脊髄電気生理学II：細胞外吸引電極の作製

Hi.My 名前はレッシュ・ゲイリー・ドリーで、ソーク生物学研究所のファフラボで研究助手をしています。今日は、2つの方法を使用して細胞外吸引電極を作製する方法を紹介します。これらの電極は、in vitroで私の脊髄の電気生理学的記録を撮るために使用できます。

アルコールランプを熱源として使用して、PE90プラスチックチューブを目的の幅に溶かします。火のついた炎の上にチューブを持ち、溶け始めたら取り外し、中央が壊れないように注意しながら、端をそっと引き離します。このプロセスを再度示します。

チューブが柔らかく溶けたらチューブを取り外し、両端をそっと引き離します。鋭利なカミソリの刃で、チューブの太い端で測定するサンプルのおおよその幅に対応する点でチューブを切断します。45度の角度でカットします。

次に、野生とOリングを太い端に取り付ける必要があります。チューブのこの端を野生の六角形の開口部に挿入します。次に、チューブの端をゴム製のOリングに挿入します。

このセットアップは、電極の前面にねじ込まれます。鋭利なカミソリの刃で1センチメートルの長さのゼウスの小さなチューブをカットし、端がきれいにカットされ、開いたイノシシが鋭いかみそりの刃を使用してPE90チューブの10センチメートルの部分を切り取ります。口内吸引を使用して、JB溶接を小さなチューブの中点に一滴垂らします。

小さなチューブと溶接部を大きなチューブの穴に引き込み、このセットアップを一晩硬化させます。図には示されていませんが、このチューブの太い端に45度のカットを行い、この端にフェラルとOリングを取り付ける必要があります。前に示したのと同じ方法で。

標準の吸引電極を分解し、電極の前端からフェラルを、後端からBNCコネクタを緩めます。次に、電極バレルの側面に角度の小さいサイドポートを作成する必要があります。バンズとバーナーを使用して金属片を加熱します。

加熱された金属をバレルの側面にある既存の穴にローアングルで押し込みます。銀色のワイヤーをBNCコネクターから取り外すには、コネクターと接する部分でワイヤーを引っ張ります。BNCコネクタをキシレンに1時間浸してワックスを取り除きます。

ワックスを取り除いたら、コネクタを水ですすぎ、ペーパータオルで乾かします。長さ15センチの銀線をカットします。ワイヤーを漂白剤に15分間浸します。

その後、ペーパータオルですすぎ、乾かします。銀線をBNCコネクタにはんだ付けします。銀線を吸引電極バレルの後端に挿入し、BNCコネクタが側面に残るのに十分なスペースを残します。

サクションチューブをサイドポートに約3cm挿入します。吸引電極の背面開口部にシリコンシーラントを注入し、指で覆うことでサイドポートからこぼれないようにします。電極バレルに約2〜3センチメートルのシーラントを注入します。

失敗したら、BNCコネクタを所定の位置にしっかりとねじ込み、シーラントを前方に押し込みます。シーラントを一晩硬化させます。引っ張られた先端または切断された先端の方法によって作成されたチューブのフェラルを電極の矯正の前面にねじ込みます。

チューブは、電極を通る銀線を楽にするのに役立ちます。録音セットアップは、外部干渉を減らすためにファラデーケージ内に配置されます。また、機械的な干渉を排除するために、セットアップはエアテーブル上に配置されています。

電極は磁気スタンドマイクロマニピュレータに取り付けられ、記録皿の近くに配置されます。BNC同軸ケーブルは、アンプに接続されたヘッドステージに接続されています。世界 amplifierポリに配線されています view アダプターはコンピューターに配線されています。

この設定をクローズアップして示しています。BNC同軸ケーブルはヘッドステージに接続されています。ヘッドステージはアンプに接続されています。

アンプ出力はファラデーケージから出て、ポリに接続されます viewアダプター。ポリ view アダプターは、適切な録音ソフトウェアがインストールされているコンピューターに接続されています。セットアップ全体を適切に接地する必要があります。

外部アースは、ファラデーケージとエアテーブルをアースに接続することによって確立されます。内部アースは、解剖皿をヘッドステージに配線することによって確立されます。ケージのドアを本体に接地することも必要です。

適切なセットアップにより、データを収集できるようになりました。このビデオをご覧いただき、今後の実験にご協力いただき、ありがとうございます。