婦人科腫瘍におけるセンチネルリンパ節の術中検出のためのマルチスペクトルのリアルタイム蛍光イメージング

次の実験の全体的な目標は、子宮頸がんまたは外陰がんのセンチネルリンパ節の術中検出です。センチネルリンパ節は、腫瘍から最初に排出されるリンパ節です。この手順では、蛍光剤、インシーおよびグリーンまたはICGを、原発腫瘍の周囲に標準的な青色染料とともに注射します。

溶液は、最初のドレナージリンパ節に推進されます。手術前に手術室に設置されたカスタムメイドの術中マルチスペクトル蛍光カメラシステムは、蛍光シグナルに基づくリンパ流のリアルタイムin vivoイベントを記録するだけでなく、蛍光シグナルの強度と古典的な青色変色検出方法を示すex vivo結果も記録します。外科医はセンチネルリンパ節の切除に導かれます。

この技術が既存の方法と比較した場合の主な利点は、手術中にリンパ節の視覚化と切除が行われるワンステップの手順であることです。このプラットフォーム技術は、外科医に解剖学的情報を提供するだけでなく、in vivoでの動的なリアルタイムの蛍光追跡を提供することにより、腫瘍外科における現在の概念を改善する可能性があります。このプロトコルを実行するには、通常はカスタマイズされる術中マルチスペクトル蛍光カメラをセットアップします。

ここに示すシステムは、ミュンヘンのInstitute for Biological and Medical Imagingで開発されました。SEARCHsとの緊密な連携により、蛍光プローブの励起にレーザーが使用されます。カメラのフィルターは、発光光が光学系を通過すると、励起波長が750ナノメートル、発光波長が800±20ナノメートルの近赤外蛍光に調整され、可視光、固有蛍光、近赤外蛍光に分離されます。

CCDカメラは、すべてのカメラからのマルチスペクトル信号が処理されて真の定量的なフルオロ4生体分布が得られるように、別々の光束を検出するように整列されています。このセットアップでは、アーティファクトも修正されます。コントロールデスク上および手術室内のコンピュータモニターは、カラー信号と蛍光信号を別々の画像として表示できるだけでなく、無菌条件下で1つの画像に重ね合わせて表示することもできます。

蛍光造影剤インドシアニングリーンを滅菌蒸留水中に0.5ミリグラム/ミリリットルの濃度で調製します。生理食塩水は試薬を沈殿させるので使用しないでください、漂白を防ぎ、ICG試薬の完全性を維持するために、すぐに暗い涼しい場所に溶液を保管し、標準的な外科的処置位置への干渉を最小限に抑え、手術前に手術室でカメラシステムを開始し、手術中に使用するための高解像度スクリーンへの接続を確認してください。ビデオに示すように、滅菌手順と条件を使用して、カメラを標準的な滅菌ドレープで覆います。

蛍光剤を注入する前に。カメラを患者の上方に置き、関心のあるフィールドを露出させます。ズームを調整してカメラの焦点を合わせ、手術室の照明をオフにして、蛍光信号の検出を改善します。

1ミリリットルあたり0.5ミリグラムの1ミリリットル、ICG、および等量の標準青色染料を含むロータスシリンジ。原発腫瘍の周囲の4つの象限に蛍光剤を慎重に注入し、手術用手袋にICGがこぼれた場合にこぼれないようにしてください。手順全体で手袋を交換するだけです。

カメラを操作して、対象領域が継続的に記録されるようにします。リンパの流れと蛍光センチネルリンパ節の外観の静止画またはリアルタイムビデオを取得します。180〜200ミリ秒の露出時間で、良好なビデオが得られます。

将来の分析のために、それに応じてすべてのデータをコンピューターに保存します。パテントブルーの注入による青色変色に対する目視検査は、同時に記録された蛍光画像をガイドとして、標準的な手順の一部として行われています。センチネルリンパ節のリアルタイム切除が行われます。

リアルタイムイメージングは、予期しない局在の蛍光ノードを検出し、蛍光の存在についてすべての切除リンパ節のex vivo画像を順次取得するのに役立ちます。静止画を撮影する際には、より長い露光時間を使用できます。センチネルリンパ節は、腫瘍細胞の有無を検出するための病理組織学的分析に送られます。

このプロトコルのマルチスペクトル蛍光イメージングによるセンチネルリンパ節の術中検出の力は、外陰がんのリンパ節のin vivoマルチスペクトル蛍光画像のこの例で実証されています。切除前の鼠径部の蛍光リンパ節が鮮明に可視化されます。このショートムービーでは、子宮頸がん患者におけるセンチネルリンパ節の蛍光に基づくリアルタイム検出の様子をご覧いただけます。

ここでは、子宮頸がんのリンパ節のex vivo画像を示しています。リンパ節のカラー画像は、疑似カラースケールを使用してまったく同じリンパ節の蛍光画像と重ね合わせられ、シグナル対バックグラウンド比の高い鮮明な画像を生成しました。この技術は、センチネルリンパ節の画像誘導切除の外科的腫瘍学の分野の研究者に道を開いただけでなく、腫瘍縁評価のための特定の腫瘍標的イメージングの可能性を提供し、固形腫瘍および可能性のある局所局所転移の患者に対する患者に合わせた介入を提供します。

したがって、このビデオを見た後、婦人科がんのセンチネルリンパ節のリアルタイムの術中蛍光イメージングについて良い印象を持つはずです。