Name: 監視形成との抗真菌薬感受性試験のための96ウェルマイクロタイタープレートベースの方法カンジダアルビカンスバイオフィルム (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: 学ぶCandida albicansバイオフィルム形成と抗真菌薬感受性試験の96ウェルマイクロタイタープレート法。簡便で再現性の高いこの手法は、代謝活性測定により最小発育阻止濃度を評価し、真菌感染症治療研究に有用です。

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実験室でのバイオフィルム関連の作業は、助成を受けた歯科＆頭蓋顔面研究とアレルギー感染症（JLL - Rに。）国立研究所の国立研究所からR21DE017294とR21AI080930の番号が付けられています。内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしもNIDCR、NIAIDまたはNIHの公式見解を表すものではありません。

1。 C.の準備アルビカンス C. albicansはリスクグループ1/BSL1微生物である。常にこの微生物との仕事のために良好な無菌/滅菌技術を使用し、有害物質の適切な処分のための制度的な手順に従うことを覚えている。 <ol><li> C.の一晩培養を準備YPD（酵母ペプトンデキストロース）Cの単一コロニーを接種することにより液体培地でアルビカンス YPD 25mLのにアルビカンス 。 </li><li> 30℃で一晩オービタルシェーカー（約180回転）で培養液を、。ほとんどのC.カンジダ菌は、これらの条件下で酵母細胞として成長します。 </li><li>一晩培養する（約3,000 rpmで、5〜10分）遠心し、滅菌PBSで細胞を2回洗浄し、pHを7.0と予め温めておいた〜165 mMのmorpholinepropanesulfonic酸で緩衝RPMI 1640培地の約20〜25 mLで、最終的なペレットを再懸濁します。 37℃は（この培地上で、今から単に"RPMI 1640"と呼ばれます）。 </li><li>血球計を用いて細胞を数える。カウントの後、RPMI 1640で1.0 × 10 6細胞/ mlの最終濃度で細胞の懸濁液を準備。 注：細胞が凝集する傾向があるので、それは洗浄液の間に、ピペッティングの前に激しくボルテックスすることが重要です。 </li></ol> 2。バイオフィルムの形成のために96ウェルマイクロタイタープレートのセットアップ<ol><li>マルチチャンネルピ ​​ペットを使用すると、Cの100μLを加える96ウェルマイクロタイタープレート（- s）の選択したウェルにアルビカンスサスペンション 。これらは、ネガティブコントロールとして機能するように、カラム12のウェルに細胞を追加しないでください。 </li><li>元のふたが付いている全体のマイクロタイタープレート、パラフィルムでシール、37℃で24時間インキュベーターでインキュベート内部の場所℃をカバーインキュベーションの長さは、特定の実験計画に適合させることができます。例えば、それは24の期間にわたってバイオフィルム形成の動態を調べることができます - 複数のプレートを播種し、異なる時点で、各プレートを処理することによって、48時間（すなわち、2、4、8、12、24および48時間） </li><li>バイオフィルム形成後に、マルチチャンネルピペットを使用すると、慎重に各ウェルに形成されたバイオフィルムに触れると混乱しないように培地を吸引除去する。 </li><li>滅菌PBS（ウエル当たり200μL）でマルチチャンネルピペットの洗浄プレートを3回使用する。また、自動化されたマイクロタイタープレートウォッシャーを使用してください。洗浄の間、特に最​​後の洗浄後、任意の残留PBSを除去するためにペーパータオルでブロッティングで逆さの位置にプレートを排出。