Name: E16ラット胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 19 min 4 s
Description: 学ぶE16ラット胚の子宮内脳室内注入とエレクトロポレーションの手法。遺伝子導入効率を高め、発生神経科学の研究に応用可能です。

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e16ラット胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E16 Rat Embryos

- 子宮内で胎児ラットの新皮質の生体内注射とエレクトロポレーションは、側脳室の壁の内側を覆う個々の前駆細胞を操作するための強力なツールが用意されています。この手法は、今や広く過剰発現や遺伝子をノックダウンし、細胞増殖、遊走、分化への影響を観察することによってcorticogenesisに関与するプロセスを研究するために使用されます。伝統的なノックアウト戦略と比較して、子宮内エレクトロポレーションは、特定の時間ウィンドウの間に細胞の集団を操作する迅速な手段を提供します。このビデオプロトコルでは、我々は、手術のためにラットを準備laporatomyを通して子宮角を露出、胚の側脳室内にDNAを注入し、横方向の壁を裏打ちする前駆細胞にDNAをelectroporating、および動物の世話のために実験方法の概要を説明後手術。当研究室ではこのビデオで示すようにしかしそれは最も一般的にE16で行われ、E15 - E21ラットの手術のためにこのプロトコルを使用します。

E16ラット胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

ラット胚の新生皮質における子宮内in-vivo注入および電気穿孔法は、個々の前駆細胞を操作するための強力なツールとなります。

こんにちは、William Tiです。Arnold Creek Stein Labから参りました。本日は、私とチームのメンバーで、胎生16日目のラット胚への子宮内注入法について解説します。こんにちは、Laura Eliasです。本日は、本日行う脳室間注入およびエレクトロポレーションのためのマイクロインジェクションピペットの準備と充填方法について説明します。また、E16ラット胚における脳室間注入とエレクトロポレーションの実施方法についても解説します。ラットは遺伝的操作が容易ではない系であるため、ラットにおける子宮内注入およびエレクトロポレーションは特に有用です。さて、この処置では多くの手術器具を使用します。フリーア、および2種類の鑷子（せっし）を使用します。1方は鋸歯付きで、もう1方は先端に小さな歯があるものです。また、止血鉗子も使用します。こちらはハサミで、次にこれら2つのステープラーを使用します。大きい方はラットに使用するものです。小さい方はマウスに使用するもので、サイズ7のステープルを使用します。もう一方はサイズ9のステープルを使用し、どちらもスプリングロード式です。手術を補助するためにここで使用している器具の中には、ダブルヘッドを備えたシンプルな光ファイバー光源のものがあります。また、温水を循環させて温度を維持するための加熱パッドを使用しています。作業面には、BTX社製のエレクトロポレーションシステムを使用しています。胚の大きさに合わせて、数種類の異なるサイズのパドルを使用します。青色の側が陽極側です。それでは、次に注入用ピペットの斜面（ベベル）を作成します。DNAをロードできる十分な開口部があり、かつ注入時に胚を傷つけないよう非常に鋭利であることが極めて重要です。注入時に胚を傷つけてしまうと、死亡率が大幅に高まってしまうため、これは避ける必要があります。この工程は、本手術において非常に重要なプロセスです。まず、ここで回転している面取り砥石に水をかけます。次に、こちらにあるスティックを使用します。次に、今引き出したピペットをテープでこのスティックに固定します。そして、マイクロマニピュレーターを用いてピペットを保持し、ここでベベル加工（斜面形成）ができるようにします。これを配置し、顕微鏡を使用してピペットの先端を視認しながら作業を行います。そして、わずかな圧力がかかるように、先ほどのベベルの上に直接水中に配置します。チップがここにあるストーンに押し付けられているのがわかります。そのまま少なくとも15分間、ベベル加工を行います。私は、例えば1時間ほどそのままにしておくこともあります。そうすると、非常に鋭くなりますが、ピペットの面取りにどのくらいの時間をかけるかは、間違いなく人によって異なります。さて、こちらをご覧ください。上にあるのは、引き出されたままで、

in-utero-intraventricular-injection-electroporation-e16-rat

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E15マウス胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

子宮内エレクトロポレーションでは、生体内で神経前駆細胞をトランスフェクションするための貴重な方法です。電極の配置とエレクトロの発達タイムポイントに応じて、皮質細胞の特定のサブセットを対象とすることができます。標的細胞は、その後、in vivoまたは遺伝的改変の影響についてin...

