Name: 軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からのクロマチン免疫沈降 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-20T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: 学ぶ 軸索損傷後の脊髄後根神経節組織からのクロマチン免疫沈降法。転写因子結合部位とエピジェネティック修飾を同定し、軸索再生における遺伝子発現制御メカニズムを解明する。

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我々は微調整ChIPの条件への貢献のために研究室とリコリンドナーで最初のChIP実験のセットアップについて詳しくはアンドレアテデスキに感謝します。この作品は、Hertie財団によってサポートされていました。フォーチュングラント、チュービンゲン大学、およびDFG DI 1497/1-1の助成金を（すべてのシモーネディジョバンニに付与される）。

1。坐骨＆脊柱の神経損傷<ol><li>動物は、外科用タオルの上に置き、その下thermopadは37マウスの体温を維持℃までの手順全体を通して存在していますすべての動物は、連続的なO /イソフルラン2投与と手術用麻酔する。手術器具は、プロシージャの前にオートクレーブされています。 </li><li>坐骨傷害の場合は、両方の後半部は慎重に剃毛され、そして脱毛前Betadyne 3回に続いて、アルコールで皮膚を洗浄する一般的な脱毛剤で完了します。 </li><li>坐骨神経を4 mmの切開は、後部、経皮半ば腿での大腿骨と平行することで、上質な鉗子を持つ二頭筋大腿から離れて筋肉を分散して公開されます。 </li><li>露出坐骨神経は、負傷で、皮膚は2つの縫合クリップで閉じられます。 </li></ol> 注：同一の切開が坐骨神経を露出するために作られていますが、傷が偽の傷害のための神経はそのままにして閉じて縫合される。 <ol start="5"><li>脊髄後索損傷の場合は、マウスの背面を慎重に剃毛され、そして脱毛は、一般的な脱毛剤は、前のアルコールスプレー/スワイプで皮膚を洗浄することで完了します。 </li><li>脊髄は、T7約からT13に2.5cmの切開を行うことによって公開されます。皮膚は離れて拡散され、そして結合組織は、T9からT11までの椎骨に沿って削除されます。 </li><li>椎弓切除は、T10レベルで実行されます。 </li></ol> 注記：ほとんどの実験では、椎弓切除はシャムの傷害とみなされます。 <ol start="8"><li> Xylocainの数滴はコードをanaesthetizeする組織に追加され、硬膜は脊髄に触れないように注意を払って、削除されます。 </li><li>背側の列は負傷していると筋肉が再び脊髄に触れないように注意を払って、近くに縫合する。最後に、皮膚を縫合クリップで閉じて縫合する。ブプレノルフィン（0.1 mg / kg体重）を48時間または不要になるまで1日2回投与する必要があります。 </li></ol> 2。架橋<ol><li>安楽死後に負傷したマウスからのL4とL5 DRGを細かく分析。氷冷HBSS +プロテアーゼ阻害剤カクテル（4匹の合計のために各動物から負傷者と2偽DRG 2）に16 DRGの合計を収集する。 </li><li>簡潔にDRGを遠心して、慎重にHBSSを除去し、PBS +プロテアーゼ阻害剤のカクテルの1％ホルムアルデヒド500μLを追加し、37℃で30分間サンプルをインキュベート℃を</li></ol> 重要なステップは、新鮮な、分子生物学グレードのホルムアルデヒドを使用してください。 <ol start="3"><li>室温で5分間固定し、インキュベートを停止するにはグリシンの125ミリメートルを追加。 </li><li>簡単に言えば、遠心分離バッファをオフに吸引し、そして500μlの氷冷PBS +プロテアーゼ阻害剤のカクテルで二回組織を洗浄する。 </li></ol> 3。核の準備とクロマチン断片化<ol><li> PBSから吸引し、SDS溶解バッファー400μlを追加、事前に冷却したマイクロ遠心チューブに移す、とmicropestleで約30ストロークで組織を混乱させる。 </li></ol>組織の重要なステップ。溶解および崩壊は、架橋クロマチンの良好な収率のために不可欠です。 <ol start="2"><li> 8パルス、70％出力（Bandelin、Sonoplus GM70）で10秒ごとにサンプルを超音波処理してください。 </li></ol> 注意。クロマチンの断片化は、（セクション3を参照）を設定し、クロマチンの適切な断片化は実際のIPの実験を実行する前にチェックすべき特定の超音波処理のために最適化されている必要があります。 クロマチンの注記。フラグメンテーションは、ミクロコッカスヌクレアーゼ（MNase）消化によって実行される可能性があります。 MNase消化がネイティブ組織のクロマチン免疫沈降のために支持されている間経験則として、超音波処理により断片化は、固定組織に適しています。クロスリンクされている、断片化クロマチンは、最大2ヶ月まで-80℃で保存しますが、凍結/融解を避けることができます。 4。クロマチン消化の分析（推奨） <ol><li>分析用断片化クロマチンサンプル10μlを削除します。サンプルへのNaCl 200mMのを追加し、2時間、65℃でインキュベートすることにより、クロスリンクを逆に。 </li><li> DNAを精製する（セクション8を参照）、1％アガロースゲルを実行します。 DNAは、約200から1000塩基対（図1）の長さに断片化されるべきである。 </li></ol>不完全な断片化が減少解像度と増加の背景につながる一方クロマチンの注意。オーバー断片化は、減少信号につながる可能性があります。 5。免疫沈降<ol><li>免疫沈降反応の数を決定します（下記の注を参照）、と同様に新しいチューブにサンプルを分割する。それぞれのボリュームをもたらす最大500μlまでのChIPバッファー+プロテアーゼ阻害剤のカクテルで。 </li><li>あなたの希釈サンプルの5μlを取り出し、新しいチューブに移す。これは1％の入力サンプルであり、必要になるまでは（セクション7）-20℃で保存されます。 </li><li>各免疫沈降のために、適切な抗体または通常のIgGのコントロールを追加し、回転と℃で一晩4℃でインキュベートする。 </li></ol> 注記。免疫沈降の数、陽性対照（例えば、ヒストンH3抗体）とネガティブコントロール（ノーマルIgG）を決定するとき考慮されるべきである。各IPのために使用される抗体の量は、抗体間で変化し、経験的に決定する必要があります。しかし、それは通常2〜10の範囲内でしょうか？G /免疫沈降。 <ol start="4"><li>あなたの抗体/タンパク質/ DNA複合体を免疫沈降、沈降グレードプロテインG磁気ビーズ30μlを追加し、4℃で2時間インキュベート° Cを回転した。 </li></ol> 6。洗浄<ol><li>プルダウンバインドされているクロマチン - ビーズ複合体に、磁気ラック上にチューブを置きます。溶液が透明になるまで待ってから、慎重に上清を取り除く。 </li><li>ビーズに低塩の洗浄を1 ml（チップバッファ）を追加し、4℃でインキュベートCを回転で3〜5分間、その後、ビーズをプルダウンし、手順6.1のように洗浄してから吸引。 3回洗浄の合計に対して、この手順を繰り返します。 </li><li>ビーズに高い塩の洗浄緩衝液1ml（チップバッファ+ 350 mMのNaCl）を追加し、ビーズをプルダウンし、手順6.1のように洗浄をオフに吸引し、回転で3〜5分間インキュベートする。 </li></ol> 7。架橋の溶出と逆転<ol><li> 、-20 ° Cからご入力サンプルを取るのChIP溶出バッファー150μLを追加し、ステップ7.5になるまで室温で置いておきます。 </li><li>ステップ6.3から各IPサンプルの1 × ChIPの溶出バッファーを150μlを追加。 </li><li>サーモミキサーでチューブをセットし、℃で穏やかにボルテックスしながら30分間65℃のサンプルをインキュベートすることにより、ビーズからクロマチンを溶出させる。 </li><li>磁気ラックでビーズをプルダウンし、慎重に新しいチューブに溶出されたクロマチン（上清）を移す。 </li><li>すべての入力のサンプルを含むチューブ、、NaClの200mmの追加と65でプロテイナーゼKとインキュベート40μgの/反応℃で2時間まで。 </li></ol> 注記。溶出ステップは、あまりにも、室温で行うことができますが、それは効率的でないかもしれません。 8。 DNAの回収<ol><li>ステップ7.5および30秒間ボルテックスから試料にフェノール/クロロホルムの1ボリュームを追加します。 </li><li> 5分間室温で遠心機で最高速度で遠心する。 </li><li>慎重に水（上側）を新しいチューブに相、水相にクロロホルムの1ボリュームを追加し、30秒間ボルテックスを回復する。 </li><li> 5分間室温で遠心機で最高速度で遠心する。 </li><li>慎重に新しいチューブに水（上側）の位相を回復、その後、氷冷100％エタノールの20μg/グリコーゲンの反応、および2.5倍量のNaOAcの300mmの追加。 </li></ol> 注意。そのようなグリコーゲンのようなキャリア、のほかは、比較的小さなサイズのDNA断片の沈殿を促進するために必要です。 <ol start="6"><li> ℃で2時間DNAを沈殿-80インキュベートする。 </li></ol> 注記。沈殿工程も-20℃で一晩行うことができます。 <ol start="7"><li> 4℃で20分間マイクロ遠心機でサンプルを最高速度で遠心する℃、 </li><li>注意深く上清を除去し、氷冷70％エタノール300μlで沈殿したDNAペレットを洗浄する。 </li><li> 4℃で10分間微量遠心機で最高速度で試料を遠心℃に</li><li>注意深く上清をできるだけ取り除き、ペレットを空気乾燥させる。 </li><li>滅菌H 2 O20μlに再懸濁し現在、サンプルのPCRのための準備ができている、またはDNAは-20℃で保存することができます</li></ol> 9。代表的な結果坐骨病変は、次のDRGSのChIP実験の代表的な結果は（図1および図2）表示されます。最初に、我々は約200から1000塩基対（図1）の長さに断片化したDNAを示す。第二に、我々は、タンパク質- 43（GAP - 43）のみの時に坐骨神経の損傷（レーン4、図2に、5'）に関連する成長の近位プロモーターからのPCR信号次のチップを示す。ないPCR信号は動物だけ偽の傷害を受信したとき（レーン3）存在しない、とするときにIP（レーン5および6）のために正常なIgG血清を用いて。抗体の特異性をテストするために、我々は、同一のDNAサンプルを分析しますが、占有率が期待されていない関心の私達の遺伝子の3' - UTR内の領域を検出する制御のプライマーセットを使用。 PCRのシグナルは、標準的なPCRコントロールとしての非IP DNAサンプルを表す、入力信号を除いて、すべてのレーン（レーン3-6、図2、3'）から不在である（レーン1-2、ふぃぎゅ再2）。回路図（図3）に要約としてこのチップ手順はどちら坐骨または脊髄後カラムの損傷後に実行することができます。 <img src="/files/ftp_upload/2803/2803fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> フラグメントの長さの適切な範囲に超音波処理によってせん断されて逆に架橋されたDNAの図1。アガロースゲル。 <img src="/files/ftp_upload/2803/2803fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2。アセチル化p53はGAP - 43 48時間坐骨神経損傷後の近位プロモーター領域に結合することを示す坐骨神経の病変は、次のDRGの組織から半定量的PCRの結果。アセチル化p53はGAP - 43遺伝子（S =シャム、I =負傷）の3' -非翻訳領域（UTR）に位置するDNAの制御領域に結合しないことと同じDRGの組織からのコントロールPCRは、show。 <img src="/files/ftp_upload/2803/2803fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3。坐骨神経で病変部位の位置、および背側の列を示す概略図。