この時点でウェルの底に形成されたバイオフィルムは、さらに肉眼ではっきり見えるはずですし、また、倒立顕微鏡（図1）を用いて可視化することができます。バイオフィルムは、現在抗真菌薬感受性試験のアッセイのために処理される準備が整いました。 （実験の主な目的はバイオフィルム形成の程度を評価する場合、プレートは比色法を用いて処理される準備が整いました。このためには、XTT /メナジオン試薬は（以下のステップ3を参照）、結果色を追加したりすることができます）マイクロタイタープレートリーダーを用いて読み取る。 </li></ol> 3。バイオフィルムの抗真菌感受性試験<ol><li>ストック溶液や粉末から、テストする各抗真菌のRPMI 1640培地で希釈標準溶液を準備する。典型的な高濃度では、フルコナゾールは1,024μg/ mLとし、アムホテリシンBとカスポファンギン両方のための16μg/ mLとなります。他の濃度が異なるエージェントのために使用することができます。 </li><li>マルチチャンネルピペットを使用して、真菌バイオフィルムを含む各マイクロタイタープレートの1列目の対応するウェルに抗真菌の高い作業濃度200μLを加える。 </li><li> 10〜2列目に各ウェルにRPMI 1640 100μLを加える。 </li><li> 11列のウェルにRPMI 1640 100μLを加える。 </li><li>列1のウエルからの抗真菌剤100μLを削除し、列2に隣接する井戸（既に培地100μLを含む）に追加します。 </li><li>シリアル倍希釈を行うためにピペッティングでよく内容を混ぜる、とヒントを削除する。 </li><li>混合後の塔10の井戸からの最後の100μLボリュームが破棄された後、列10の井戸、まで右に移動繰り返します。この方法では、興味のあるエージェントの倍希釈系列（- S）が作成されていますが、ほとんどの列10の井戸の集中以上に列1の井戸に集中してから。列11の比類のないバイオフィルムは、ポジティブコントロールとして機能します、とカラム12内の空井戸は、ネガティブコントロールとして機能します。 </li><li> 37彼らの蓋、24 -48時間パラフィルムとインキュベートとシールでプレートをカバー℃に</li><li>潜伏期間の後に前のステップ2.4​​（3 × PBS）のようにプレートを洗浄する。 </li><li>マルチチャンネルピペットを使用すると、うまく背景Xの測定のための事前洗浄されたバイオフィルムだけでなく、ネガティブコントロールのウェルにを含む各XTT /メナジオン溶液100μLを加えるTT -比色レベル。 <ol><li> XTTは、0.22μmの孔サイズのフィルターを用いて濾過滅菌する必要がある滅菌乳酸リンゲル液、PBSまたは生理食塩水、では0.5g / Lでの飽和溶液として調製される。 XTT溶液は光に敏感ですので、準備中にアルミホイルで覆われるべきである。 -70一度作成すると、フィルター滅菌、10 mLの作業量に分注し、および店舗℃にアルミ箔を使用して光からチューブを保護します。使用直前に特定の実験の必要に応じて、多くの管としてだけ解凍。 </li><li>メナジオンは、100％アセトン、少量（約50μL）に分注し、-70℃で保存中の10mMストック溶液として調製され融解XTT溶液10mlを含むチューブにメナジオンのストック溶液の1μLを添加することにより、使用直前にXTT /メナジオン溶液を調製します。 </li></ol></li><li> 37℃2時間暗所でアルミホイルとインキュベートでプレートをカバー℃に</li><li>プレートを発見。マルチチャンネルピペットを使用すると、新しいマイクロタイタープレートの対応するウェルに、結果色の各ウェルからの上清と伝達の80μLを削除します。 </li><li> 490nmでマイクロタイタープレートリーダーでプレート（- s）をお読みください。 </li><li>比色測定値の50％または80％減少は抗真菌薬の非存在下で形成された制御バイオフィルムと比較して（この場合は11列の値で検出されるときの抗真菌濃度である固着性の最小発育阻止濃度SMIC50とSMIC80を、計算する、）のみXTTを含むカラム12の井戸からネガティブコントロールから値を減算することも忘れないでください。 SMIC結果を表として提示することができます（複数の抗真菌剤に対するすなわち、複数の分離株）またはその代わり、各抗真菌に対して分離、個々の真菌の結果は、阻害率に対する抗真菌濃度をプロットしてグラフとして表示することができます。 </li></ol> 例：ネガティブコントロールの値を減算した後、カラム11に形成された制御のバイオフィルムの平均ODは1.32です。 SMIC50は1.32 X 100分の50 = 0.66よりも小さいこのケースでは、比色測定値の&gt; 50％の削減につながる最も低い抗真菌濃度である。同様に、SMIC80は1.32 X 100分の20 = 0.264よりも小さいこのケースで比色測定値の&gt; 80％削減、につながる最も低い抗真菌濃度である。 4。代表的な結果図1は、Cの顕微鏡写真を示しています。 albicansのバイオフィルムは、倒立顕微鏡を使用して撮影した96ウェルマイクロタイタープレートのウェルの底面上に形成。図2は、Cの 11バイオフィルムのそれぞれについてXTT -比色測定値（OD 490の値）を示しています。 albicansの野生型株は、同じ96ウェルマイクロタイタープレートの8つの異なる行のそれぞれに形成。図3は、C.に対して、異なる濃度のアムホテリシンBの活性を示しています。 albicansのバイオフィルム、矢印はSMIC50とSMIC80値を示している。 <img src="/files/ftp_upload/2287/2287fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1（）パネルC.の倒立顕微鏡に取り付けられたカメラで撮影した顕微鏡写真を示しています。 albicansのバイオフィルムは、RPMI培地、PBSで、その後の洗浄液の吸引後にウェルの底部に形成された。典型的なCの（B）顕微鏡写真albicansのバイオフィルムは、走査型電子顕微鏡を用いて視覚化。バーは、AとBそれぞれのパネルでは100μmと10μmのです。 <img src="/files/ftp_upload/2287/2287fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2。複数の等価なCの形成96ウェルマイクロタイタープレート中のカンジダバイオフィルム。C.によって形成されたバイオフィルムのXTT還元アッセイから比色測定値（OD 490の値）マイクロタイタープレートのウェルにalbicansは野生型。値が同じ96ウェルマイクロタイタープレートの8つの異なる行のそれぞれに形成された11の独立したバイオフィルムのためのものです。別の行の結果は、一方向の分散分析と分散の均一性とボンフェローニの多重比較、ポストテストのためのバートレットの検定を用いて比較した。 （P&gt; 0.05）お互いに行のすべてのペアを比較する際には統計的に有意な差は認められなかった。 <img src="/files/ftp_upload/2287/2287fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3。 C.に対して抗真菌薬感受性試験の典型的な結果 C.のバイオフィルムに対して異なるアムホテリシンBの濃度の効果の典型的な結果を描いたalbicansのバイオフィルム。グラフalbicansの野生型株。値は、井戸を制御するために比較してXTT還元アッセイの平均パーセント比色測定値として表現さ​​れています。 SMIC50とSMIC80値は矢印で示されている。

