心機能への遺伝子効果を評価するためのマウス心臓へのウイルス遺伝子導入

麻酔をかけ、胸部の除毛を行い、仰臥位に固定したマウスを用いて開始します。

除毛した皮膚を消毒します。

超音波画像を用いて心臓を可視化し、左心室の外壁を特定します。

心機能に影響を及ぼすと想定される試験遺伝子をコードする組換えウイルスを含むマイクロシリンジを用意します。

超音波ガイド下で、心室壁に針を挿入します。

ウイルスを壁の筋層に注入します。

より広範囲な遺伝子発現を達成するため、心室の異なる部位を標的として2回目および3回目の注入を行う。

針を抜き、マウスを回復させます。

ウイルスは心室筋細胞の受容体に結合し、受容体介在性エンドサイトーシスを開始して、ウイルスゲノムを核へと輸送します。

ウイルスゲノムの発現により、コードされたタンパク質が合成されます。

これで、ウイルス誘導性の遺伝子発現が心機能に及ぼす影響を評価するためのマウスモデルの準備が整いました。

まず、麻酔をかけたマウスの左下胸部を、ヨウ素系またはクロルヘキシジン系のスクラブ剤とアルコールを用いて、円を描くように交互に3回滅菌します。超音波イメージングガイドの下で、ウイルスを含むシリンジの針を動物の胸部に挿入します。

針先を左室前壁の自由壁に近づけ、10～15 µLのウイルスをゆっくりと注入します。針先付近の輝度上昇を超音波画像で確認し、注入が成功したことを検証します。針を心臓から引き抜き、左室の他の領域に挿入して、同量のウイルスを2回目および3回目の注入として投与します。