ゼブラフィッシュ心電図検査(ECG):心機能を評価するための低侵襲アッセイ

- まず、麻酔をかけた魚の腹側を上にして、濡れたスポンジのスリットに入れます。球根状動脈症のレベルで魚の正中線に正極を挿入します。次に、負極を心室の下、正中線の左側に0.5〜1ミリメートル挿入して、電位の差を測定できるバイポーラリードを作成します。最後に、参照電極を肛門領域の近くに挿入して、電気信号を接地します。

記録を開始し、しばらくしてからトレースを見直して、4 つの条件が満たされていることを確認します。すべての波形は、互いに見え、区別できるものでなければなりません。心房脱分極を表すP波は正でなければなりません。心室の脱分極を表すQ波、R波、およびS波の正味の合計は正でなければなりません。そして最後に、心房の再分極を表すT波は正でなければなりません。基準が満たされていない場合は、適切なトレースが記録されるまで電極を調整します。

記録後、魚を酸素水に浸し、エラまたは魚が規則的に動き始めるまでエラに水を噴射して魚を起こします。この例では、成体のゼブラフィッシュの表面心電図検査を行います。

- 実験当日は、ゼブラフィッシュを水槽から研究室まで運びます。in vivo ECG記録システムをセットアップするには、必要な機器を接続し、ECGリードの色分けされた3つのステンレス鋼電極をアンプの3つの色一致したアクセスポータルに挿入します。レベル4麻酔の導入には、成体のゼブラフィッシュを、施設動物管理および使用委員会によって承認された最低の所定の濃度の麻酔薬の溶液が入った皿に浸します。

ゼブラフィッシュが麻酔のために3秒間水平を維持したら、一対の鈍い鉗子を使用して、3つのECG電極を配置するために腹側表面がスリットが入った湿ったスポンジに魚をすぐに移します。正極を腹側正中線の球根状動脈症のレベルで、蓋の2つの下端を結ぶ架空の線の1〜2ミリメートル上に静かに挿入します。

負極を尾側に、正極に対して横方向に0.5〜1ミリメートル左に、成体のゼブラフィッシュ心室の最大頂端基底長よりも大きい距離に配置します。次に、参照電極を肛門領域の近くに尾側に配置します。ECG記録の場合は、システムを起動し、ECGデータ収集プログラムを開きます。ドロップダウンメニューから、範囲、ローパス、ハイパスの必要な設定を選択します。

Startを押すと、1キロヘルツのサンプリングレートで連続的なギャップフリーECG記録が開始されます。リード線の位置を最適化して信号対雑音比を最大にするには、ストップを押して録音を停止し、各心臓の最初の録音試行の直後にトレースを確認します。ECG が正常であると予想される場合は、すべての ECG 波形が明確で容易に見えること、および P 波、正味 QRS 群、および T 波がすべて陽性であることを確認してください。

- 最も重要なステップは、S/N比を最大化するためのリード位置です。各魚のECG記録を最初に試みた後、4つの検証基準をすべて適用して、正しいフィードバックを取得します。

- 正常なECGが予想される場合は、これら4つの検証基準がすべて満たされるまで、必要に応じて電極を再配置します。正常なT波が予想されるが、T波が小さすぎる場合は、T波の振幅が最大になるように電極を再配置します。リード位置を最適化した後、ECG記録を再開し、その後の分析のためにECGスイープを保存します。

ECG記録セッションの最後に、魚を傷つけないように電極を慎重に取り外します。サバイバル研究では、魚をトリカインを含まない新鮮な酸素化された魚の水に移します。このビデオでは、麻酔からの魚の回復を読者が見やすくするために、酸素化が中止されていることに注意してください。

サバイバル研究で麻酔からの回復を促進するために、パスツールピペットを使用して、魚が定期的な鰓の動きや水泳を再開するまで、鰓に水を激しく噴出させます。次に、魚を水槽に戻す前に、麻酔から完全に回復するために魚を監視します。魚は、少なくとも5秒間直立して泳ぐことができる場合、麻酔から完全に回復したと見なされます。