尾静脈注射:マウスモデルにおける転移研究のためのがん細胞投与法

まず、標識乳がん細胞が入ったペトリ皿にトリプシンを加えて、表面から剥離します。トリプシンの作用を止めるために血清を含む培地を追加します。細胞懸濁液を円錐形のチューブに移し、遠心分離してペレット細胞にします。

上清を捨て、細胞をリン酸緩衝生理食塩水に再懸濁します。チューブを氷の上に置いて、細胞の代謝を遅らせます。この細胞懸濁液に必要な量の細胞をルアーロックシリンジにセットし、針を固定します。

ネズミを尻尾を外側にしてげっ歯類の拘束具に入れます。尾を温水に浸して静脈を拡張します。尾の外側には2本の静脈があり、尾の腹側には動脈があります。尾部をアルコールで拭き、針を挿入し、細胞懸濁液を注入します。

血流に入ると、注入されたがん細胞は肺などの臓器に侵入し、増殖します。ゆっくりと針を取り外し、注射部位に滅菌ガーゼを使用して圧力をかけ、出血を止めます。マウスをケージに戻し、完全に回復していることを確認します。次のプロトコルでは、標識された転移性がん細胞をマウスモデルに注入して、乳がんの転移とコロニー形成を定量化する方法を示します。

培地を吸引し、細胞プレートを1X PBSですすいでください。15センチメートルプレートあたり5ミリリットルのトリプシンで細胞を2〜5分間トリプシン化し、すべての細胞を円錐形のチューブに移します。トリプシンをクエンチするのに十分な完全な増殖培地で、組織培養皿から残りの細胞を洗い流します。同じコニカルチューブにウォッシュを追加します。自動セルカウンターを使用してセルをカウントし、合計セル数を決定します。

次に、細胞をGの122倍で3分間遠心分離し、上清を吸引します。細胞を1X PBSに所望の濃度で再懸濁します。ここでは、100マイクロリットルのPBS中に各マウスに25,000個の細胞が注入されるため、再懸濁された細胞は1ミリリットルあたり250,000細胞になります。細胞懸濁液を注入するまで氷上に置いておきます。

動物施設のフード内で、チューブを反転させたり、1ミリリットルの注射器を使用して細胞を穏やかに、しかし完全に混合して、細胞が均一に再懸濁されるようにします。次に、1ミリリットルのルアーロックシリンジに細胞懸濁液を装填し、余分な気泡を排出します。1/2インチ、30ゲージの針をシリンジに置き、ベベルを上にして気泡を排出します。

マウスをげっ歯類の拘束具にそっと置きます。外側尾静脈が見え、拡張している必要があります。そうでない場合は、尾の付け根をそっとつまみ、尾を温かい水道水に浸して静脈を拡張します。アルコールワイプを使用してテールを清掃します。次に、針を尾静脈に挿入し、斜角を上にして、100マイクロリットルの細胞懸濁液を注入します。針が静脈に適切に挿入されていれば、針はわずかに前後に滑りやすく、プランジャーを押すときに抵抗がないはずです。

注射が成功すると、注射後数秒間、静脈の青色が白くなるフラッシュも発生するはずです。針をゆっくりと取り外し、滅菌ガーゼを使用して注射部位に圧力を加えて出血を止めます。マウスをケージに戻し、15分間監視して、完全に回復することを確認します。