Optokinetic Response Assay:ゼブラフィッシュの視力を測定する方法

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- 麻酔をかけた魚をプラットフォームに固定し、目とエラをプラットフォームの端から突き出します。自由に回転できる明るいドラム内の水で満たされたシリンダーに魚を直立させます。魚が復活したら、えらと目の動きで示され、白と黒の縦縞を交互に並べる格子またはパターンをドラムに入れます。次に、左目のビューのストライプに黒一色のオクルーダーを配置します。

回転を開始し、右目の視運動反応OKRを記録します。OKRは、視覚刺激に反応する反射的な眼球運動で構成されています。目の動きが観察されなくなるまで、パターンをますます小さな黒と白のストライプに置き換えます。左目についても同様の手順を行います。

単眼視力、細かい詳細を区別する能力を計算するには、目のレンズの中心からパターンまでの距離と、目の動きが観察された白と黒のストライプのペアの最小パターンの長さを測定します。プロトコル例では、視運動応答を使用して、成体のゼブラフィッシュの単眼視力と両眼視力を測定します。

- オプトキネティック研究は、直径14.5cmの回転ドラムを使用した特注の記録装置、光量設定調整可能な実体顕微鏡、コンピューター、および画像をキャプチャして記録するためのカメラを使用して行われます。コンピュータ操作のマイコンを使用して、ドラムの回転速度と回転方向を調整します。標準的な条件下で維持されている魚を使用して、0.016%トリカインで魚に2〜3分間麻酔をかけ、次に目と鰓を端に吊るして小さなプラットフォームに置くことから分析を開始します。

怪我をしないように魚を動かさないようにするには、薄いスポンジまたはタオルを魚の体に置き、魚に2〜3個の泡をピンで留めて、尾の動きが制限されるようにします。OKR記録装置の回転ドラム内に収まる円筒形の水で満たされたタンク内に魚を配置します。プラットフォーム上の磁石を使用して、ドラムの端から約7.3センチメートルのところに目を置いて魚を直立させます。

魚が麻酔から蘇生し、正常な呼吸とランダムな眼球運動が観察されたら、回転ドラムに0.07サイクル/度(CPD)のベースグレーティングを置き、コンピューターコントロールを作動させて回転とビデオキャプチャを開始します。ベース グレーティングによって最初の OKR が引き出されたら、回転を一時停止し、グレーティングを空間周波数の高い小さなグレーティングに置き換えます。OKR が引き出されなくなるまで、グレーティングを順番に小さくしてこのプロセスを繰り返します。OKR の損失を確認するには、変更された階段アプローチに従って、OKR の原因となった最小の格子で再テストし、次に応答を引き出せなかった格子で OKR の損失を確認します。

単眼視力測定を取得するには、反対側の目に隣接する縞模様の上に黒いプラスチック製のオクルーダーを置き、データ収集プロセスを繰り返します。次に、オクルーダーの位置を変えて測定を行い、もう一方の目に切り替えます。水槽の下にある基準測定ストリップを使用して、ストリップから各目の距離をメモし、正確な視力測定を行います。

視力を決定するには、次の式を使用してCPDを計算します(ここで、aはレンズの中心からグレーティングまでの距離、hはOKRが観察された最小グレーティングの1サイクルの長さです)。複合視力測定の場合は、左目と右目の両方から計算された値の平均を使用します。

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最終更新:1 8月 2026