<ol><li>Beirowski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+and+qualitative+analysis+of+Wallerian+degeneration+using+restricted+axonal+labelling+in+YFP-H+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative and qualitative analysis of Wallerian degeneration using restricted axonal labelling in YFP-H mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 134, 23-35 (2004).</li>
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</ol>

利害の衝突は宣言されません。

このプロトコルは、直接軸索損傷後の成人の神経系における軸索再生中にクロマチン環境について質問する方法を提供する。それはPNSやCNSのいずれかに傷害に続く転写とエピジェネティックな環境を調べるためにクロマチン免疫沈降法でDRG傷害モデルを搭載しています。それは自分の好きな転写因子のための推定結合部位を特徴づけるために、これらのサイトの占有率は傷害に反応して発生するかどうかを判断したい研究者のために特に有用である。これらの部位のヒストンとDNAのエピジェネティックな修飾も同時に監視することができます。同様のプロトコルは、我々が以前報告したように顔面神経核は脳幹から解剖し、チップが処理可能な顔面神経の病変、以下を行うことができます（テデスキら 、2009）。 クロマチン免疫沈降アッセイ用として典型的な、プロトコルの2つの重要なステップは、DNA -タンパク質複合体の（1）効率的な断片化と可溶化であり、目的タンパク質に適した免疫沈降抗体の（2）可用性。これら2つのステップを混乱させる可能性が一つの制限は、出発原料の低レベルです。このような脳や脊髄などの他の構造に比べて、...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th></tr><tr><td> 10倍のChIPバッファー</td><td>細胞シグナリング</td><td> 7008 </td></tr><tr><td> 2倍のChIP溶出バッファー</td><td>細胞シグナリング</td><td> 7009 </td></tr><tr><td>のChIPグレードプロテインG磁気ビーズ</td><td>細胞シグナリング</td><td> 9006 </td></tr><tr><td>マグナグリップラック（8ウェル） </td><td>ミリポア</td><td> 20から400 </td></tr><tr><td>クロロホルム</td><td> MERCK </td><td> UN 1888 </td></tr><tr><td> 37％ホルムアルデヒド</td><td> ROTH </td><td> CP10.1 </td></tr><tr><td> 10倍グリシン溶液</td><td>細胞シグナリング</td><td> 7005 </td></tr><tr><td>グリコーゲン</td><td>シグマ</td><td> G1767 </td></tr><tr><td> 10倍HBSS </td><td>ギブコ</td><td> 14185 </td></tr><tr><td>ヒストンH3抗体（ウサギ） </td><td>細胞シグナリング</td><td> 2650 </td></tr><tr><td>正常ウサギIgG </td><td>細胞シグナリング</td><td> 2729 </td></tr><tr><td>フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール</td><td> ROTH </td><td> A156.1 </td></tr><tr><td>プロテアーゼ阻害剤カクテル錠</td><td>ロッシュ</td><td> 04 693 116 001 </td></tr><tr><td>プロテイナーゼK（20 mg / mlの） </td><td>細胞シグナリング</td><td> 10012 </td></tr><tr><td> SDS溶解バッファー</td><td>州の北部</td><td> 20から163 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><th>必要な機器</th></tr><tr><td>ソニケーター</td></tr><tr><td> Micropestle </td></tr><tr><td>マイクロ遠心機</td></tr><tr><td>サーモ</td></tr></tbody></table>

軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からのクロマチン免疫沈降

Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

中枢神経系における軸索（CNS）、末梢神経系（PNS）のものは、損傷後の限られた範囲内で再生成しない状態が再生しない（総統ら 、2006）。それは、神経突起と軸索伸長に必須の転写プログラムはPNSの損傷（Makwana ら 、2005）により再活性化されていることが認識されている。しかし、in vivoでの神経細胞の遺伝子調節を分析するために利用できるツールは限られており、頻繁に挑戦です。 CNSとPNSの両方が同一の細胞体から発信された二股の軸索によって支配されているため、後根神経節（DRG）は、優秀な傷害のモデルシステムを提供しています。ガングリオンは、すべての転写のイベントが発生する細胞体の離散集合を表すため、容易にかつ再現性の動物から除去することができる転写活性の明確に定義された領域を提供します。軸索再生が発生しないPNS（例えば坐骨神経）、神経線維の損傷、再生が（例えば、脊髄を行われていないCNSにおける同様の傷害に応答するものとは異なる転写一連のプログラムを、明らかにすべき）。ヒストン、結合転写因子とPNSやCNSのいずれかに傷害に起因するDNA修飾のためのサイトは、クロマチン免疫沈降（チップ）を使用して特徴づけることができる。 ここでは、軸索損傷後の固定マウスのDRGの組織を使ってチッププロトコルについて説明します。この強力な組み合わせにより、軸索再生を促進するために必要なプロ再生クロマチン環境を特徴づけるための手段を提供します。

我々は、軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からクロマチン免疫沈降法を提示する。アプローチは、特定の転写因子結合部位と末梢および中枢神経系の両方で負傷した軸索の再生のための重要なヒストンとDNAのエピジェネティックな修飾を識別するために使用することができます。

