Name: イオンチャネル研究のためのパッチクランプおよび灌流のテクニックで表さアフリカツメガエル卵母細胞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-01-10T18:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 19 s
Description: 学ぶパッチクランプと灌流システムを用いたBKチャネル活性化記録法。Xenopus卵母細胞でイオンチャネルの電気生理学的特性を解析し、神経科学における分子メカニズムの理解に貢献します。

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この作品は、JCJCに健康補助金の国立研究所R01 - HL70393およびR01 - NS060706によってサポートされていましたスペンサーT.オリン基金に関する医工学の教授である。

1。卵母細胞へのmRNAの注入<ol><li> 0.05注入- Nanoject IIオートナノリッターインジェクター（ドラモンドサイエンティフィック社、モデル3-000-204）を使用して、 アフリカツメガエルの卵母細胞（ステージV - VI）にin vitroで転写した50 ngのメッセンジャーRNAを。各mRNAのダースの卵母細胞での注入を繰り返します。 </li><li>倍ND - 96ソリューション（96 mMの塩化ナトリウム（NaCl、氏58.44グラム/モル）、2 mMの塩化カリウム（KCl、氏74.56グラム/モル）、1.8 mMの塩化カルシウム（CaCl 2で •2H 2 Oを用いて注入した卵母細胞を洗い流す、氏147.02）、1mMの塩化マグネシウム（MgCl 2の •6H 2 O、ミスター203.31グラム/モル）、5 mMの4 - （2 -ヒドロキシエチル）-1 - piperazineethanesulfonic酸（HEPES、氏238.31グラム/モル）、2.5 mMのピルビン酸ナトリウム（ミスター110.04グラム/モル）、および1xペニシリン - ストレプトマイシン。pH7.6）で、その後2 +の間に18℃で培養プレートとインキュベート中に置いてください。 </li></ol> 2。灌流システムの準備<img src="/files/ftp_upload/2269/2269fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 自動化ValveLink 16灌流システムのイラスト。灌流システムは、灌流チューブを介して、ソリューションの貯水池の灌流液を押し出すために加圧された窒素を使用し、血流の鉛筆、チップに。灌流液の各ストリームの流れは、1つのタンクのバルブの一電子バルブによって制御されます。このプロトコルでは、貯水池の一つは、廃棄物の収集だけでなく、圧力放出機構として加圧や機能ではありません。 （写真は、ベンダーのWebサイトのhttp://www.autom8.comから適応） <ol><li>灌流の鉛筆にチューブを接続します。電磁弁コントローラをオンにして、電磁弁を開きます。 </li><li>チューブと灌流の鉛筆が目詰まりして気泡のないことを保証するために、脱イオン水で満たされた注射器を用いて各チューブを脱イオン水（DI）を押してください。 </li><li>ソリューションの貯水池にチューブを接続し、加圧された窒素を適用するにはガスボンベのバルブを開きます。 </li><li>リザーバー溶液とチューブを埋めるためにタンクのバルブを開きます。必要に応じて、溶液中の気泡を除去するためにタンクのバルブをはじく。チューブが液で満たされた後バルブを閉じます。 </li><li>水で灌流チップを記入し、血流の鉛筆にそれをねじ込む。先端を接続するときに気泡をトラップしないように注意してください。 </li><li>粘土を使ってバスのステージへの血流の鉛筆を修正。灌流チップは、バスのスペースになっていることを確認します。灌流システムは、現在設定されています。 </li><li>お風呂にDI水を追加。灌流先端が水中にされていることを確認します。 </li><li>それぞれの灌流液が正しく灌流の先端から出ることをテスト。廃棄物のコレクターのチューブに接続された電子バルブを閉じ、一度に灌流液（140 mMの水酸化カリウム（KOH、バルブを開いてM rは 56.1グラム/モル）、20mMの4 - （2 -ヒドロキシエチル）-1 - piperazineethanesulfonic酸（HEPES、M rは 238.31グラム/モル）、2 mMの塩化カリウム（KCl、M rは 74.56グラム/モル）、1mMのエチレングリコール-ビス（2 - aminoethylether）- N、N、N'、N' -四酢酸（EGTA、M rは 380.35グラム/モル）、pHはメタンスルホン酸（メソ3、M rは 96.1グラム/モル）が7.1から7.2に調整され、 カルシウム 、必要なときに+またはMg 2 +を所望の濃度に追加されます）。顕微鏡下で、血流の先端から出てくる灌流液の噴出を観察。灌流液用バルブを閉じて、廃棄物のコレクターのためのバルブを開きます。血流のジェットはほぼ消えるはずです。すべての灌流液で同じテストを繰り返します。 </li><li> （2 -ヒドロキシエチル）-1 - piperazineethanesulfonic -あなたが正しく、すべての灌流液の流れを確認したら、浴溶液（140 mMの水酸化カリウム（KOH、M rは 56.1グラム/モル）、20mMの4に風呂にDI水を交換してください酸（HEPES、M rは 238.31グラム/モル）、2 mMの塩化カリウム（KCl、M rは 74.56グラム/モル）、pHをメタンスルホン酸（メソ3、M rは 96.1グラム/モル））によって7.1から7.2に調整されます。 </li></ol> 3。パッチクランプ法<ol><li>各パッチクランプセッションの前に再塗装塩化銀と銀の記録電極。最初に、ピペットホルダーと水没から少なくとも15分間は新鮮な漂白剤の入ったバイアルに、電極ワイヤの先端の半分を電極線を取り外します。これは、ワイヤ上の塩化銀の層を堆積。 </li><li>脱イオン水とブロット乾燥と電極ワイヤをすすぎます。その後ピペットホルダーに戻ってAg / AgCl電極をインストールしてください。 </li><li>ヘッドステージにバス（参照）電極を接続し、お風呂に入れてください。