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</ol>

JLL - Rは、抗真菌剤を開発しているMicrobeHTSテクノロジーズ、（株）の株式を所有している。 MicrobeHTS Technologies社は、これらの研究のための財政的支援を提供していません。

ここでは、XTTを使ってバイオフィルム内の細胞の代謝活性を測定する比色法と相まって、カンジダバイオフィルムの形成のための、シンプル、迅速、経済的かつ再現性の高い96ウェルマイクロタイタープレートのモデルを説明します。バイオフィルム形成のためのこの96ウェルマイクロタイタープレートのモデルは、もともとC用に開発されたアルビカンスが、他のカンジダ属に使用することができます。と簡単に他の真菌に適応。メソッドは、複数のパラメータとバイオフィルム形成に影響を及ぼす要因を調べるために、複数の菌の分離株および/または変異株のバイオフィルム形成能を推定するために使用することができます。しかし、おそらく最も重要なことは、この方法では、バイオフィルム内の細胞の抗真菌薬感受性試験の決定のための非常に便利です。

<table><tbody><tr><td>サブロー・デキストロース寒天培地</td><td>BD Biosciences</td><td>211584</td><td>真菌分離株の新鮮な継代用プレートの調製に使用</td></tr><tr><td>YPD：酵母ペプトン・デキストロース培地</td><td>US Biological</td><td>Y2076</td><td>オーバーナイト液体培養用培地</td></tr><tr><td>RPMI-1640（炭酸水素ナトリウム不含、L-グルタミン添加）</td><td>Cellgro</td><td>50-020-PB</td><td>バイオフィルム形成用液体培地</td></tr><tr><td>モルホリノプロパンスルホン酸 (MOPS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP308</td><td>RPMI 1640の緩衝に使用</td></tr><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水, PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td>洗浄用緩衝液</td></tr><tr><td>XTTナトリウム塩</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X4251</td><td>調製手順は上述を参照</td></tr><tr><td>リンゲル&amp;rsquo;s乳酸液</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC0409-7953-09</td><td>XTT溶液の調製に使用</td></tr><tr><td>メナジオン</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5625</td><td>注意：皮膚接触、吸入、または経口摂取による危険性あり</td></tr><tr><td>シャーレ</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>15 ml 円錐形遠心チューブ</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>50 ml 円錐形遠心チューブ</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>96ウェルマイクロタイタープレート：ポリスチレン、フラットボトム、組織培養処理済み</td><td>Corning</td><td>3595</td><td></td></tr><tr><td>マルチチャンネルピペットおよびチップ</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>メーカー不問</td><td></td><td></td></tr><tr><td>マイクロタイタープレートリーダー</td><td>メーカー不問</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

監視形成との抗真菌薬感受性試験のための96ウェルマイクロタイタープレートベースの方法カンジダアルビカンスバイオフィルム

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

カンジダアルビカンスは、標的の患者とカンジダ症の拡大人口の真菌感染症の最も多い原因は、現在米国の病院で3番目に一般的な感染症である残ります。カンジダ症の異なる症状が両方のホストの組織および/または医療機器（すなわちカテーテル）で、バイオフィルム形成に関連付けられています。バイオフィルム内の細胞が宿主の免疫応答からと抗真菌薬の作用から保護されているバイオフィルム形成は、負の臨床的意義を運びます。我々は、Cの形成のための、シンプルで高速かつ堅牢なのin vitroモデルを開発したまた、バイオフィルム抗真菌薬感受性試験に使用できる96ウェルマイクロタイタープレートを、使用してカンジダバイオフィルム。このアッセイの読み出しは、代謝的に活性な菌のバイオフィルム細胞によるXTTの還元（テトラゾリウム塩）に基づいて、比色です。典型的な実験は、抗真菌薬感受性試験のための追加の24時間で、バイオフィルム形成のための約24時間かかります。そのシンプルさと一般に入手可能な実験材料および機器の使用から、この手法は、バイオフィルムの研究をdemocratizesと真菌バイオフィルムの抗真菌薬感受性試験の標準化に向けた重要な一歩を表しています。

我々はの形成のための、シンプルで迅速かつ堅牢な方法を説明します<em&gt;カンジダアルビカンス</emバイオフィルム内の細胞の抗真菌薬感受性試験では96ウェルマイクロタイタープレートと、そのユーティリティを使用して&gt;バイオフィルム。

*Candida albicans*は、免疫不全患者の増加に伴い、依然として真菌感染症の最も頻度の高い原因となっており、カンジダ症は現在、3番目に多い...

