Name: テラトーマ形成により、ヒト胚性幹細胞の運命のマッピング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-08-01T18:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 56 s
Description: 学ぶ ヒト胚性幹細胞のテラトーマ形成によるin vivo分化プロトコル。遺伝子標識細胞をマウス腎臓被膜下に移植し、8～12週間の分化後に免疫組織化学で組織特異的運命を解析する方法です。再生医療研究に有用です。

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この作品は、再生医療のためのカリフォルニア工科大学（RC1 - 00104）、NHLBIから公衆衛生サービスグラント（HL085377）、およびHSBへポリン財団からの贈り物から包括的な研究助成金によってサポートされていました

<ol><li>Thomson, J. A., Itskovitz-Eldor, J., Shapiro, S. S., Waknitz, M. A., Swiergiel, J. J., Marshall, V. S., Jones, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Hoof, D. V. an, D'Amour, K. A., German, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+insulin-producing+cells+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Derivation of insulin-producing cells from human embryonic stem cells.</a> Stem Cell Res. 3, 73-87 (2009).</li>
<li>Li, Z., Han, Z., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+human+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+vascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Transplantation of human embryonic stem cell-derived endothelial cells for vascular diseases.</a> J Cell Biochem. 106, 194-194 (2009).</li>
<li>Safinia, N., Minger, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+hepatocytes+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Generation of hepatocytes from human embryonic stem cells.</a> Methods Mol Biol. 481, 169-180 (2009).</li>
<li>Nury, D., Neri, T., Puceat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cells+and+cardiac+cell+fate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cells and cardiac cell fate.</a> J Cell Physiol. 218, 455-459 (2009).</li>
<li>Cowan, C. A., Klimanskaya, I., McMahon, J., Atienza, J., Witmyer, J., Zucker, J. P., Wang, S., Morton, C. C., McMahon, A. P., Powers, D., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+embryonic+stem-cell+lines+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts.</a> N Engl J Med. 350, 1353-1356 (2004).</li>
<li>Schatten, G., Smith, J., Navara, C., Park, J. H., Pedersen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Culture of human embryonic stem cells.</a> Nat Methods. 2, 455-463 (2005).</li>
<li>Watanabe, K., Ueno, M., Kamiya, D., Nishiyama, A., Matsumura, M., Wataya, T., Takahashi, J. B., Nishikawa, S., Muguruma, K., Sasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+ROCK+inhibitor+permits+survival+of+dissociated+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">A ROCK inhibitor permits survival of dissociated human embryonic stem cells.</a> Nat Biotechnol. 25, 681-686 (2007).</li>
<li>King, F. W., Ritner, C., Liszewski, W., Kwan, H. C., Pedersen, A., Leavitt, A. D., Bernstein, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subpopulations+of+human+embryonic+stem+cells+with+distinct+tissue-specific+fates+can+be+selected+from+pluripotent+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Subpopulations of human embryonic stem cells with distinct tissue-specific fates can be selected from pluripotent cultures.</a> Stem Cells Dev. 18, 1441-1450 (2009).</li>
<li>Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelio-mesenchymal+interactions+in+primordial+gland+structures+which+become+responsive+to+androgenic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Epithelio-mesenchymal interactions in primordial gland structures which become responsive to androgenic stimulation.</a> Anat Rec. 172, 179-195 (1972).</li>
<li>Kirsch, J. H., Klaus, J. A., Blizzard, K. K., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+evaluation+and+response+to+buprenorphine+in+rats+subjected+to+sham+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Contemp+Top+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Pain evaluation and response to buprenorphine in rats subjected to sham middle cerebral artery occlusion.</a> Contemp Top Lab Anim Sci. 41, 9-14 (2002).</li>
<li>Lee-Parritz, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analgesia+for+rodent+experimental+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Isr+J+Vet+Med%22%5BJournal%5D)">Analgesia for rodent experimental surgery.</a> Isr J Vet Med. 62, 74-78 (2007).</li>
<li>Julou, L., Guyonnet, J. C., Ducrot, R., Pasquet, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+pharmacological+and+toxicological+studies+on+ketoprofen%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Some pharmacological and toxicological studies on ketoprofen.</a> Rheumatol Rehabil. , Suppl 5-10. (1976).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

