Name: ラット同所性後肢移植 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: 学ぶラット同所性後肢移植の手技。カフ法による血管再建と複合組織同種移植の研究モデルとして、虚血再灌流障害や免疫学的拒絶反応のメカニズム解明に活用されます。

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ドナーの動作と後肢の収穫<ol><li>手術手順については顕微器具の滅菌セットが利用されている。外科医は、外科的処置の開始前に変更する必要が滅菌手袋、を含む、適切な服装を着用してください。 </li><li>ラットは、ペントバルビタールの腹腔内注射（50mg/kg IP）で麻酔ですし、全体の手術を通して安定した動物の体の温度を容易に加熱された操作のフィールド上に仰臥位に置かれる。 </li><li>前の操作から提出された皮膚切開を3回の両方でそれぞれ、消毒剤やアルコールを消毒しています。乾燥から動物の角膜を防ぐために、眼は手術前に眼軟膏（Vidisic）で潤滑されています。 </li><li>皮膚切開は約鼠径靭帯のレベルで右脚の付け根を越え行われます。大腿血管はバイポーラ焼灼し、鈍的切開とフリー解剖され、深い枝は8から0絹と連結されています。 </li><li>ヘパリンの300μl（50 IU）は、抗凝固のための陰茎静脈を介して注入されています。 </li><li>大腿血管は鼠径靱帯のレベルで連結し、合字の遠位カットされています。 </li><li>後肢は、氷冷（4℃）HTK液（5ml）を5分かけて大腿動脈経由でフラッシュされます。 </li><li>すべての筋肉群を大幅にはさみで分割され、骨切り術は大腿骨の遠位第三のレベルで見た回転電機で行われます。 </li><li>収穫された四肢は、移植までの保存および低温貯蔵のための氷冷HTK液の20mlの中に沈めている。 </li></ol>受信者の動作と移植<ol><li>ラットでは、操作のフィールド上にペントバルビタールと置か仰臥位の腹腔内注射で麻酔です。 </li><li>皮膚切開は約鼠径靭帯のレベルで右脚の付け根を越え行われます。大腿血管はバイポーラ焼灼し、鈍的切開とフリー解剖されています。 </li><li>大腿血管は可能ですが、心窩部血管の離陸に近位のような遠位に連結される。血管クランプを動脈と静脈で鼠径靱帯のレベルに配置されます。 </li><li>ポリエチレンカフは、動脈を介してプルアップされる（カフの内径：0.912ミリメートル、カフ壁の厚さ：0.010ミリメートル、袖口の長さ：2.0 mm）と静脈（カフの内径：1.151ミリメートル、カフ壁の厚さ：0.010ミリメートル、カフの長ささ2.0mm）。血管の内腔の端は、血管拡張剤でプルアップされ、大腿動脈と静脈はカフ（約2mm）の全身にevertedと円周8から0絹糸結紮で固定されています。 </li><li>ドナーの手足用のスペースを確保するために受信者の手足は、筋肉群の鋭い解剖で削除され、骨切りは半ば大腿骨で行われます。 </li><li>ドナーの肢は、HTK液から除去し、移植は18ゲージの針を（長さ：1.5〜2.0センチメートル）を使用して大腿骨の骨接合術で開始されます髄内ロッドとして。 </li><li>腹側筋群は密接に4から0 VicrylまたはProlene中断縫合糸で近似されています。 </li><li>血管吻合はレシピエントの静脈と袖口の複雑な上にドナーの静脈と動脈を引いて実行されます。円周8から0絹糸結紮は再び吻合を確保するために配置されます。 </li><li>静脈クランプは、動脈クランプ続いてリリースされ、再灌流は、四肢遠位や足への色のリターンだけでなく、動脈を通る脈動流によって可視化されている。 </li><li>残りの背側の筋群は4から0 VicrylまたはProlene中断縫合糸で再近似されています。 </li><li>皮膚は4から0 vicrylまたはprolene中断縫合で閉じられます。 </li><li>レシピエントラットを加熱パッド上に配置され、回復するまで厳重に監視されています。 </li><li>レシピエント動物は、3つの移植後の日のために予防的抗生物質（セファゾリン、20mg /日、IM）とBuprenex（0.1 mg / kgを、SC）を受け取ります。 </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