子宮内エレクトロポレーションは、皮質ニューロンのサブセットで、遺伝子機能の研究のために初代神経培養した

体性幹細胞の増殖を制御することは、彼らの研​​究と治療における使用を妨げる大きな要因となっている。ここでは、一時的にマウス脳で生成されたニューロンの数を増やすために使用することができます開発と成人期における神経幹細胞の膨張を制御するためのシステムを説明します。...

によって胚および成体神経幹細胞の拡大<em&gt;子宮内</em&gt;エレクトロポレーションまたはウイルス定位注射

レンチウイルスベクターを用いたラット受精卵の形質導入

このビデオは、マウス胚の小脳ニューロン細胞にプラスミドDNAを子宮内エレクトロポレーションを使用して送達する方法を示しています。この方法は、正常な脳の発達における遺伝子のin...

子宮内エレクトロポレーションに基づく遺伝子導入:マウス胚の胚性小脳細胞にプラスミドDNAを注入する技術

遺伝子は、成体動物における行動や神経病のその後の研究のために、神経細胞の接続性における迅速かつターゲットの変更を可能にするために、E16での子宮内電気穿孔（IUE） ビア皮質またはラットの海馬の開発中に操作することができます。 IUE成功を制御するためのインビボイメージングにおける出生後の共トランスフェクトし、ルシフェラーゼの生物発光を活性化することによって行われる。...

局所トランスジェニックラットの発生により<em&gt;子宮内</em&gt;エレクトロポレーションおよび<em&gt;インビボ</em&gt;生物発光スクリーニング

このプロトコルは、子宮内エレクトロポレーションを介してC57BL/6中枢神経系の異なる領域を特異的にトランスフェクションする方法を詳細に説明しています。このプロトコルには、皮質、海馬、視床、視床下部、外側中隔核、線条体に発達する領域のトランスフェクションに関する詳細な指示が含まれています。...

Cortex-、Hippocampus-、Thalamus-、Hypothalamus-、横中隔Nucleus-と線条体固有<em&gt;子宮内</em&gt; C57BL / 6マウスでのエレクトロポレーション

脳室周囲結節性異 (PNH) は、成人期の皮質発達 (MCD) の奇形の最も一般的な形式が、その遺伝的基盤はほとんど散発的ケースで不明のまま。我々 は最近 MCDs...

脳奇形の原因となる遺伝子を識別するアレイ CGH、全エキソーム配列と齧歯動物の子宮にエレクトロポレーションを組み合わせた新たな戦略

子宮エレクトロポレーションの二重は、空間的および時間的に分離された細胞集団を標的にすることを可能にする。この技術は、通常の条件で蛍光タンパク質を使用して、また、目的の遺伝子を摂動する機能実験の後に、それらの細胞集団間の相互作用を視覚化するのに有用である。...

時間的および空間的に分離された細胞集団を標的とする子宮エレクトロポレーションの二重

このプロトコルは、遺伝子修正されたラットモデルを生成するための最適化されたアプローチを提示します。アデノ随伴ウイルス(AAV)はDNA修復テンプレートの送達に使用され、エレクトロポレーションはCRISPR-Cas9試薬の送達に使用され、2細胞胚のゲノム編集プロセスを完了します。...

アデノ随伴ウイルス(AAV)と2細胞胚エレクトロポレーションを用いたラット胚のCRISPR-Cas9ゲノム編集

学ぶE16ラット胚の子宮内脳室内注入とエレクトロポレーションの手法。遺伝子導入効率を高め、発生神経科学の研究に応用可能です。

E16ラット胚の子宮内での脳室内注入とエレクトロポレーションで

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