Name: 脊髄電気生理学II：細胞外吸引電極の作製 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-20T23:59:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: 学ぶ細胞外吸引電極の作製法。アルコールランプでPE90プラスチックチューブを加熱・引き伸ばし、新生ラットの脊髄からの電気生理学的記録に使用する方法を解説。神経科学研究に有用な技術です。

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サミュエルL. Pfaffさんは、ソーク生物学研究所での遺伝子発現の研究​​室の教授、ハワードヒューズ医学研究所の研究者でもある。この作品は、クリフトファーリーブ麻痺財団によってサポートされていました。ジョーBelcovson、ソーク研究所のマルチメディアリソースのケントSchnoekerとマイクサリバンは写真撮影と編集との支援を行いました。

分離された脊髄の電気生理学的記録は、神経回路を1に遺伝と発達的変化を明らかにすることができます。我々は以前に新生児マウス脊髄2を分析する方法を示した。ここでは、孤立した脊髄3の虚構の移動を記録するのに役立ちます吸引電極を準備する方法を提示する。 プラスチックチューブの電極の先端は、低温アルコールランプ3-5を使用して、手で非常に微細な先端に描画することができます。プラスチックチューブ（PE90、クレイアダムスIntramedic TM）は、可鍛性フォームにチューブを柔らかくするために火炎にわたって開催される。チューブは、溶融し始め、それが熱源から削除され、両端が静かに離れて引かれるより半透明になりますように。炎からチューブを取り外すのタイミングは、プラスチックが崩壊または描画されている間に分割していない保証することが重要です。チューブの薄い部分は、試料や脊髄の分節レベルの年齢によって決まる、希望の内径に応じてカミソリの刃で切断されています。チューブにOリングを置くことを容易にするため、45 °のカットは、カミソリの刃を持つチューブの厚さの終わりに行われます。フェルールとO -リングは、電極のバレルに電極チップを接続する太い側にインストールされます。 特にサイズの電極を可能にすると手引っ張って電極チップの難しさを避けるために、電極が厚いチューブ（PE90）に挿入された小型のチューブを使用して構築することができます。チューブの長さは、録画設定の要件に固有のもので、可変です。私たちは、実験1-3,5で使用される測定値を提示する。 PTFEファインチューブ（ゼウス、小さな部品）とPE90チューブの10cmの長さの1cm長さは、カミソリの刃でカットされます。小さなチューブの端面は、それらが破砕または閉じていないを確認するために調べる必要があります。彼らは昆虫ピン（ファイン科学のツール）を使用して開くことができます。接着剤（JBウェルド）の低下は、PTFEチューブの中間点に配置されます。 PTFEチューブと接着剤は、PE90チューブの口の吸引を使用してPE90チューブに描かれています。 45 °のカットは、チューブやフェルールとO -リングの厚さの終わりに行われるように以前、添付されています。 フェルールとBNCコネクタは、市販の吸引電極からねじを緩めるされています。 BNCコネクタは、ワックスのシールを除去するために一時間キシレンに浸漬される。コネクタは、その後水で洗浄し、乾燥させる。 低角度側のポートは、バレルの側で行う必要があります。金属棒は、ブンゼンバーナーを用いて加熱し、低角度で鏡筒の側面上の既存の穴に押し込まれる。 0.010インチ銀線（AMシステム）の15センチメートル長さは15分間カットや漂白剤に浸漬される。これは、信号の伝導6に助けることが塩化銀の皮膜を作成するために行われます。ワイヤは、水ですすぎ、乾燥して、BNCコネクタにハンダ付けされています。 BNCコネクタと銀線は、バレルの側に残るためにBNCコネクタのための十分な余地を吸引電極のバレルに挿入されます。吸引チューブは、サイドポート2〜3センチメートルに挿入されます。シリコーンシーリング材は、約2〜3センチメートルバレルに注入されます。 BNCコネクタは、前方にシール剤を押して電極のバレルにスレッド化されている。 電極の先端は、現在電極のフロントエンドにスレッド化されている。収縮チューブは、サイドポートから吸引ラインを強化するために追加することができます。 電極はマグネットスタンドに接続されているマイクロマニピュレータに搭載されており、記録の皿の近くに配置されます。 BNC同軸ケーブルは、アンプに配線されているヘッドステージに接続されています。アンプは、データ収集ソフトウェア（Polyview）とPCのコンピュータにデジタルカードにアナログ（ナショナルインスツルメンツ）に接続されているアダプタ（Polyview）に接続されています。 電気生理学的データを記録するとき、それはすべての外部の干渉を排除する必要があります。録音皿、アンプ、およびヘッドステージはそれぞれ、電気的、機械的干渉を防ぐためにファラデーケージ内の空気のテーブルの上に置かれている。 代表的な結果： <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1。市販の吸引電極は重いゲージの銀線と手のアルコールランプに描かれた、または特定のサイズの市販のプラスチック製のチューブで構成されているプラスチック製の先端を追加することによって変更することができます。さらに、パラフィンシーラントは、より耐久性のあるシリコンコーキングシール剤に置き換えられます。 <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2エアテーブルとの関係で吸引電極の概略図（機械的分離用）、ファラデーケージ（電気isolati）で、アンプとコンピュータ。それは記録の皿とエアテーブルとファラデーケージに参照される第2のグランドを基準とする地盤があることに留意すべきである。