実験的な研究の十年は前と最近の過去に成功した人間の手の移植が有効になっている。 1978年に、シャピロら。よく、様々な病理学的、生理学的、および免疫学的な側面だけでなく、複合組織移植片の機能的な結果を研究に適したラットにおける同所性後肢移植モデルを、開発した。我々は、非縫合カフ技術を導入することにより、すなわち、血管吻合を手順の最も困難な部分を変更しました。従来の縫合法と比較すると、それは簡素化と短縮外科手術をし、高い生存率（80〜90％）で手続きを行うために基本的な顕微経験を持つ外科医が可能になります。 縫合吻合の変動がなければ、茎の出血のリスク、血栓症、およびねじれが減少する。これは適切なカフのサイズを選択して最小限に抑えることができますが、血液が最初にカフを通過する内腔に衝突部位の収縮や乱流は、カフ技術の新たな潜在的なリスクです。さらに、小さなサイズの不一致は、簡単に再び異なる直径の血管を縫合に内在するリスクを低減する、カフを吻合して処理することができます。成功したカフ吻合のための最も重要な考慮事項のいくつかを以下に示します。 <ol><li>の単回注射は、ペントバル...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン免疫</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Custodiol HTK溶液</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>外膜用剪刀</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>拡張用鉗子</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>ポリミドチューブ</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

ラット同所性後肢移植

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

複合組織の同種移植（CTA）は、手、前腕または数字の消失後に有効な治療選択肢を表しており、再建手術における新しい治療のエンティティとなっています。しかし、長期的に高用量の多剤免疫抑制療法は、より広範なアプリケーションをホールター重篤な副作用のリスクに耐える、移植片の生存を保証するために必要です。この分野でのさらなる進行は、基本的な免疫学および複合組織移植における虚血再灌流障害のよりよい理解に依存するかもしれません。 これまでに、ラットの同所後肢移植が再建移植（RT）の優先げっ歯類のモ​​デルをされている、しかし、それは血管、骨、筋肉と神経の再付着のために特別顕微スキルを必要とする過酷な手順です。 我々は、後肢の移植をラットに迅速で信頼性の高いアプローチを提供して、このモデルに血管カフ吻合技術を導入している。この手法では、簡素化と短縮外科手術をして正常に高い生存率と低い合併症率との操作を実行するための基本的な顕微経験を持つ外科医が可能になります。テクニックはよく免疫だけでなく、虚血再灌流障害（IRI）の研究に適しているように見える。

ここでは、ゴールドスタンダードと思われる同所性ラット後肢移植の手順を、説明します。<em&gt; in vivoで</em複合組織の同種移植の研究のための&gt;モデル。

複合組織同種移植（CTA）は、現在、手、前腕、または手指の喪失後における有効な治療選択肢となっており、新たな...

