Name: モニタリングの殺虫剤抵抗性のためのバイオアッセイ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-30T16:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 学ぶ殺虫剤抵抗性のバイオアッセイ手法。節足動物害虫の薬剤感受性を調査し、LC50値を比較して抵抗性レベルを定量化する方法です。防除戦略の改善に役立ちます。

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我々は、コットンIncorporatedの国家支援プログラム＃08 - 317MO、このパブリケーションに関連する資金調達の研究のためのUSDA / CSREES SR - IPMグラント2009-34103-20018とランディスインターナショナルに感謝します。

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<li>Snodgrass, G. L., Scott, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+changes+in+pyrethroid+resistance+in+tarnished+plant+bug+%28Heteroptera%3A+Miridae%29+populations+during+a+three+year+period+in+the+delta+area+of+Arkansas%2C+Louisiana+and+Mississippi%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Seasonal changes in pyrethroid resistance in tarnished plant bug (Heteroptera: Miridae) populations during a three year period in the delta area of Arkansas, Louisiana and Mississippi.</a> J. Econ. Entomol. 93, 441-446 (2000).</li>
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利害の衝突は宣言されません。

LC 50値は、ターゲット人口のベースラインの感受性（S）として確立するために使用することができます。このデータの値は、将来のモニタリング調査や対象集団の感受性を決定する以前に決定されたLC 50のように現在の結果を比較するの当面の目的がシフトしたためにすることができます。実際のLC 50値が95％信頼区間を調べることによって、集団間で比較することができます。上限と下限が重なっていない場合、それは人口が感受性のといくつかの状況に大きな変化を経験している可能性があります抵抗の指標である33。 LC 50秒も殺虫剤esusceptibilitye 28の季節変化を調べ、または種または殺虫剤AI秒間応答を比較するために使用することができます。かなりの仕事はまた、10または大人と未熟な段階の間に雄と雌、10,34の間の応答を比較するためにこれらのデータを使用しています。時には、信頼区間が広くまたは計算することができません。厳密な信頼区間を得るためには、より多くの昆虫及び/またはそれ以上の濃度でアッセイを実施する。

<table><tbody><tr><td>50-100 ml ガラスビーカー</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>栓付きメスフラスコ（ピレスロイドなどの光感受性殺虫剤には遮光フラスコを使用可能）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20ml ガラスシンチレーションバイアル（ライナーなし蓋付き）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>バイアルの色分け用器具（塗料またはマーカー）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>アセトン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>市販のホットドッグローラー（加熱エレメントは切り離したもの）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>洗浄瓶 2本（1本は液を迅速に供給できるよう開口部を大きく改造したもの、もう1本は液をゆっくり供給できるよう注ぎ口を小さくしたもの）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>小型量り皿（すべてのプラスチック材質がアセトン耐性であることを確認すること）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>読取値 0.001g またはそれ以上の精度の天秤</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>リピーターピペット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>適切なチップ</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>メスフラスコに適合するガラスピペット</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>フード（アセトンの臭気除去に使用）</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>殺虫剤溶液およびバイアルの保管場所［冷蔵庫（溶液）、化学物質に応じて暗室または冷凍庫（バイアル）］</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

モニタリングの殺虫剤抵抗性のためのバイオアッセイ

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

農薬が高収量生産農業の不可欠な部分であるため、農薬への害虫抵抗性が増加する問題です。いくつかの製品が特定の作物のシステム内の個々の害虫のためにラベル付けされている場合、化学物質管理オプションは限られている。したがって、同じ製品（s）が繰り返し使用され、継続的な選択圧は標的害虫に配置されます。抵抗性個体群の開発に関連した金融と環境コストの両方があります。農薬耐性のコストは、米国では年間約15億ドルと推定されている。本稿では、現在節足動物（特に昆虫）抵抗性の発達のための集団を監視するために使用されるプロトコルを、説明します。大人のバイアル試験は、殺虫剤に連絡して毒性を測定するために使用されており、このテストの修正は、植物の全身殺虫剤に使用されます。これらのバイオアッセイでは、昆虫は、技術等級殺虫剤と特定の曝露後の間隔で記録された応答（死亡率）にさらされている。死亡率のデータは、対象集団の50％まで死亡率（LC 50）とデータのばらつきの推定値として信頼限界のシリーズ（CLの）を提供する致死濃度の推定値を生成するために用量のプロビット分析をログに供される。これらのデータは、殺虫剤感受性集団の範囲のために収集されている場合、LC 50は 、将来のモニタリングの目的のためにベースラインデータとして使用することができます。集団が製品にさらされている後は、結果は同じ方法論を用いて、予め決められたLC 50と比較することができます。

