眼の水晶体解剖:ゼブラフィッシュの水晶体の形態を観察する技術

- ゼブラフィッシュの目は、角膜、強膜、水晶体、網膜で構成されています。角膜は、光が目に入ることを可能にする透明な組織です。強膜は、角膜と連続している不透明な組織であり、外側の保護層を形成します。水晶体は、光を神経信号に変換する組織の感受性層である網膜に光を集束させる球状の構造です。

目を解剖するには、ペトリ皿にシリコンを入れて固めます。次に、麻酔をかけた魚を皿に入れ、マイクロハサミを使用して目を切除します。PBSで満たされたプレートに目を移して、組織内のpHを一定に保ち、後面を上にして目を向けます。鉗子で目を押さえ、強膜と網膜に3つの放射状に慎重に切り込みを入れます。

次に、ティッシュを折りたたんでレンズを露出させます。次に、目を前面を上にして配置し、強膜と網膜を切除します。解剖した目からレンズをすくい取り、その周囲に残っている組織をすべて取り除きます。次のプロトコルでは、ゼブラフィッシュの幼生と成虫の水晶体解剖を行い、水晶体の形態を分析します。

トリカインによる十分な鎮静を確認した後、マイクロダイセクションハサミを使用して、成体または幼生のゼブラフィッシュのいずれかから両眼を直ちに切除し、PBSを充填したシリコン解剖型を備えた35ミリメートルのカスタムメイドペトリ皿に両眼を置きます。成魚のゼブラフィッシュから水晶体を採取するには、目の後面を上にして置き、視神経乳頭を通して45度未満の角度で鉗子を挿入します。解剖ハサミを使用して、網膜と視神経乳頭から固定眼の毛様体帯までの強膜を2〜3回橈骨切開し、網膜と強膜を花びらのように剥がします。目を反転させ、角膜を上にし、はさみの平らな面を使用して、強膜と角膜の操作を介して間接的にレンズを固定し、鉗子を使用して網膜と付着組織を引き離します。次に、レンズから余分な組織を慎重に取り除きます。

ゼブラフィッシュの幼虫のレンズ収穫のために、PBSのシリコン皿の平らな部分に幼虫の目の後面を上にして再生します。また、鋭利なタングステン針を使用して、別の針または鉗子で目を固定しながら、網膜と強膜をラジオで切り込みます。次に、カスタムメイドのタングステンワイヤー針の鈍い面で解離した目からレンズをそっとすくい取り、付着した組織を慎重に引き離します。