私はインズブルック医科大学内臓移植・胸部外科、ダニエルズ・ロスキー研究室のロバート・スハです。本日は、再血管化のためのカフ法を導入したラットの後肢移植の手順について説明します。この後肢移植手術は、私を含む外科レジデントによって行われます。我々は、複合組織同種移植における虚血および再灌流に関連する損傷を研究するために、この動物モデルを使用しています。さらに、この手順を用いて、複合組織同種移植の拒絶反応に伴う免疫学的イベントや、拒絶反応の発生を防止するための戦略を研究しています。これらの戦略には、標的化された免疫調節レジメンの使用による、維持免疫抑制療法の最小化または完全な回避が含まれます。赤色後肢移植の手順は、まずドナーの複合組織移植片を採取することから始まり、ドナーラットから右後肢を摘出し、氷上で保存します。次に、ドナー肢を移植するためのスペースを確保するため、レシピエントラットから右後肢を摘出します。その後、ドナー肢を氷上から取り出し、レシピエントラットに移植します。本モデルでは、カフ法を用いて血管吻合を行います。実験には、体重250 gの雄性Louis Redラットを使用しました。麻酔は、ペントバルビタールを50 mg/kgの用量で腹腔内投与し、導入しました。麻酔をかけたラットの鼠径部と後肢を剃毛し、処置のために消毒します。直視下マイクロサージェリー用器具、鋏、血管拡張器、および2本の湾曲鑷子を含む、一揃いのマイクロサージェリー器具が必要です。さらに、ここで示しているマイクロサージェリー用血管クランプが最も重要な器具となります。麻酔深度を確認するために、足趾つまみ反射（toe pinch reflex）を用います。ラットを滅菌プラットフォーム上に置き、切開前に四肢を完全に伸展させた状態で固定します。汚染を防ぐため、肢の毛を剃り落とします。鼠径靭帯の高さに合わせ、右鼠径部に切開を加えます。皮膚の直下に大腿血管が現れるため、バイポーラ電気凝固と鈍的剥離を用いてこれらを遊離させます。続いて、腹壁下動静脈を剥離し、電気凝固で止血します。分離後、器具で直接血管を操作することなく牽引できるよう、静脈と動脈の周囲に保持縫合としてシングルループを配置します。ドナー肢の採取前に、動脈と静脈の深層枝を近位側で8-0シルク縫合糸を用いて結紮し、遠位側を電気凝固します。50 unitsのヘパリンをペダル静脈から投与します。1分後、再び大腿血管に注目します。大腿動脈を8-0シルクを用いて可能な限り密に結紮し、大腿静脈（Fal）に対しても同様の手順を繰り返します。その後、両血管を結紮部位よりも遠位側で切断し、ヘパリン添加氷冷HDK溶液を用いて、5分間かけて動脈から後肢へ灌流を行います。次に、すべての筋群をハサミで注意深く分離します。大腿骨遠位3分の1のレベルで、回転式電気鋸を用いて骨切り術を行います。採取した肢は、移植までの保存および冷 almacenamientoのため、20 millilitersの氷冷HDK溶液に浸します。レシピエント側の操作は、大腿血管の単離および剥離から始まり、ドナー側の操作と同様に行います。慎重に剥離した後、血管を8-0シルク糸を用いて、腹壁下動脈の分枝点より近位で、かつ可能な限り遠位で結紮します。その後、ポリラインカフを血管に被せ、レシピエント静脈のカフ装着を行います。静脈とカフハンドルの上流側に単一の静脈クランプを装着し、完全に止血します。静脈末端側の結紮糸を切断し、静脈をカフの上に翻転させます。8-0の結紮糸を用いて血管とカフを周囲に結紮し、受容静脈を固定します。より直径の小さいカフを用いた動脈に対しても、全く同様の手順を行います。レシピエントの肢は、ドナーの肢と同様に、筋肉群を鋭的に剥離し、大腿骨中央で骨切り術を行うことで剥離します。これで、後肢を移植する準備が整いました。ドナー肢をHDK溶液から取り出します。まず、18ゲージの針を髄内釘として使用し、大腿骨の骨接合を行うことから移植を開始します。針の先端を切り落とし、残りの針を1.5～2 cmの長さにカットします。肢を固定し血管吻合の準備をするため、腹側筋肉群を4-0 Vicrylまたはプロリンの断続縫合で近接させます。カフR吻合では、ドナー静脈を拡張させてレシピエントの静脈およびカフの上に被せ、別の8-0結紮糸で円周状に固定します。ドナー動脈に対しても同様の手順を行います。最後に、両方の血管の吻合が完了したら、静脈クランプを外し、続いて動脈クランプを外します。再灌流は即座に起こり、遠位肢と足の色調の回復、および動脈を介した拍動流によって容易に確認できます。残りの背側筋群を再近似させます。皮膚を4-0 Vicrylまたはprolineの断続縫合で閉じたところで、移植は完了となります。術後、ラットを加熱パッドで温め、鎮痛剤および抗生物質を投与します。その後48〜72時間、苦痛の兆候や手術上の合併症がないか、ラットを注意深く観察します。カフ法による再吻合技術は、ここ数十年にわたり、海洋生物の腎移植モデルから異所性心移植モデルに至るまで、さまざまな外科研究分野で広く行われてきました。この手法により、虚血再灌流障害のさまざまな側面や、免疫学的現象を研究することが可能になります。我々の移植に続き、ここでは、この独自のカフ技法を肢複合組織移植に初めて適用した例を示します。小動物モデルにおいて、カフ技法は従来の吻合縫合術と比較して、手術時間、術者に求められるマイクロサージャリーの専門技術、および術中出血量を大幅に減少させることがわかりました。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