我々は、 生体内環境でのヒトES細胞の分化運命をマッピングするの目的のために非常に効率的テラトーマ形成アッセイを適応している。特に選択されたヒトES細胞の少数は、細胞ペレットを形成するために未分化野生型のヒトESおよびインゲンマメのレクチンと混合される。これは、免疫不全マウスの腎被膜下にグラフトされています。最初に選択したヒトES細胞の運命は、そして、以前に（9）報告、（ 図5）免疫組織化学により決定することができる。このメソッドは、セルベースの​​治療のための組織特異的な試薬を識別し、生成するための貴重なツールを提供しています。

<table><tbody><tr><td>2-メチル-2-ブタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>240486</td><td>Avertin</td></tr><tr><td>2,2,2-トリブロモ&amp;#8211;エタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402</td><td>Avertin</td></tr><tr><td>4-0 シルク縫合糸</td><td>Ethicon Inc.</td><td>641G</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>R&amp;amp;D Systems</td><td>233FB</td><td></td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B7536</td><td></td></tr><tr><td>Clear-Rite 3</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-046-341</td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>D-MEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td></td></tr><tr><td>Dupont #5 ピンセット</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>500233</td><td>腎被膜</td></tr><tr><td>エオシン Y</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-245-658</td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清 (Qualified)</td><td>Invitrogen</td><td>26140-079</td><td></td></tr><tr><td>Flex alcohol</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-046344</td><td></td></tr><tr><td>Gill&amp;rsquo;s ヘマトキシリン #3</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-050-204</td><td></td></tr><tr><td>止血鉗子（直線型）</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>501241</td><td>一般外科手術</td></tr><tr><td>アイリスピンセット</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>一般外科手術</td></tr><tr><td>ケトプロフェン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>K2012</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut D-MEM</td><td>Invitrogen</td><td>10829</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut 血清代替物</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>L-グルタミン</td><td>Invitrogen</td><td>25020-081</td><td></td></tr><tr><td>MILLICELL インサート</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM01250</td><td></td></tr><tr><td>非必須アミノ酸</td><td>Invitrogen</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>手術用剪刀</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>501754</td><td>一般外科手術</td></tr><tr><td>パラフィン (TissuePrep)</td><td>Fisher Scientific</td><td>8002-74-02</td><td></td></tr><tr><td>Pen/Strep</td><td>Invitrogen</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>PHA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L1668</td><td></td></tr><tr><td>豚ゼラチン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G6144</td><td></td></tr><tr><td>ROCK 阻害剤</td><td>Calbiochem</td><td>Y-27632</td><td></td></tr><tr><td>SCID beige マウス</td><td>Charles River Laboratories</td><td>250</td><td></td></tr><tr><td>Scott&amp;rsquo;s Wash</td><td>Fisher Scientific</td><td>6697-32</td><td>Ricca Chemicals</td></tr><tr><td>Vannas スプリング剪刀</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14003</td><td>腎被膜</td></tr><tr><td>&amp;#946;-メルカプト&amp;#8211;エタノール</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7522</td><td></td></tr></tbody></table>

テラトーマ形成により、ヒト胚性幹細胞の運命のマッピング

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation 

ヒト胚性幹細胞（ヒトES）は、自己複製のための無制限の容量、および3つのすべての胚性生殖層（1）に由来する細胞に分化する能力を持っている。特定の細胞型へのヒトESの指示分化、再生医療（例えば、（2-5））、及び決定するための方法の分野で大きな関心を生成しています<em&gt; in vivoで</em選択または操作ヒトES細胞の&gt;運命は、この努力に不可欠です。我々はこの目的のために非常に効率的テラトーマ形成アッセイを適応している。特に選択されたヒトES細胞の少数は、細胞ペレットを形成するために未分化野生型のヒトESおよびインゲンマメのレクチンと混合される。これは、免疫不全マウスの腎被膜下にグラフトされています。 2.5 × 10のようにいくつかの<sup&gt; 5</sup&gt;ヒトES細胞は、16センチメートルを形成するために必要とされる<sup&gt; 3</sup8-12週以内&gt;奇形腫。最初に選択したヒトES細胞の運命は、免疫組織化学により決定することができる。このメソッドは、セルベースの​​治療のために組織特異的な試薬を特徴付けるための貴重なツールを提供しています。

