G-10カラムベースの白血病細胞ソーティング:骨髄間質細胞から急性リンパ芽球性白血病細胞を精製する方法

- まず、骨髄間質細胞と共培養した白血病細胞を含むプレートにトリプシンを加えて細胞解離します。細胞の生存率を維持するために、事前に加温した培地を使用してペレットを遠心分離し、再懸濁します。G-10カラムには、架橋されたデキストランビーズが含まれており、水中で膨潤してゲルマトリックスを形成します。

G-10カラムを予熱培地と平衡化してビーズ間のスペースを埋め、カラムから培地がゆっくりと離れるようにします。気泡の形成を防ぐために、カラム内の適切な温度を維持してください。細胞混合物をG-10カラムのゲルビーズにゆっくりとロードします。G-10カラム上の細胞を室温で所望の時間インキュベートします。細胞表面の特性とサイズに基づいて、ゲルビーズは大きな骨髄間質細胞を優先的に制限し、白血病細胞の分離を可能にします。

予熱した培地をカラムに加え、白血病細胞の懸濁液を回収します。細胞懸濁液を遠心分離し、ペレットを適切な緩衝液に再懸濁します。白血病細胞の純粋な集団を使用して、さらなる分析を行います。次の例では、G-10カラムを使用して、白血病細胞の純粋な集団を間質共培養から分離します。

- 各亜集団の活栓を完全に閉じた状態で、1000マイクロリットルのピペットを使用して、準備したG-10カラムの1つの上部に1ミリリットルの細胞全体をドロップワイズに追加し、細胞がG-10ペレットの上または中に留まることを確認します。細胞をG-10ペレット上で室温で20分間インキュベートします。次に、1〜3ミリリットルの新鮮な温めた培地をカラムに加え、活栓を開いて、培地がゆっくりとカラムから出

るようにします。

予熱した培地を1〜2ミリリットル刻みでカラムに続けて追加します。合計15〜20ミリリットルの白血病細胞が採取されたら、活栓を閉じ、採取チューブにキャップをします。次に、細胞をスピンダウンし、ペレットを適切なダウンストリーム分析バッファーに再懸濁します。