<ol><li>Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+rhythmic+locomotor+burst+patterns+using+a+continuous+wavelet+transform%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform.</a> Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).</li>
<li>Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Spinal cord electrophysiology.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Gallarda, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+axial+motor+and+sensory+pathways+via+heterotypic+trans-axonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling.</a> Science. 320, 233-236 (2008).</li>
<li>Landmesser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+motor+projection+patterns+in+the+chick+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The development of motor projection patterns in the chick hind limb.</a> J Physiol. 284, 391-414 (1978).</li>
<li>Myers, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+input+is+required+during+embryonic+development+to+mediate+proper+assembly+of+spinal+locomotor+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits.</a> Neuron. 46, 37-49 (2005).</li>
<li>Chanin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+chloride+by+use+of+the+silver-silver+chloride+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode.</a> Science. 119, 323-324 (1954).</li>
<li>Goulding, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circuits+controlling+vertebrate+locomotion%3A+moving+in+a+new+direction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

神経系の発達は、単離されたげっ歯類の脊髄を用いて研究することができます。神経伝達物質の存在下では、架空の運動は、パターニングされた電気的活動1,3の形で脊髄から生成することができます。これらのリズミカルなバーストは0.2から0.5 Hzで生産され、左、右と屈筋、伸筋交替にパターニングされています。異なる発達段階で、この活動の頑健性やパターンが1変化する。遺伝的変異はまた、この活動3,5,7のパターン形成を妨げることができる。この活動のトランスジェニックと発達の研究では、中枢パターン生成回路の構成についての洞察を提供し、一般的に、神経発生の研究を通知する。

<table><tbody><tr><td>PTFE Sub Lite Wall チュービング（小型チューブ）</td><td>Zeus</td><td>36AWG</td><td>0.005&amp;#8221;ID x 0.003&amp;#8221; Wall（小型部品） 0.003&amp;#8221;から0.006&amp;#8221;まで提供あり</td></tr><tr><td>大型チューブ (0.86mm (0.34&amp;#8221;))</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td>0.86mm (0.34&amp;#8221;) 外径 1.27mm (.050&amp;#8221;)</td></tr><tr><td>電極バレル</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td></td></tr><tr><td>接着剤</td><td>JB Weld</td><td></td><td></td></tr><tr><td>接着剤：シリコンコーキング</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>はんだおよびはんだごて</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>漂白剤</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>銀線：0.010&amp;#8221;</td><td>A-M Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>昆虫ピン：Austerlitz 0.1mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>マグネットスタンド</td><td>Narishige International</td><td>GJ-8</td><td></td></tr><tr><td>マイクロマニピュレーター</td><td>Narishige International</td><td>MN 151</td><td></td></tr><tr><td>ミニボード（ヘッドステージ）</td><td>Grass Technologies</td><td>F-15EB/B1</td><td></td></tr><tr><td>Polyviewアダプターユニット</td><td>Grass Technologies</td><td>PVA 8</td><td></td></tr><tr><td>双極ポータブル Physiodata アンプシステム</td><td>Grass Technologies</td><td>15LT</td><td></td></tr><tr><td>アナログ-デジタル変換カード</td><td>National Instruments</td><td>6035E</td><td></td></tr><tr><td>エアテーブル；Vibraplane</td><td>Kinetic Systems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