本手順の全体的な目的は、Candida albicansのバイオフィルムを形成し、抗真菌薬に対する感受性を検討することである。まず、96ウェルマイクロタイタープレートのウェル内でこれらの真菌バイオフィルムを形成させ、次に、あらかじめ形成されたバイオフィルムに抗真菌薬を添加し、その後24〜48時間インキュベートすることでこれを達成する。バイオフィルム内の細胞の代謝活性を測定する比色法を用いて、これらの抗真菌剤の活性を測定し、バイオフィルムに対する抗真菌剤の最小発育阻止濃度を決定します。最終的に、比色読み取りと組み合わせた、シンプルで簡便な96ウェルマイクロタイタープレートベースの手法を通じて、バイオフィルム形成能および抗真菌剤感受性試験の結果を得ることができます。この手法の主な利点は、簡便で比較的安価であり、再現性が高く、複数の同等なバイオフィルムの形成が可能であることです。さらに、本手法は多くの研究施設や臨床検査室で一般的に利用可能な96ウェルプラットフォーム技術と互換性があります。この技術の応用範囲はイヌ科動物の治療にまで及びます。というのも、これらの感染症はバイオフィルムの形成を伴うことが非常に多いためです。適切な微生物学的取り扱い技術を用いて、SAUデキストロース銅プレート上のalbicansの新鮮な継代培養物から細胞をループ一杯分採取し、25 mLの酵母ペプトンデキストロースブロスを含む125 mLエルレンマイヤーフラスコに接種します。培養物を180 RPM、30 °Cに設定したオービタルシェーカーに設置し、一晩インキュベートします。一晩のインキュベーション後、酵母培養液を50 mLコニカルチューブに注ぎ、3000 RPMで5〜10分間遠心分離します。上澄み液を捨て、ボルテックスで攪拌します。細胞を分散させるため、ペレットを激しく撹拌します。次に、滅菌PBSを加えて洗浄し、再度培養物を遠心分離します。この洗浄工程をもう一度繰り返し、その後、細胞を再懸濁します。pH 7.0に緩衝されたRPMI 1640培地約20 mLを用います。165 mMのMOPS溶液を使用し、37°Cに予熱したこの懸濁液から、標準的な血球計数器と明視野顕微鏡を用いて100倍希釈液を調製します。細胞数を計測してください。次に、温めた緩衝RPMI 1640を用いて、1×10⁶ cells/mLの最終細胞懸濁液を調製します。マルチチャンネルピペットを使用し、100 µLの細胞懸濁液を滅菌済みの96ウェル平底マイクロタイタープレートの選択したウェルに分注します。第12列のウェルは陰性対照として使用するため、空のままにしておきます。プレートをパラフィルムで覆って密閉した後、37 °Cで24時間インキュベートし、バイオフィルムを形成させます。インキュベーション後、各ウェルから培地を静かに吸引して廃棄します。この際、底面に形成されたバイオフィルムを乱さないように注意してください。各ウェルにPBSを200 µL加えて洗浄し、プレートを慎重に反転させてペーパータオルの山で吸い取ることで排液します。この洗浄ステップを3回繰り返します。この時点で、バイオフィルムを目視で検出でき、倒立顕微鏡やSEMを用いて可視化することが可能です。バイオフィルムが菌糸と酵母細胞の絡み合った混合物で構成されていることが分かります。バイオフィルムの形成が確認されたら、緩衝RPMI 1640培地を用いて抗真菌薬の試験を開始できます。まず、試験に使用する抗真菌薬の高濃度作業溶液を調製します。一般的な高濃度は、フルコナゾールで1024 micrograms per milliliter、アムホテリシンBおよびカスポファンギンで16 micrograms per milliliterです。次に、1列目のウェルに200 µLの抗真菌剤溶液を、2列目から11列目のウェルに100 µLの緩衝RPMI 1640培地を加えます。1列目のウェルから2列目のウェルへ、高濃度の抗真菌剤溶液を100 µLずつ移送し、連続2倍希釈系列を作成します。緩やかにピペッティングして混合した後、2列目のウェルから3列目のウェルへ100 µLずつ分注し、同様に10列目まで繰り返します。11列目はポジティブコントロールとして使用するため、抗真菌溶液は添加せず、10列目のウェルから最後の100 µLを廃棄します。12列目を除くすべてのウェルを対象とします。最終容量が100 µLになるはずです。プレートにカバーをかけ、パラフィルムで密閉し、37 °Cで24〜48時間インキュベートして抗真菌剤を作用させます。インキュベーション後、前述した通りにPBSでプレートを3回洗浄し、陰性対照ウェルを含むすべてのウェルにXTT反応溶液を1ウェルあたり100 µLずつ加えます。12列目に添加します。プレートに蓋をし、遮光のためアルミホイルで包み、37 °Cで2時間インキュベートします。インキュベート後、発色させるためにプレートのホイルを外します。代謝的に活性な細胞によって処理されると、最初は透明だったXTT溶液がオレンジ色に変化します。着色した上清を80 µL、新しい平底マイクロタイタープレートに移します。波長490 nmに設定した比色マイクロタイタープレートリーダーを使用して、ここに示すようにプレートを読み取ります。抗真菌剤がない場合、比色測定値は未処理の状態となります。SEA申請者の異なる行のバイオフィルムは同等です。まず、テストした抗真菌化合物の効果を評価するために、列12の陰性対照ウェルから得られた平均背景値を他のすべての値から差し引きます。次に、行11の陽性対照を用いて抑制率（%）を算出します。比色読み取り値において50%または80%の減少が検出される最大値としての抗真菌剤濃度は、Cecil最小発育阻止濃度として知られています。これらの値は通常、化合物の効力を示す参照指標として用いられます。この簡便なハイスループット法を用いることで、真菌バイオフィルムをin vitroで24時間以内に形成させることができ、初期開発後の選択的な化合物について抗真菌活性のスクリーニングを行うことが可能です。この手法は、医学真菌学分野の研究者がバイオフィルム形成を探索し、抗真菌剤の活性を検討するための道を切り拓きました。さらに、バイオフィルム内の細胞については以下の通りです。

