2011年2月13日
我々はビデオで腔内モノフィラメントを使用して成体マウスの中大脳動脈閉塞を製造する方法を示しています。我々はまた、2,3,5 - 塩化トリフェニルテトラゾリウム(TTC)染色による脳梗塞の程度を評価する方法を示します。
こんにちは、私の名前はテレンス・ジャムです。私の名前はハイ・ジョーです。今日は、中動脈閉塞のマウスモデルを行う方法をご紹介します。
それでは始めましょう。この実験は、縫合糸の準備から始まります。まず、縫合糸を20mmにカットします。
次に、縫合糸を焼灼器に向けて先端を丸めます。その後、縫合糸の先端を測定します。これで、マスクを背中に付けて手術を開始する準備が整いました。
正中線に沿って切開します。鉗子を使用してECAを露出させます。ECAに沿った外頸動脈は多くの枝です。
これらの枝の1つは、上甲状腺動脈であるSTAです。STAはバイポーラ鉗子で凝固する必要があります。次に、ECAをより適切に分離できるように、STAを切断する必要があります。
次に、ECAは凝固し、CCAからできるだけ離れたサイズになります。この時点で、アクセスを改善するためにECAを分離することをお勧めします。次に、ECAAの周りに2つの縫合糸を数ミリメートル離して緩く結びます。
CCAのECAおよびICAへの分岐でクランプを適用します。次に、ECA切り株の先端をクリップします。次に、ECA を ICA に合わせて再配置します。
これにより、縫合糸はECAからICAへの連続的な侵入を持つことができます。挿入前に縫合糸の全長を測定します。ECAの切り株をクリップして作った開口部に縫合糸を挿入します。
縫合糸が遠位結び目を通過するとき、結び目を締めて固定します。次に、クランプを取り外し、縫合糸をECAにさらに挿入します。縫合糸が近位の結び目を通過するときは、結び目を締めて固定します。
両方の結び目を固定した後、縫合糸が9〜10ミリメートル通過するまで動脈に沿って縫合糸を慎重に挿入します。分岐点とは、これは、縫合糸の全長から分岐点までの縫合糸の長さを差し引くことによって行うことができる。縫合糸がMCAの起点に到達すると。
MCA がオクルードされています。24時間後、大衆は犠牲になり、脳は孤立しました。TTC染色では、単離した脳を型に入れ、カミソリの刃でスライスします。
次に、脳を室温で2%TTCに20分間入れます。最後に、脳は一晩中固定され、中立になります。緩衝ホルミン。
縫合糸の準備はデリケートなプロセスです。ここでは、役立つヒントをいくつか紹介します。縫合糸と焼灼剤をそのように配置します。
次に、焼灼器を静止させたまま、縫合糸をゆっくりと近づけます。次に、縫合糸を測定して、正しいサイズであることを確認します。この実験で使用する縫合糸のサイズは約0.21〜0.22ミリメートルです。
手術を開始するには、マスクを背中に置き、30%の酸素と70%の窒素で麻酔を誘発します。正中線に沿って切開を行い、次にリトラクターを適用して領域へのアクセスを開きます。このようになるはずです。
鉗子で組織を慎重に分離します。次に、ECAを分離する過程で鉗子を使用してECAを露出させ、隔離すると、STAを凝固させて切断する必要があります。これにより、ECAのより長い部分を分離することができます。
次に、ECAはバイポーラ鉗子の助けを借りて凝固する必要があります凝固後、ECAを切断する必要があります。次に、ECAを分離し、ECAAの周りに数ミリメートル離して2つの縫合糸を緩く結びます。結果は次のようになります。
次に、CCAの分岐部にクランプをICAおよびECAに適用します。アサリがECAへの血流を完全に妨げていることを確認してください。次に、ECA切り株の端をクリップします。
ECAに開口部が作られた後、挿入前に縫合糸を測定します。縫合糸と開口部を遠位結び目を超えて挿入します。縫合糸が遠位結び目を通過した後、結び目を締めます。
次に、クランプを取り外します。遠位結び目が固定されていることを確認した後、ECAに沿って近位結び目を過ぎて縫合糸をさらに挿入します。次に、近位の結び目を締めます。
次に、ECAに沿って縫合糸をICAに慎重に挿入します。縫合糸が分岐点を過ぎるまで、ICAに沿って縫合糸を挿入し続けます。これは、縫合糸の全長から分岐点までの縫合糸の長さを差し引くことによって行うことができます。
次に、周囲の組織を傷つけないように縫合糸をトリミングします。次に、切開部を縫合し、マウスが回復するのを待ちます。手術の24時間後にTTC染色の準備をします。
まず、子宮頸部脱臼でマウスを犠牲にすることから始めます。次に、頭蓋骨から脳を分離し、型に入れます。その後、カミソリの刃でスライスし、室温で20分間脳を2%TTCで染色します。
次に、一晩で固定し、メリンの10%neutralをバッファーに入れます。というわけで、これだけです。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください。
このビデオは、内腔内モノフィラメントを使用して成体のマウスで中大脳動脈閉塞(MCAO)を生成する方法を示しています。また、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウム塩化物(TTC)染色を通じて脳梗塞の範囲を評価する方法も示しています。
The mouse model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) provides a robust, reproducible platform for evaluating ischemic stroke mechanisms and potential therapeutic interventions in preclinical research. This model enables quantitative assessment of infarct size and supports translational continuity from early discovery through preclinical validation. Its widespread adoption in neuroscience R&D reflects its value for mechanistic de-risking and predictive confidence in cerebrovascular target validation.
This MCAO model bridges early discovery, lead identification, and preclinical validation for cerebrovascular targets and interventions.