これは記録用の電極を準備します。 </li><li>今すぐデータを取得するための準備。コンピュータの電源をオンにして、コンピュータのプリンタポ​​ートにハードウェアキーを差し込みます。あなたがHEKAパルスであるデータ収集ソフトウェアを、使用するためのハードウェアキーを接続する必要があります。 </li><li>アンプのスイッチ（アクソンインスツルメンツ、AXOPATCH 200B）とHEKAパルスを開始します。このような刺激の尺度として、プロトコルのファイルをロードし、構成設定を調整します。構成設定を調整するための目標は、テストの潜在的なコマンドの潜在的に正確に等しいことを保証することである。これは、データ収集装置を準備します。 </li><li>卵母細胞を準備します。ストリッピング溶液中に浸し卵母細胞（200mMのN -メチル- D -グルカミン（NMG、M rは 195.22グラム/モル）、200mMのアスパラギン酸（無K +）（M rは 133.1グラム/モル）、2 mMの塩化カリウム（KCl 、M rは 74.56グラム/モル）、10mMのエチレングリコール-ビス（2 - aminoethylether）- N、N、N'、N' -四酢酸（EGTA、M rは 380.35グラム/モル）、1mMの塩化マグネシウム（塩化マグネシウム2•6H 2 O、M R 203.31グラム/モル）、10mMの4 - （2 -ヒドロキシエチル）-1 - piperazineethanesulfonic酸（HEPES、M rは 238.31グラム/モル）、pHを水酸化ナトリウム（NaOHにより7.4に調整され5 M R 40.0グラム/モル） - 10分で剥離液により、卵黄膜を除去するなり、細胞膜から卵黄膜を切り離します。 </li><li>ゆっくりと鉗子の2つのペアを使用して卵母細胞から卵​​黄膜を取り除く。 devitellinized卵母細胞は非常に壊れやすく、そのため必要に応じて少しに移動する必要があります。 </li><li>空気や気泡にdevitellinized卵母細胞の接触を避けるために注意しながら、お風呂に卵母細胞を転送するのに十分な溶液で満たされたガラスピペットを使用してください。これは録音のための卵母細胞を準備します。 </li><li>パッチピペットを準備します。サターP - 97火焔/ブラウンマイクロピペットプラーにガラス毛細管（VWRインターナショナル、カタログ番号53432から921）を挿入した後、ガラスピペットを引き出します。先端の形状と開口部の直径を決定するために顕微鏡下でピペットを守ってください。開口径は2-4マイクロメートルにする必要があります。 </li><li>録音中に容量性電流を低減するために、滑らかな先端、コートワックスとの先端を確実にし、それを火 - ポーランド語。 </li><li> （2 -ヒドロキシエチル）-1 - piperazineethanesulfonic酸（HEPES、M R -ピペット溶液（140 mMの水酸化カリウム（KOH、M rは 56.1グラム/モル）、20mMの4内のピペットの先端を配置することにより、ピペットチップを埋める238.31グラム/モル）、2 mMの塩化カリウム（KCl、M rは 74.56グラム/モル）、2mMの塩化マグネシウム（MgCl 2の •6H 2 O、M R 203.31グラム/モル）、pHはメタンが7.1から7.2に調整され酸（メソ3、M rは 96.1グラム/モル））とプランジャーを描画。これは、先端を濡らす。 </li><li>ピペット溶液注射器を使用し、Ag / AgCl電極を内側にピペットホルダーにピペットを配置し、ピペット溶液との接触を完全にピペット1 / 3を埋める。これは、パッチピペットを準備します。 </li><li>準備卵母細胞から切り出すインサイドアウトパッチをするために、顕微鏡下で卵母細胞の明確なエッジを見つける。マニピュレータを使用して卵母細胞に近いパッチピペットを移動します。ピペットの直列抵抗を記録。パッチピペットの理想的な直列抵抗は、ピペット溶液で満たされたと浴溶液に浸漬MΩ1から1.5の間です。 </li><li>抵抗が約2倍になるまで徐々に卵母細胞に対してピペットを押してください。 </li><li>ギガオームシールが得られるまでピペットホルダーに接続された吸引管を介して口の中で膜に穏やかな吸引を適用します。分のカップルのための電圧-30 mVでそれを保持することによってパッチを安定させます。 </li><li>すぐに卵母細胞にさらにピペットを押し、次に静かに引き出してインサイドアウトパッチ、消費税のパッチを入手してください。 </li><li>インサイドアウトのパッチは現在、クランピングのための準備ができています。灌流先端の開口部から離れて約100ミクロンにインサイドアウトパッチをホールディングピペットを移動します。 </li><li>廃棄物の収集のための電子バルブを閉じて、希望する灌流液用タンクのバルブを開き、 </li><li>パッチ間の電流の録音を開始します。必要に応じて電圧と灌流液を変更します。 </li><li>録音が終了したら、目詰まりを避けるために、脱イオン水を介してプッシュすることで灌流チューブ、鉛筆、チップを清掃してください。 </li></ol> 4。代表的な結果パッチクランプのための卵母細胞の準備中に、剥離液の5〜10分の治療では、卵黄膜を除去可能にする形質膜、から卵黄膜を切り離すでしょう。 パッチピペットの理想的な直列抵抗は、ピペット溶液で満たされたと浴溶液に浸漬MΩ1から1.5の間です。 以下は、卵母細胞膜パッチ上の野生型のBKチャネルの代表的な録音です。 50mVの増分で50 mVから200 mVまでの電圧増加の第二段階 - 左上部に、方形波は、パッチに印加される電圧を示している。下記の灌流液が公称値のCa 2 +（フリーの[Ca 2 +]が約0.5 nM）を持って対応する現在のトレースです。の電流振幅のしわは、BKチャネルの開確率は電圧と共に増加することを示しています。右側に、同じパッチは、1.0μMのCa 2で灌流される+と同じ電圧のプロトコルを使用して適用される場合。電流振幅は、[Ca 2 +]の持つオープンな確率が増加することを示す、同じ電圧でより多くを向上させます。 <img src="/files/ftp_upload/2269/2269fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2">