この原稿は、殺虫剤感受性を調査し、節足動物害虫に連絡することを抵抗し、全身の農薬を検出するために使用される手法を示し、説明します。

農薬は高収量生産農業に不可欠な要素であるため、害虫による薬剤耐性の獲得が深刻な問題となっています。限られた種類の製品しか……

本実験の全体的な目的は、昆虫が殺虫剤に対して耐性を獲得したかどうかを判定することである。これは、1987年のplaid ALによる記載に従い、接触性殺虫剤の場合は工業用グレードの殺虫剤をアセトンに溶解させてテスト濃度を作成するか、あるいは2008年のsnores Etolによる記載に従い、浸透性殺虫剤の場合は蜂蜜水溶液を用いて作成することで達成される。第2ステップとして、アセトン殺虫剤溶液0.5 millilitersを20 milliliterガラス絶縁バイアルに分注し、加熱 elements をオフにした市販のホットドッグローラーでバイアルを回転させます。または、蜂蜜水殺虫剤溶液0.5 millilitersをバイアル内に入れたフローラルフォームに分注します。次に、バイオアッセイを行うために、成虫バイアル試験用の目的の昆虫を採取します。このアッセイでは、プロビット分析により算出されたLC50を既存のLC50と比較することで、昆虫が殺虫剤への抵抗性を獲得したかどうかを確認し、殺虫剤抵抗性の結果をモニタリングします。こんにちは、Audra Millerです。私はミズーリ州ポーテージビルにあるミズーリ大学農業・食品・天然資源学部デルタ研究センターの者です。Dr. Kelly Kindleの昆虫学研究室にて実験を行います。ここでは、殺虫剤耐性が生じているかどうかを検出する手順について説明します。それでは、手順を開始します。保護ゴーグル、マスク、手袋などの適切な安全対策を講じることが不可欠です。殺虫剤を取り扱う際は、試験に使用する特定の農薬について、安全データシート（MSDS）で推奨される個人用保護具を確認してください。ストック溶液を調製するには、純度を考慮して工業用殺虫剤を適量的に計量します。ドラフト内で、メスフラスコにアセトンを部分的に満たします。殺虫剤を加え、計量舟をアセトンで洗浄して、その洗浄液をフラスコに回収します。メスフラスコにアセトンを標線まで満たし、数回反転させて混合します。必要に応じて段階希釈を行い、ペイントやマーカーを用いて濃度ごとにバイアルにカラーコードを付けます。作成するバイアル数に応じた約半量の溶液を小型ビーカーに注ぎ、溶液を使用しないときは蒸発を最小限に抑えるために蓋をしてください。リピーターピペットを用いて、バイアルに0.5 millilitersずつ分注します。低濃度から高濃度の順に作業し、まずはアセトンのみのコントロールから開始して、バイアル内壁を工業用殺虫剤でコーティングします。バイアルを市販のホットドッグローラーに載せ、ヒーターはオフのままにします。アセトンが完全に蒸発するまで、バイアルを回転させます。各バイアルを個別に確認し、乾燥していることを確かめてください。フェロモントラップ、スイープネット、またはその他の大量捕獲手段を用いて、試験対象の昆虫を収集します。昆虫に餌と水分を8～24時間提供します。1試験あたり10～25匹の、健康的で活動的な個体をバイオアッセイ用に選択します。濃度。昆虫をバイアルに入れ、単一の濃度だけでなく、全範囲の濃度に曝露するようにします。適切なインキュベーション時間の後、背面を下に置いて置いた際に自力で起き上がれるか、あるいは軽く刺激した際に協調的な動きが見られるかなどの基準に基づき、死亡率を評価します。昆虫が起き上がろうとしても転倒する場合、協調的な動きはないと判断し、死亡として評価してください。生存個体数と死亡個体数を記録し、すべての濃度における生存率を算出します。工業用グレードの殺虫剤を10%蜂蜜水溶液に溶解させ、バイアルを用意します。蜂蜜を計量して容量比10%の蜂蜜水溶液を作成し、これをメスフラスコに移します。蜂蜜水溶液に工業用グレードの殺虫剤を加え、計量舟をすすぎます。連続希釈の工程を繰り返しますが、アセトンの代わりに蜂蜜水を使用してください。フローラルフォームを切断し、バイアル内に配置します。0.5 mLの溶液をフローラルフォームに滴下し、蓋の代わりに綿球で昆虫を封じ込めます。接触性殺虫剤と同様の方法でバイオアッセイを行い、対照区の死亡率を用いて補正します。Abbottの式に基づき、個体群の50%を死滅させるのに必要な致死濃度および95%信頼区間を決定します。これは、例えばSAS Proc probateやPolo Plusなどのソフトウェアプログラムを使用して実行できます。このSASのサンプルプログラムでは、doseはバイオアッセイで使用した濃度を表します。Nは特定の濃度で試験した個体数であり、responseは死滅した個体数です。確率0.5を求めると、これがLC50となり、信頼限界は0.1891から0.3273 µg/vialとなります。試験した昆虫のベースラインデータ、または既知の感受性集団から得られたLC50が存在する場合、新しいLC50をベースラインデータや感受性集団のLC50と比較することができます。ベースラインのLC50が1バイアルあたり0.1487 µgで、信頼限界が1バイアルあたり0.1167から0.1793 µgであった場合、信頼限界が重複していないため、耐性に有意な変化があったと結論付けることができます。しかし、ベースラインのLC50が1バイアルあたり0.1487 µgであっても、信頼限界が1バイアルあたり0.0958から0.1983 µgであった場合は、信頼限界が重複するため、耐性の有意な増加はないということになります。この実験は、殺虫剤の効能低下の原因が殺虫剤耐性にあるかどうかを判断するのに役立ちますが、殺虫剤を扱う際は常に適切な保護具を着用してください。ご視聴ありがとうございました。皆様の実験の成功をお祈りいたします。