脊髄電気生理学ii：細胞外吸引電極の作製

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

神経回路をと運動の発展は、新生児げっ歯類の脊髄中枢パターン発生器（CPG）の動作を用いて研究することができます。我々は解剖さ齧歯類の脊髄では、CPGの活動を調べるために使用される吸引電極を作製する方法、または虚構の運動を示しています。齧歯類の脊髄は、人工脳脊髄液に配置され、腹根を吸引電極に描かれています。電極は、市販の吸引電極を変更することによって構成される。重い銀線は、市販の電極によって与えられた標準的なワイヤーの代わりに使用されます。商業用電極上にガラスチップは耐久性を高めるためのプラスチックの先端に置き換えられます。私たちは、一貫性と再現性を可能にする、チューブの特定のサイズで作られた手描きの電極と電極を準備する。データは、アンプと神経像集録ソフトウェアを使用して収集されます。録音は、それぞれ、機械的および電気的干渉を防ぐために、ファラデーケージ内の空気のテーブル上で実行されます。

新生児げっ歯類の脊髄の電気生理学的記録を測定するために使用される細胞外吸引電極の製造と使用のデモンストレーション<em&gt; in vitroで</em

脊髄電気生理学II：細胞外吸引電極の作製

新生児げっ歯類脊髄の中央パターン生成器（CPG）の挙動を用いることで、神経回路の発達および移動能を研究することが可能です。本研究では、…を実証します。

こんにちは。私はResh Gary Doryです。ソーク生物学研究所のfaf Labでリサーチアシスタントを務めています。本日は、2つの方法を用いて細胞外吸引電極を作製する方法をご紹介します。これらの電極は、in vitroで脊髄の電気生理学的記録を行うために使用できます。熱源としてアルコールランプを使用し、PE 90プラスチックチューブを目的の幅まで加熱溶解させます。チューブを点火した炎の上に保持し、溶け始めたら離し、中央部分を切断しないように注意しながら、両端をゆっくりと引き離します。この工程を再度示します。チューブが軟化して溶け始めたら取り外し、両端をゆっくりと引き離します。チューブの太い端にある、測定するサンプルの概ねの幅に相当する箇所を、鋭利なカミソリで切断します。このとき、45度の角度でカットしてください。次に、フェルールとOリングを太い方の端に取り付けます。チューブのこの端をフェルールの六角形の開口部に挿入します。その後、チューブの端をゴム製Oリングに挿入します。このセットアップを電極の前面にねじ込みます。鋭いカミソリを用いてZeus小チューブを1 cmの長さに切り、端がきれいに切断され、内径が開いていることを確認します。鋭いカミソリを用いてPE 90チューブを10 cmに切り出します。口による吸引を用いて、小チューブの中点にJB weldを1滴塗布します。細いチューブと溶接部を太いチューブの内腔に引き込み、このセットアップを一晩硬化させます。図には示されていませんが、このチューブの太い端を45度にカットし、前述と同様の方法でフェルールとOリングをこの端に取り付けてください。標準的な吸引電極を分解し、電極の先端からフェルールを、後端からBNCコネクタをねじって取り外します。次に、電極バレルの側面に、斜め下方向を向いたサイドポートを作成する必要があります。ブンゼンバーナーを使用して、金属片を加熱します。加熱した金属を、バレル側面の既存の穴に低い角度で押し込みます。BNCコネクタと接している部分のワイヤーを引っ張り、銀線をBNCコネクタから取り除きます。BNCコネクタをキシレンに1時間浸し、ワックスを除去します。ワックスを除去した後、コネクタを水で洗浄し、ペーパータオルで乾燥させます。銀線を15 centimeterの長さに切断します。その線を漂白剤に15分間浸します。その後、すすいでペーパータオルで乾かします。銀線をBNCコネクタにハンダ付けします。銀線を吸引電極バレルの後端に挿入し、BNCコネクタが側面に配置されるように十分な余裕を持たせておきます。吸引チューブをサイドポートに約3cm挿入します。指でサイドポートを塞いでシール材が漏れ出ないようにしながら、吸引電極の背面開口部にシリコンシール材を注入します。電極バレル内に約2〜3cmまでシール材

spinal-cord-electrophysiology-ii-extracellular-suction-electrode

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

電気生理学的研究のための新生児マウス脊髄の分離のデモンストレーション。...

脊髄電気生理学

テクニックは、4を注入するために記述されています...

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