<ol><li>Methfessel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+measurements+on+Xenopus+laevis+oocytes%3A+currents+through+endogenous+channels+and+implanted+acetylcholine+receptor+and+sodium+channels%5BTitle%5D)+AND+%22Pfl%C3%BCgers+Arch%22%5BJournal%5D)">Patch clamp measurements on Xenopus laevis oocytes: currents through endogenous channels and implanted acetylcholine receptor and sodium channels.</a> Pflügers Arch. 407, 577-588 (1986).</li>
<li>Toro, L., Wallner, M., Meera, P., Tanaka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maxi-K+%28Ca%29%2C+Unique+Member+of+the+Voltage-Gated+K+Channel+Superfamily%5BTitle%5D)+AND+%22News+Physiol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Maxi-K (Ca), Unique Member of the Voltage-Gated K Channel Superfamily.</a> News Physiol. Sci. 13, 112-117 (1998).</li>
<li>Fettiplace, R., Fuchs, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+hair+cell+tuning%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of hair cell tuning.</a> Annu. Rev. Physiol. 61, 809-834 (1999).</li>
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<li>Shi, J., Cui, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Mg2%2B+enhances+the+function+of+BK-type+Ca2%2B-activated+K%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Intracellular Mg2+ enhances the function of BK-type Ca2+-activated K+ channels.</a> J. Gen. Physiol. 118, 589-606 (2001).</li>
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<li>Cox, D. H., Cui, J., Aldrich, R. W., W, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allosteric+gating+of+a+large+conductance+Ca-activated+K%2B+channel%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Allosteric gating of a large conductance Ca-activated K+ channel.</a> J. Gen. Physiol. 110, 257-281 (1997).</li>
<li>Cui, J., Aldrich, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allosteric+linkage+between+voltage+and+Ca2%2B-dependent+activation+of+BK-type+mslo1%5BTitle%5D)+AND+%22K%2B+channels.+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Allosteric linkage between voltage and Ca2+-dependent activation of BK-type mslo1.</a> K+ channels. Biochemistry. 39, 15612-15619 (2000).</li>
<li>Yang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Slo1+BK+channels+by+Mg2%2B+coordinated+between+the+voltage+sensor+and+RCK1%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Activation of Slo1 BK channels by Mg2+ coordinated between the voltage sensor and RCK1.</a> 15, 1152-1159 (2008).</li>
<li>Lee, U. S., Cui, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%7Bbeta%7D+subunit-specific+modulations+of+BK+channel+function+by+a+mutation+associated+with+epilepsy+and+dyskinesia%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">{beta} subunit-specific modulations of BK channel function by a mutation associated with epilepsy and dyskinesia.</a> J. Physiol. , 587-1481 (2009).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