特定の細胞へのヒトES細胞の監督分化、再生医療に大きな関心を生成しています。我々は決定するための簡潔な、ステップバイステップのプロトコルを提供する<em&gt; in vivoで</em細胞ベースの治療のために組織特異的な試薬を特徴付けるための有用なツールを提供する選択されたヒトES細胞の&gt;運命。

ヒト胚性幹細胞（hESC）は、無限の自己複製能を有しており、三胚葉すべてに由来する細胞へと分化する能力を備えている。

本手順の全体的な目的は、ヒト胚性幹細胞をin vivoで分化させ、その組織特異的な運命を決定することです。まず、遺伝的にタグ付けされた目的の細胞からペレットを作成します。次に、そのペレットを免疫不全マウスの腎被膜下に外科的に移植します。本手順の第3ステップは、マウス腎臓のカプセル下に細胞ペレットを留置し、8～12週間分化させることです。最終ステップでは、得られたテラトーマを回収してホルマリンで固定し、免疫組織化学染色によってタグ付けされた細胞の運命を解析します。最終的に、得られたテラトーマの組織学的解析および免疫組織化学染色を通じて、タグ付けされた細胞が3つの胚葉のうち1つまたは複数に分化したことを示す結果を得ることができます。こんにちは。私はカリフォルニア大学サンフランシスコ校心血管研究所のHarold Bernstein博士の研究室のCarissa Ritnerです。本日は、腎被膜移植によるテラトーマ作成の手順をご紹介します。当研究室では、胚性幹細胞の分化を研究するためにこの手法を用いており、使用する各細胞株が3つの胚葉すべてに分化できることを確認するとともに、遺伝的にタグ付けされた幹細胞の生体内での運命を追跡しています。これからご紹介するすべての手順は、UCSF動物実験委員会（Institutional Animal Care and Use Committee）の承認を得て実施されています。また、ヒト胚性幹細胞を用いたすべての研究は、UCSF幹細胞研究監督委員会（Stem Cell Research Oversight Committee）の承認を受けて行われています。それでは、始めていきましょう。ヒト胚性幹細胞培養の調製については、本プロトコルのテキスト部分を参照してください。ラミナーフローフード内での操作として、ROCK阻害剤処理したヒト胚性幹細胞培養液に1 mg/mLのコラゲナーゼ IVを加え、37 °C、5% CO2条件下で5分間インキュベートし、ウェルからコラゲナーゼ IVを吸引除去します。その後、10%ペニシリン・ストレプトマイシンを添加した室温のDPBS 1 mLで置換します。フラットヘッドセルリフターを用いてプレートからコロニーを掻き取り、細胞懸濁液0.5 millilitersを2本のマイクロ遠心チューブにそれぞれ分注します。ウェルを1 milliliterのDPBSで洗浄し、その洗浄液0.5 millilitersを各チューブに加えます。チューブを8,000 ×gで20秒間遠心分離し、上清を吸引除去した後、各ペレットを500 microlitersの新鮮なDPBSと100 microlitersの1 mg/mL溶液に再懸濁します。細胞を移植のために凝集させるため、DPBSで調製したFasi vulgaris lectinを各チューブに加えます。細胞懸濁液を室温で5分間インキュベートします。8,000 ×gで2分間遠心分離し、ペレットを均一にします。チューブをローターウェル内で180度回転させます。その後、8,000 ×gで2分間、再度遠心分離を行います。上清を慎重に吸引し、ペレットをチューブから剥離させるためにペレットをそのまま残します。ペレットの端にKSR培地を200 microlitersゆっくりとピペッティングし、ペレットが徐々に浮き上がるようにします。ペレットが剥離したら、直ちに培地ごと0.4 micrometerのミリセルに回収します。KSR.Medium 3 mLを含むウェルに挿入します。37 °C、5% carbon dioxide条件下で2時間から一晩インキュベートします。