Name: ヒートショック法による大腸菌へのプラスミドDNAの形質転換 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: 学ぶヒートショック法による大腸菌の形質転換。42度の熱処理でプラスミドDNAを導入し、ゼブラフィッシュ研究のための遺伝子工学技術を習得できます。分子生物学の基礎実験を視覚的に理解しましょう。

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ヒートショック法による大腸菌へのプラスミドdnaの形質転換

Transformation of Plasmid DNA into E. coli Using the Heat Shock Method

ヒートショック法を用いて大腸菌へのプラスミドDNAの形質転換は、分子生物学の基本的なテクニックです。それは、細菌への外来プラスミドやライゲーション製品を挿入することで構成されています。このビデオプロトコルはGenlantisから市販のケミカルコンピテント細菌を使用した変換の伝統的な方法を説明します。氷の短いインキュベーションの後、ケミカルコンピテントバクテリアとDNAの混合物を45秒間、42 ° Cに配置されています（熱ショック）し、氷中に戻し入れ。 SOC培地を添加し、形質転換細胞を℃で30分間攪拌しながら37℃でインキュベートする。形質転換効率に関係なく、コロニーを単離することが保証されるためには、形質転換した細菌の2​​つの量は、メッキです。この伝統的なプロトコルは、ほとんどの市販のコンピテント細菌を形質転換するために正常に使用できます。 Genlantisからturbocellsは、取扱説明書に記載する新規な3分間の変換のプロトコルでも使用することができます。

ヒートショック法による大腸菌へのプラスミドDNAの形質転換

ヒートショック法を用いた大腸菌（E. coli）へのプラスミドDNAの形質転換は、分子生物学の基本技術である。これは、外来の...

こんにちは、アレックス・ホージです。私はカリフォルニア大学アーバイン校の生理学・生物物理学部にあるgym Hall Labで研究しています。本日は、エレクトロポレーション法を用いて、電気穿孔能を持つE. coliを形質転換させる方法をご紹介します。本日は、ゼブラフィッシュでのホールマウントin situハイブリダイゼーションを行うためのプローブ作製のため、この手法を用いてライゲーション産物を E. coli に形質転換します。それでは、形質転換の手順を開始します。まず、ウォーターバスまたはドライバスを 42 °C に設定してください。メインストックから取り出したばかりの細菌を氷上に準備してください。本日は、Invitrogen社の電気穿孔法用コンピテントセルと、氷上のDNAを使用します。また、室温または37°Cに置いたSOC培地が入ったチューブと、抗生物質を含むLB培地プレートを用意してください。それでは、細菌にDNAを添加します。細菌を汚染させないため、火炎のそばで作業を行います。このようにして、細菌を含む溶液を添加します。細菌液を50 µL加え、直ちに氷上に置きます。細菌とDNAを混ぜるために軽く弾いた後、氷上で最大15分間静置します。15分が経過し、42 °Cで45秒間加熱するヒートショックを行う準備が整いました。チューブを氷から取り出し、直接42 °Cにセットしたバスに入れ、タイマーを45秒に設定します。その後、速やかに氷上に戻し、42 °Cから直接氷上に移します。その後、2分間待ちます。次に、SOC培地を細菌に加え、37°Cで30分間培養します。SOC培地を500 µL分注して細菌に加え、簡易的なチャンバーに入れます。したがって、インキュベーターとしてエンドチューブと簡易的なチャンバーを使用する場合は、エンドチューブを水平に配置してください。そうすることで、より効率的に振盪させることができます。これで、チューブをシェーカーに入れる準備が整いました。そのため、37 °Cの小型チャンバーで30分間保持します。37 °Cでのインキュベーションが完了しましたので、抗生物質を加えたLBプレートに細菌を播種します。今回はクロラムフェニコールを使用します。各サンプルを 50 µLずつ分注し、プレートに滴下します。残りの500 µLを卓上遠心機で遠心分離し、細菌をペレット化します。遠心分離後、きれいなペレットが得られますので、ここでSOC培地をほとんどすべて取り除き、50 µLだけ残します。その後、この濃縮された50 µLの細菌をプレートに播種します。そのため、約450 µLを吸い出しました。この量だけ残します。次に、残った 50 µL の SOC 培地でペレットを懸濁させます。その後、この 50 µL を別のプレートに播種することができます。次に、各ペレットを回

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学ぶヒートショック法による大腸菌の形質転換。42度の熱処理でプラスミドDNAを導入し、ゼブラフィッシュ研究のための遺伝子工学技術を習得できます。分子生物学の基礎実験を視覚的に理解しましょう。

ヒートショック法による大腸菌へのプラスミドDNAの形質転換

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