卵母細胞発現系は、内在性のチャンネルの相対的に低い背景に起因する電位依存性イオンチャネルの電気生理学的特性評価に最適です。さらに、それは一過性発現系なので、それはこれらのチャネルの突然変異誘発試験を行うの効率的な方法を提供する。しかし、それは卵母細胞発現系は、哺乳類細胞では異なることに留意すべきである、したがって、異なるサブユニットと翻訳後修飾との関連付けの違いがあるかもしれません。また、脂質​​濃度は、チャネルの機能的特性に影響を及ぼす可能性のある2つのセルの間異なる場合があります。 灌流チューブ、鉛筆、チップは、DI水で詰まりを避けるために、実験後のたびに清掃する必要があります。それは塩化銀でコーティングされていることを確認するためにAg電極線を治療するために新鮮な漂白剤を常に使用する、そうでなければ記録が不正確になります。テストの潜在的なコマンドの潜在的に正確に等しくなるようにデータ取得のための構成設定を調整します。それはきれいなパッチピペットは非常に汚れだけを使用する前にそれらを火 - ポーランドからそれらを保護する蓋を使っておく方がよいだろう。

<table><tbody><tr><td>Nanoject II 自動ナノリットルインジェクター</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-204</td><td></td></tr><tr><td>P-97 フレーミング/ブラウン マイクロピペットプラー</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>灌流システムおよび電子コントローラー</td><td>AutoMate Scientific, Inc.</td><td>ValveLink 16</td><td>灌流チップの内径：100 microns</td></tr><tr><td>倒立顕微鏡</td><td>Olympus Corporation</td><td>CKX31</td><td></td></tr><tr><td>ガラスピペット</td><td>VWR international</td><td>53432-921</td><td></td></tr><tr><td>フレーミング/ブラウン マイクロピペットプラー</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>P-97</td><td></td></tr><tr><td>アンプリファイア</td><td>Axon Instruments</td><td>AXOPATCH 200B</td><td></td></tr><tr><td>コンピューターインターフェース</td><td>INSTRUTECH Corporation</td><td>ITC-18</td><td></td></tr><tr><td>ヘッドステージ</td><td>Axon Instruments</td><td>CV 203BU</td><td></td></tr></tbody></table>

