幼虫の切り身の準備:無傷の感覚ニューロンと関連する表皮細胞を視覚化する方法

- 幼虫をフィレット解剖の向きにするには、冷たい生理食塩水を含むシリコンコーティングされた皿に幼虫を置き、その背側と腹側を特定します。その長さに沿って走る気管チューブは背側をマークし、腹部の歯状突起ベルトは腹側を識別します。

次に、腹側を上にして、幼虫をそっと伸ばし、両端を皿の底に固定します。この位置は、解剖が進行するにつれて、感覚多樹状ニューロンの背側クラスターと関連する表皮細胞を無傷に保ちます。

解剖ハサミを使用して、幼虫の腹側正中線に沿って切ります。キューティクルをプレートに固定して調製物を平らにし、内部構造を取り除き、下にある筋肉組織を明らかにします。次に、適切な筋肉を慎重に取り除いて表皮を露出させ、樹状突起の形態を維持しながら、以前は隠されていたニューロンにアクセスします。

プロトコルの例では、感覚 da ニューロンと表皮細胞を見るための幼虫の切り身の準備と筋肉の除去の詳細なデモンストレーションを見ていきます。

- まず、シリコーンエラストマー皿に底面を覆うのに十分な冷塩水を加えます。対象の幼虫を皿に加え、実体顕微鏡の下に置き、光が適切に配置されるようにします。腹側を上にして幼虫を配置します。これは腹部の歯状突起ベルトで識別できます。

幼虫を前後方向に伸ばし、昆虫ピンを使用して、頭と尾を皿の底に固定します。一対の細かい解剖ハサミで、幼虫の腹側正中線に沿って一方の端からもう一方の端まで切ります。幼虫を広げて開き、キューティクル組織を四隅に固定して平らになるようにします。

鉗子を使用して、CNS、腸、気管などの内臓を切除します。フィレットがぴんと張っているが、最大限に伸びないように昆虫ピンを調整します。

筋肉組織が存在しない幼虫の背側正中線を特定し、この境界の内側に鉗子のプロングを配置します。筋と表皮の間にプロングを滑り込ませ、表皮との接触を最小限に抑えるように注意します。

- 表皮への損傷を最小限に抑えるために、できるだけ平らなプロングで解剖します。そして、カルシウム含有生理食塩水で解剖してみてください。そうすることで、筋肉と表皮の間にスペースを作ることができるかもしれません。

- 次に、鉗子を上に引っ張って、筋肉の体壁への付着を1つのアンカーポイントで壊します。対象の残りの筋肉セグメントに対してこのプロセスを繰り返します。

虫のペンを再調整して、幼虫の切り身をすべての方向に最大限に伸ばします。