低体温症を防ぐため、麻酔をかけた免疫不全マウスをヒーティングパッドの上に置きます。手術用鋏とアイリス鑷子を用い、脊椎に平行に、ただし中心からわずかにずれた位置に2.5 centimeterの皮膚切開を加えます。肋骨の直下で脊椎から約one centimeter離れた位置に、筋肉を貫通するより小さな切開を加えます。切開創は、腎臓を牽引して取り出せるのに十分な大きさでありつつ、無理に押し戻さない限り腎臓が腹腔内に戻らない程度の小ささにしてください。先端を鈍いフック状に加工したパスタピペットを使用し、筋肉の切開部から腎臓をゆっくりと引き出します。繊細な被膜の乾燥を防ぐため、ピンセットを用いて定期的に滅菌DPBSで腎臓を湿らせてください。被膜を腎臓からそっと引き離します。Venice Spring Scissorsを使用して、被膜に2 mmの切開を加えます。腎臓の中央部で、先端を非常に細く鈍端に加工したパスタピペットを被膜と腎臓の間に挿入し、軽く動かして小さなポケットを作ります。腎臓の反対側でも同様に繰り返し、2つのポケットを作成します。腎臓の両極に1つずつ配置します。使い捨て転送ピペットに大口径のピペットチップを装着します。ミリセルインサートからペレットを1つずつ吸い上げます。余分な培地はペレットの転送を妨げる可能性があるため、可能な限り少ない量の培地を採取してください。ピンセットを使用して、腎臓のポケットの端を持ち上げます。ペレットを開口部の横にそっと置き、引き伸ばしたピペットプローブを用いて、腎臓の一方の極に向かってペレットをポケットの中に押し込みます。2つ目のペレットを反対側の極にあるポケットに入れます。慎重にカプセルをペレットの上に被せます。カプセルを閉じるための縫合は不要です。フック付きピペットを使用して、腎臓を腹腔内にそっと押し戻します。筋肉の切開創は、1本の絹縫合糸で封鎖できる十分に小さいサイズである必要があります。皮膚を4〜5本の結節縫合で閉鎖し、動物を術後回復させ、手術から8〜12週間後に動物施設に戻します。腎奇形腫およびその周囲の嚢胞を、腹腔内から組織ブロックとしてまとめて摘出します。摘出した組織ブロック全体を、10%緩衝ホルマリンを含む50 milliliterのポリプロピレンチューブに入れます。奇形腫を4 °Cで一晩固定します。テラトーマをチューブから取り出し、マットの上に置きます。メスを使用して、テラトーマ自体を損傷しないように注意しながら、嚢胞および可能な限り多くの腎組織を切り離します。大きなテラトーマの場合は、解剖と包埋を容易にするために半分に切断しても構いません。標準的なパラフィン固定法を用いてテラトーマを処理し、解析およびイメージングのために切片をスライドに染色・封入します。詳細はプロトコルの本文中の注記を参照してください。ここでは、典型的なテラトーマの組織切片を示します。このテラトーマは、3つの胚葉すべてを代表する胚組織を同定するためにヘマトキシリン・エオジン染色されており、外胚葉を代表する初期の神経管構造が示されています。この切片は外胚葉の別の例であり、この場合は原始扁平上皮を示しています。ここでは、凝集した間葉の被膜に囲まれた軟骨が、胚中胚葉由来の組織を表しています。最後に、腺状の腸管構造を示すこのセクションでは、テラトーマ内の内胚葉組織が示されています。遺伝的にタグ付けされた幹細胞の運命をマッピングするため、テラトーマには野生型とCD 1 33陽性ヒト胚性幹細胞の混合物が播種されました。矢印で示されたCD 1 33陽性由来の細胞は、胚外外胚葉、特に神経上皮および新生神経管様構造から発生した組織で観察されました。私はハロルド・バーンスタイン博士です。Carissaが、in vivo発生アッセイを行うためのヒト胚性幹細胞培養からのテラトーマ形成方法を実演しました。この手順を行う際は、細胞の取り扱いに注意し、無菌操作を徹底することが重要です。以上で終了です。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

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