イオンチャネル研究のためのパッチクランプおよび灌流のテクニックで表さアフリカツメガエル卵母細胞

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

大コンダクタンス、電圧およびCa 2 +活性化K +（BK）チャネルの活性化を研究するために設計されているプロトコルは、ここで紹介。プロトコルはまた、他のイオンチャネルや神経伝達物質受容体1の構造機能相関を研究するために使用されることがあります。 BKチャネルは、幅広くさまざまな組織で発現され、平滑筋収縮、内有毛細胞の周波数同調と神経伝達物質放出2-6の規制の規制などを含め多くの生理機能に関与している。 BKチャネルは、膜の脱分極によっておよび細胞内Ca 2 +およびMg 2 + 6〜9によって活性化されています。そのため、プロトコルは、膜電位と細胞内液の両方を制御するように設計されています。このプロトコルでは、BKチャネルのメッセンジャーRNAを18℃で10から13のインキュベーションの2-5日間続いてアフリカツメガエル卵母細胞（ステージV - VI）に注入されます。単一または複数のBKチャネルを含む膜のパッチは、パッチクランプ法を10-13を使用してインサイドアウトの構成で切り出しています。パッチの細胞内側は、異なる条件下でのチャネルの活性化を調べることができるように記録する際に必要なソリューションで灌流される。要約すると、BKチャネルのmRNAは卵母細胞膜上のチャネルタンパク質を発現するアフリカツメガエル卵母細胞に注入され、パッチクランプ技術は、制御電圧と細胞内のソリューションの下にチャネルを流れる電流を記録するために使用されます。

BKチャネルのイオン電流をパッチクランプ技術を使用して記録されます。 BKチャネルはで表されます<em&gt;アフリカツメガエル卵母細胞</em&gt;メッセンジャーRNAを注入することにより。パッチクランプ記録中に細胞内液を灌流システムによって制御されます。

本プロトコルは、大コンダクタンス電位およびCa2+依存性K+（BK）チャネルの活性化を研究するために設計されています。本プロトコルは...

この手順の全体的な目的は、細胞内溶液を制御しながら、制御された電圧下でBKチャネルの活性化を記録することです。これは、まずBKチャネルmRNAを注入してXenopus CytesにBKチャネルを発現させることで達成されます。手順の第2段階は、灌流システムの準備です。本手順の第3ステップは、卵母細胞膜とパッチピペットの間にギガシールを形成することです。手順の最終ステップは、膜パッチを切り出すことです。最終的に、パッチクランプ法と灌流システムを組み合わせて得られた結果から、BKチャネルが電位およびカルシウム濃度の変化によって活性化されることが示されました。こんにちは。ワシントン大学のJamie Zus博士の研究室に所属しているJin Cho Youngです。この手法は、イオンチャネル活性化の分子メカニズムに関する疑問など、神経科学分野における重要な問いに答えるのに役立ちます。それでは、始めていきましょう。本手順の最初のステップは、パッチクランプ法の数日前から開始し、in vitroで転写したBKチャネルmRNAを使用します。Xenopus oocyteの5〜6段階で回収した後、0.05〜50 ngのBKチャネルmRNAをoocyteに注入します。注入にはNanoject IIオートナノリッターインジェクターを使用してください。各mRNAについて、同様に12個の卵細胞に注入を繰り返します。ND 96溶液を用いて卵細胞を2回洗浄します。その後、卵細胞を培養プレートに移し、18 °Cで2日以上インキュベートして、BKチャネルを発現させます。2〜5日間のインキュベーション後、卵母細胞でBKチャネルが発現しているはずであり、パッチクランプ法に供することが可能になります。卵母細胞を取り扱う前に、灌流システムをはじめとするパッチクランプに必要な準備をすべて整えてください。ここに示しているシステムはAutomate Valve Linkです。16 profusion systemによって加圧された窒素が、プロフュージョン溶液を溶液リザーバーからプロフュージョンチューブ経由でプロフュージョンペンシルおよびチップへと押し出します。各プロフュージョン溶液ストリームの流れは、1つのリザーバーバルブと1つの電子バルブによって制御されます。本プロトコルでは、リザーバーの1つは加圧されず、廃棄物回収容器および圧力放出機構として機能します。実験前に、カルシウムまたはマグネシウムの濃度が異なる灌流液を調製しておきます。灌流液をリザーバーに加え、それぞれのカルシウムまたはマグネシウムの濃度を示すラベルを貼ります。まず灌流システムをセットアップするために、チューブを灌流ペンシルに接続します。次に、電子バルブコントローラーの電源を入れ、電子バルブを開いて、チューブと灌流ペンシルに詰まりや気泡がないこと

patch-clamp-perfusion-techniques-for-studying-ion-channels-expressed

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Biology

生物学

これは、アフリカツメガエル卵母細胞からパッチクランプ記録の紹介を目的としています。それは、卵黄膜の除去、gigaohmシール（gigaseal）の形成、および外部のアウトトポロジへのパッチの任意の変換をカバーしています。...

