Name: E18ラット脳の器官型スライス培養 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-11T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 48 s
Description: 学ぶE18ラット脳の器官型スライス培養法。脳の摘出、低融点アガロース包埋、バイブロトームによる切片、培養システムでの維持を含む完全なプロトコル。神経発生や再生医療研究に応用可能です。

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e18ラット脳の器官型スライス培養

Organotypic Slice Culture of E18 Rat Brains

胚性齧歯類の脳からの器官切片培養が広く脳の発達を研究するために使用されています。生体内のシステムには、メリットはしばしばありますが、器官型切片培養は1つが、生体内で現在実行できない操作の数を実行することができます。日付に、organtotypic胚脳切片培養物は神経節emanancesの遺伝子の発現（子宮内エレクトロポレーションによりターゲットが困難な地域）を操作するだけでなく、薬理学のために、タイムラプス顕微鏡を用いて個々のセルに従うために使用されているの研究。このビデオプロトコルでは、ラット胎生18日胚から器官切片培養を行う方法を示します。プロトコルは、胚を解剖し、低融点アガロースで氷の上にそれらを埋め込む、ビブラトームに埋め込まれた頭脳をスライシング、そして最終的に培養皿にフィルター上にスライスをめっき伴います。このプロトコルは、ラットとマウスの両方の異なる胚の年齢から器官切片培養を作るために現在の形にも適用可能です。

E18ラット脳の器官型スライス培養

齧歯類胚脳のオルガノタイピング・スライス培養は、脳の発達を研究するために広く用いられています。in vivoシステムには利点が多いものの、...

私はローラ・エリアスです。Arnold K. Steinの研究室に所属する神経科学の大学院生です。私たちはここUCSFの再生医学研究所に身を置いています。本日は、E 18ラット脳のオルガノティピック・スライス培養の方法について説明します。この手順では、脳を摘出し、低融点アガロースに包埋した後、バイオームでスライスしてコロナ切片を作成し、それらをスライス培養システムに配置します。このスライス培養手順で使用する重要な器具と試薬がいくつかあります。脳の摘出には解剖顕微鏡が必要です。また、VT 1000 Sビブラトームのような装置を使用していますが、これは切片を作成するのに優れたシステムです。接着剤の選択も重要です。私たちは脳を非常に強力に固定できるこのロックタイプの接着剤を使用しています。不適切な種類の接着剤を使用すると、切断時に脳が剥がれてしまうことがあり、それが問題となるためです。また、スライスを培養する際にプレートに載せるためのミリセルフィルターを使用しますが、これもプロセスにおける重要な一部です。さて、スライスの培養プロセスを開始する前に、いくつか済ませておくべき手順があります。まず、ACSFを調製する必要があります。ACSFの調製が終わったら、これを氷上に置いて冷却し、同時にカーボゲンでバブリングを開始してください。また、4% agarose も作っておく必要があります。そのためには、低融点 agarose を CSF に溶解させ、電子レンジで加熱した後、脳を埋め込むまで 50 °C で保持します。あわせてスライス培養培地も作製してください。スライス培養培地を作製した後は、最後にスライスを投入した際に適切な温度になっているよう、37 °C で予熱しておきます。これで、道具を揃えてスライス培養プロセスを開始する準備が整ったことになります。それでは、ラット胚18日目の脳からスライス培養を作成します。まず、足指へのピンチテストを行い、母体が完全に麻酔状態にあることを確認します。こちらの手本では、足を絞ったときにラットがいまだにわずかな反射を示し、後肢を少し引き込めています。そのため、さらに時間を置くか、再麻酔を行う必要があります。ここでは反応が見られませんので、このまま開腹して胚を回収します。皮膚を引っ張り上げ、きれいな切開ができるようにします。ここにある胚をいくつか取り出し、切り出します。2つの胚の間を切り込み、そのまま沿って切断します。ここで、胎盤のすぐ隣を切開して、胚を取り出し、胎盤から切り離します。次に、胚を冷えたA CSFに移動させ、嚢の残りの部分を取り除きます。はい、ここで切り離します。胚の準備が整いましたので、脳の切片を作成します。それでは、胚からハサミで頭部を切り離します。これで、脳を摘出する準備ができました。まず頭部を固定する必要があります。

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生後神経発生の研究のための器官型スライス培養

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リナル皮質-海馬の組織性スライス培養におけるてんかん発生のモデル

学ぶE18ラット脳の器官型スライス培養法。脳の摘出、低融点アガロース包埋、バイブロトームによる切片、培養システムでの維持を含む完全なプロトコル。神経発生や再生医療研究に応用可能です。

E18ラット脳の器官型スライス培養

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