我々は簡単に確立するためにラット同所性肝移植のための古典的な2カフ法の改正を提示します。...

ラット同所性肝移植

私たちは、ラットにおける異所性腹部心肺移植(HAHLT)のための新しい技術について説明します。移植構成により、部分的に負荷がかかった移植片の循環が得られ、直接的な機能評価が可能になります。このモデルは、移植片の機能および免疫学的状態の急性または慢性研究に採用できます。...

ラット異腹部ボリュームにロードされた構成でのハート/シングル肺移植

超微小血管吻合のための非縫合カフ技術を適用したマウスにおける同所後肢移植のためのこの新規モデルは、血管新生複合同種移植（VCA）に関連したin vivoでのメカニズムの免疫学的研究のための強力なツールを提供します。...

マウスで同所後肢移植

この原稿とプロトコールの目的は、ラットの orthotopic...

Orthotopic ラット腎移植: 新規かつ簡便な外科的アプローチ

このプロトコルは、免疫学と機能回復の同時研究に向けた血管化複合同種移植(VCA)の堅牢で再現可能なモデルを提示します。手縫い血管アナストモーセと神経凝集を伴う右大腿後肢整形移植に細心の注意を払った技術に投資した時間は、機能的回復を研究する能力をもたらす。...

次のステップを踏む:ラットの機能回復を最大化するための神経凝集整体交位後肢移植モデル

我々は、ラットにおける異所性腹部心臓移植のモデルを記述し、現在の戦略の改変を暗示し、外科的アプローチを単純化する。さらに、重要な心筋細胞の耳内注射による新しい拒絶反応モデルを記述し、ラットにおける免疫学的分析をさらに可能にする。...

ラットにおける異所性心臓と心筋細胞移植のための免疫学的モデル

本論文は、ラットにおける部分的な異所性骨髄性骨切りばん移植プロトコルと、中期的なフォローアップにおけるその潜在的な結果を提示する。...

ラットにおける部分的な異所性後肢移植モデル

ラット同所性腎移植モデルは、腎同種移植片拒絶反応のメカニズムの解明に寄与する。現在のモデルは、腎臓移植のエンドツーエンド吻合および尿管 -...

腎同種移植片拒絶反応のためのラット同所性腎移植モデル

本論文では、異所性血管化心臓移植の修正技術を、更新された無菌技術、鎮痛、および麻酔で説明します。...

無菌技術、麻酔、および鎮痛の現代の基準に一致する修正マウス異所性心臓移植プロトコル

このプロトコルは、ラットの同所性左肺移植のための改善された技術を説明し、操作の難しさを軽減し、生存率を改善することに焦点を当てています。...

ラットにおける同所性左肺移植

学ぶラット同所性後肢移植の手技。カフ法による血管再建と複合組織同種移植の研究モデルとして、虚血再灌流障害や免疫学的拒絶反応のメカニズム解明に活用されます。

ラット同所性後肢移植

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