アフリカツメガエルの卵母細胞で発現イオンチャネルのパッチクランプ記録

我々は、イオンチャンネルの機能上の単一の点変異の効果を研究する方法を説明します。...

異種哺乳動物細胞で発現したイオンチャネルの変異導入と機能解析

発現とHEK - 293T細胞における組換え電位依存性イオンチャネルの電気生理学的記録用に最適化されたトランスフェクション戦略

私たちは、Xenopus卵子における酵素の不均一発現と、原子吸光分光光度法による個々の細胞へのRb+またはLi+の取り込みを測定することにより、K+逆輸送P型ATPaseの活性を定量化する方法を説明しています。この方法は、放射性同位元素フラックス実験に代わる高感度で安全な方法であり、複雑な速度論的研究を容易にします。...

のNa、KとH、K-ATPaseのインによって陽イオン輸送を測定する<em&gt;アフリカツメガエル</em原子吸光法による&gt;卵母：アイソトープアッセイの代替

TRPV4のを研究するためによく使用されるメソッドを補完するために、二つの方法が記載されている：その機械的感受性は、低浸透チャレンジの際に遺伝子組換え酵母中のCa 2 +-エクオリン発光測定により研究することができる。また、オンセルまたは切除されたモードでクランプ全細胞の2電極電圧クランプまたはパッチによりアフリカツメガエル卵母細胞に注入TRPV4-RNAで検査することができる。...

酵母発光測定とアフリカツメガエル卵母細胞電気生理学的検定試験

カットオープンワセリンギャップアプローチは、高速チャネル動態の高解像度で、アフリカツメガエル卵母細胞で発現電位依存性イオンチャネルからのイオンおよびゲート電流の低ノイズの録音を得るために使用される。マイナーな変更を加えて、電圧クランプ蛍光法は、カットオープン卵母プロトコルに結合することができる。...

ザ·<em&gt;アフリカツメガエル</em蛍光測定で&gt;卵母細胞のカットオープンワセリンギャップ電圧クランプ法

ここで説明するには、セルに接続されたパッチクランプ技術を用いて1イオンチャネルから現在の記録の長いストレッチを取得するための手順です。この方法は、リアルタイムで、観察するための生体信号の基礎となる開閉チャネルコンフォメーションのパターンを可能にする。これらのデータは、邪魔されずに生体膜におけるチャネルのプロパティをお知らせ。...

一チャネルセル付パッチクランプ法

単一卵胞の単離、細胞質RNAマイクロインジェクション、周囲の細胞層の除去、およびXenopus卵子におけるタンパク質発現のための最適化された手順が説明されています。さらに、リガンド依存性イオンチャネルを用いた電気生理学的実験における迅速な溶液変化のための簡単な方法が提示されます。...

アフリカツメガエル卵母細胞：マイクロインジェクションのために最適化された方法、濾胞細胞層の除去、および電気生理学的実験における高速解法の変更

この記事では、マレイミド色素の代わりに蛍光非天然アミノ酸（fUAA）を用いて、イオンチャネルの構造的再配列を調べる従来の電圧クランプ蛍光光度法（VCF）の強化について説明します。この手順には、 アフリカツメガエル卵母細胞DNA注入、RNA / fUAA共注入および同時電流および蛍光測定が含まれる。...

電圧クランプ<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;蛍光性の非天然アミノ酸を用いた卵母細胞

これは、ガラスマイクロピペットの形状を変更するためのガイドです。特に、熱や空気圧を使用してテーパーが低いピペットの抵抗につながる、先端の開口部を増やすことなく広げている。これは、小さな細胞の低ノイズ記録を取得することが重要ですが、多くのアプリケーションで有用です。...

改善されたパッチクランプ記録のための圧力 - 研磨ピペット

学ぶパッチクランプと灌流システムを用いたBKチャネル活性化記録法。Xenopus卵母細胞でイオンチャネルの電気生理学的特性を解析し、神経科学における分子メカニズムの理解に貢献します。

イオンチャネル研究のためのパッチクランプおよび灌流のテクニックで表さアフリカツメガエル卵母細胞

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