウジョウバエでは、世紀の1以上にわたり、多くの重要な生物学的過程の分子および細胞基盤を理解するために使用されている遺伝的に行動的に扱いやすいモデル系である。...

アッセイのメソッドショウジョウバエ行動

このビデオでは、リガンド結合と蛍光イメージングを使用してショウジョウバエの感覚ニューロン応答を検出する方法を示します。リガンドはニューロン受容体に結合し、カルシウムの流入を引き起こします。カルシウムはインジケーター複合体に結合して蛍光発光を引き起こし、リガンドに対するニューロンの応答を確認します。...

ショウジョウバエの感覚ニューロンからの生理応答の検出

このビデオの記事では、我々は大人のフルーツキイロショウジョウバエを飛んでの嗅覚に依存する食品の検索行動に空腹や満腹の効果を測定するための自動化されたアッセイを説明します。...

での採餌行動のためのシングル·フライアッセイショウジョウバエ

ミツバチ(Apis mellifera)のために開発されたテング拡張応答(PER)条件付けプロトコルは、多くの昆虫種における学習のいくつかの異なるメカニズムを研究するための生態学的に関連性があり、容易に定量化可能な手段を提供します。...

昆虫に行動可塑性を調査するためのテングザルの拡張レスポンスプロトコル：基本、生物医学および農業研究への応用

機械感覚に影響を与える新たな突然変異を特定するために、MARCM法によって生成された突然変異クローンのハエの剛毛の触覚刺激に対する行動反応を測定するアッセイを設計しました。これらの技術の組み合わせにより、他の方法では致命的となる機械感受性変異の同定が可能になります。...

でMARCMベースのクローンのMechanosensationための行動アッセイ<em&gt;キイロショウジョウバエ</em

ここでは、最大100匹のビネガーフライ（Drosophila...

のコンピュータ追跡することによってアッセイ嗅覚行動<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt; 4象限オルファクトメーターで

このプロトコールの全体的な目標は、長鎖クチクラフェロモンに応答するショウジョウバエの嗅覚受容体ニューロンからの単一感覚記録のための低揮発性の付臭剤を提示する方法を示すことである。...

からの電気生理学的記録<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;低揮発性の臭気物質に対するトリコイドセンシラ

このプロトコルは、その嗅覚ニューロンの同時光刺激に対する応答のショウジョウバエ幼虫のナビゲーション動作を分析します。630 nm の波長の光は、赤いシフト チャネル ロドプシンを表現する個々...

嗅覚ニューロンの光刺激に対する応答のショウジョウバエ幼虫の行動を追跡

このプロトコルの目的は、 ショウジョウバエ 幼虫の機械的発性の改善アッセイを実行する方法を示すものです。ここでは、ショ ウジョウバエ...

ショウジョウバエ幼虫における機械的な結知を測定するための改善されたアッセイとツール

この論文では、 Drosophila melanogasterにおける光遺伝学的操作の方法を提示し、CsChrimsonとGtACR2を利用して特定のニューロンを活性化および沈黙させます。オプトジェネティクスを利用してサーモタクティックおよび味覚行動を探索するための4つの実験が説明されており、これらのプロセスを支配する根底にある神経メカニズムについての洞察が得られます。...

Drosophila melanogasterにおける神経回路の光遺伝学的操作のための行動アッセイ

学ぶショウジョウバエのテングザル拡張レスポンス（PER）アッセイによる昆虫の味覚行動解析法。餌やり条件の最適化と正負の対照実験を用いて、信頼性の高い神経行動データを収集できます。

ショウジョウバエにおけるテングザル拡張レスポンス（PER）アッセイ

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