a-96-well-microtiter-plate-based-method-for-monitoring-formation

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

アッセイは、細菌および真菌の早期のバイオフィルム形成を測定する迅速な手段を説明します。このメソッドは、微生物のバイオフィルム形成のための基層としてのマイクロタイタープレートを使用し、バイオフィルムは、クリスタルバイオレットの菌株を用いて可視化です。アッセイは、どちらかの初期のバイオフィルム形成のための定性的または定量的なアッセイを提供する。...

マイクロタイター皿のバイオフィルム形成アッセイ

我々は3次元ナノバイオフィルムから成る高密度マイクロアレイプラットフォームを開発しました...

ハイスループット抗真菌薬スクリーニングのためのカンジダバイオチップ（ カルシウム BChip）

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抗真菌化合物のスクリーニングのためのIn vitroブロス微量希釈アッセイ

このビデオは、真菌バイオフィルムに対する抗体の影響を研究するためのin...

Candida tropicalis Biofilmに対する抗体の影響を評価するためのIn vitroアッセイ

マウス皮下モデルにおけるカンジダ・アルビカンスのバイオフィルム開発の実験的手順を提示します。真菌バイオフィルムは、コロニー形成単位の数を決定し、生成される光の量が生細胞の数に対応する非侵襲的な生物発光イメージングによって定量化されました。...

生物発光イメージングが続くマウス皮下モデルにおける医学関連の異物にカンジダ·アルビカンスバイオフィルム発展

このプロトコルでは、ホストの生理学的な条件の下でカンジダ菌のバイオ...

自動マイクロ流体デバイスを使用してカンジダ菌バイオ フィルム形成の可視化

抗真菌化合物をスクリーニングするための簡単と適応のスープ微量液体希釈法。...

スープ希釈の in Vitroスクリーニング: 新しい抗真菌化合物を検出するための簡単かつ高速メソッド

ここでは、余分なフラックス...

カンジダを使用してリアルタイム細胞フラックス解析のバイオ エネルギー調査

カンジダ・アルビカンスのバイオフィルムの内部特徴を見て定量化するために、屈折率マッチングによって明らかにされた固定無傷の標本を用意します。そして、光学断面顕微鏡を用いれば、バイオフィルムの厚みを完全にもった3次元画像データを得ることができる。...

カンディダ・アルビカンスバイオフィルムの明確化とイメージング

カンジダ・アルビカンスに対するペプチドの抗真菌活性の定量化

C. tropicalisによって形成されるバイオフィルムに対する抗体の影響を研究するために、2,3-ビス(2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルホフェニル)-5-カルボキシアニリド-2H-テトラゾリウム(XTT)還元アッセイを使用した96ウェルマイクロタイタープレートベースのプロトコルが本明細書に記載されています。このin...

カンジダ・トロピカリス・バイオフィルムに対する抗体の効果を評価するための可溶性テトラゾリウムベースの還元アッセイ

学ぶCandida albicansバイオフィルム形成と抗真菌薬感受性試験の96ウェルマイクロタイタープレート法。簡便で再現性の高いこの手法は、代謝活性測定により最小発育阻止濃度を評価し、真菌感染症治療研究に有用です。

監視形成との抗真菌薬感受性試験のための96ウェルマイクロタイタープレートベースの方法カンジダアルビカンスバイオフィルム

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