bioassays-for-monitoring-insecticide-resistance

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

このビデオでは、草食性に宿主植物の抵抗性のメカニズムを説明し、のアワフキムシ抵抗に抗生作用と耐性の相対的な寄与を推定するのない選択式テストを示しています...

特徴付ける草食動物の耐性機構：上Spittlebugs Brachiaria属。例として

このビデオでは、成虫の雌の蚊に対する潜在的な殺虫剤の毒性を決定するための局所試験アッセイを実演します。この方法は、蚊の神経伝達の致死的な阻害を引き起こすドーパミン受容体拮抗薬を使用して、局所適用時の殺虫剤の毒性効果を評価する方法を説明しています。...

局所検査アッセイ:局所適用による成虫の雌蚊に対するドーパミン受容体拮抗薬の殺虫性の可能性を評価する技術

雑草集団における除草剤耐性を確認するための堅牢で柔軟なアプローチが提示されます。このプロトコルにより、除草剤耐性レベルを推測し、わずかな適応で幅広い雑草種や除草剤に適用することができます。...

別の雑草種の堅牢な除草剤抵抗性試験のためのプロトコル

殺虫剤の評価は、多くの場合、成虫ではなく、未熟な段階を標的としています。ここでは、最初の幼虫ベッドのバグのステージと比較して、ベッドのバグの卵に対する殺虫剤を評価するためのプロトコルを提示します。他の昆虫は、非成人期段階で殺虫剤の有効性を評価するためにこれらのプロトコルを調整することができます。...

トコジラミに対する殺虫剤の有効性の評価方法、<em&gt;ナンキンムシ</em&gt;、卵とファースト齢

写真魅力バイオアッセイ昆虫研究の監視プログラムの重要な要素

未熟と大人の蚊殺虫剤、adulticides と endectocides の新しいクラスとして開発のために化学物質の毒性を評価するためのプロトコルを説明します。プロトコルは、高スループットのシングル...

蚊を殺虫化合物小説の毒性試験のプロトコル

ここでは、プロトコルを提案家フライ カルボキシルエステラーゼ タンパク質の in vitroバキュロ ウイルス媒介昆虫細胞発現系を生成し、後で機能的、それにより代謝ペルメトリンの役割を特徴づけるピレスロイドを授与セルベースの MTT...

殺虫剤抵抗性イエバエ、イエバエのカルボキシルエステラーゼの機能特性

迷惑と病気ベクトル昆虫をターゲット公衆衛生殺虫剤の有効性は異なる生態ゾーンにわたって統一されません。複数の環境間で農薬の標準的な評価を支援する電子地図を派生させる農薬効果の歩哨として拘束の媒介昆虫を用いた技術のシステムをご紹介します。...

フィールドの疾病媒介蚊に対する殺虫剤の効果を可視化します。

我々は、蚊およびショウジョウバエにおける殺虫剤感受性を測定するための局所適用バイオアッセイの方法論および重要性を説明する。提示されたアッセイはハイスループットであり、昆虫の質量を利用し、したがって濃度の代わりに質量相対化された致死量の計算を可能にし、他の同様の方法よりも変動性が低い可能性が高い。...

蚊やショウジョウバエに対する殺虫剤毒性を定量するための局所適用バイオアッセイ

このプロトコルは鱗翅目の昆虫の幼虫に対するphytochemicalの潜在的に有毒な効果を評価するために義務的な供給の試金を記述する。これは、亜致死量および致死量、抑止活性、および生理学的効果の最適化が容易な、拡張性の高い昆虫バイオアッセイです。これは、環境に優しい殺虫剤のスクリーニングに使用できます。...

Helicoverpa armigeraに対するファイトケミカルの殺虫効果を評価するための摂食アッセイシステムの開発

本研究は、生物音響を用いて測定した大豆における農薬散布のタイミングとミツバチの活動との関係を調査することを目的としました。分析では、農薬散布のタイミングに関わらず、ミツバチの活動、落葉、収量に影響を与えないことが示されました。しかし、ミツバチの活動は日中や大豆のピーク時により多く見られました。...

生物音響学を用いた殺虫剤・殺菌剤の組み合わせの忌避性評価

学ぶ殺虫剤抵抗性のバイオアッセイ手法。節足動物害虫の薬剤感受性を調査し、LC50値を比較して抵抗性レベルを定量化する方法です。防除戦略の改善に役立ちます。

モニタリングの殺虫剤抵抗性のためのバイオアッセイ

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