中枢神経系（CNS）の軸索は再生しないが、末梢神経系（PNS）の軸索は、...の後に限定的ながら再生する。

本手順の全体的な目的は、神経損傷後の後根神経節組織から、架橋されたタンパク質-DNA複合体を免疫沈降させることです。これは、まず坐骨神経または後索に損傷を誘導することによって達成されます。第二のステップでは、サンプルを架橋し、タンパク質-DNA複合体を可溶化します。本手順の第3ステップは、特定のタンパク質-DNA複合体を免疫沈降させることです。最後に、DNAを精製し回収します。これにより、最終的に、タンパク質またはDNAヒストン修飾に関連するDNA断片の濃縮を示す結果を得ることができます。この手法は、軸索再生の促進に重要な遺伝子の制御に、どのDNA結合部位、転写因子、およびヒストン修飾が必要であるかといった、神経再生分野における重要な疑問の解決に役立ちます。まず、麻酔をかけた動物を手術台に置きます。次に、ノーズコーンを介してイソフルラン酸素を連続投与し、手術の間中、麻酔状態を維持してください。坐骨神経損傷モデルにおいて、足趾圧迫反射を用いて麻酔深度が適切であることを確認します。後肢を慎重に剃毛し、残った被毛を除毛剤で取り除きます。除毛後、アルコールで繰り返し清拭し、続いてベタジンで皮膚を消毒します。大腿骨の後方かつ平行に、皮膚を4 mm切開します。大腿の中央部で、微細鑷子を用いて筋肉を広げ、その下にある白い坐骨神経を露出させます。分離した後、神経を切断せずにシャム手術対照とするか、あるいは切断して損傷を誘発させます。最後に、皮膚を寄せ、背側カラム損傷に向けて2つの縫合クリップで閉鎖します。前述のように、背中の毛を除去し、切開部位を洗浄します。T7からT13付近まで、脊髄の上方に2.5 centimeterの切開を加えます。微細ピンセットで皮膚を保持し、脂肪を分離させます。次に、2本のフックで表在性の脂肪を固定します。脂肪を牽引して後方に寄せたら、指標とするため、第6および第7頸椎の間の空間にある血管を確認します。第8および第10椎上の筋肉を両側から切開し、2本のフックを挿入して開いた状態に保持します。棘突起を保持しながら、小型の鋏を用いてT8からT10の椎弓上の筋肉を除去します。両側の連結骨を切断し、T10で椎弓切除術を行います。椎骨の上半分を慎重に持ち上げて、下にある脊髄を露出させます。2% Xylocaineを数滴滴下して脊髄を麻酔し、その後、硬膜を除去します。この際、脊髄に触れないように注意してください。この時点で操作を終了すれば、背柱を損傷させない偽手術コントロールとなります。脊髄に深さ0.3〜0.4 mmの切開を加えます。最後に、筋肉を縫合して閉じ、表在性の脂肪を解放します。皮膚を寄せ、縫合クリップで閉鎖します。動物をホームケージに戻し、完全に回復するまで観察します。受傷から48時間後に動物を安楽死させ、第4腰髄（L4）および第5腰髄（L5）の後根神経節（DRG）を回収します。最初のステップは、腹側脊柱を露出させることです。次に、T 12からL 6までの椎体の腹側半分を除去します。脊髄を露出させるため、脊髄の側方にある椎体間のスペースに位置するDRGを特定します。精密ピンセットを使用して、L4およびL5のDRGを軽く持ち上げます。DRGの本体にできるだけ近い位置で切断してください。4匹の動物から計16個のDRGを回収し、氷冷したHBSSに入れます。DRGを短時間遠心分離し、1% formaldehydeを500 µL加えて、サンプルを37 °Cで30分間インキュベートします。その後、125 mMのglycineを加えて固定を停止させ、室温で5分間インキュベートします。短時間遠心分離した後、バッファーを吸引除去し、プロテアーゼ阻害剤カクテルを添加した氷冷PBS 500 µLで組織を2回洗浄します。次に、PBSを吸引して除去し、400 µLのSDS溶解バッファーを加え、マイクロペッスルで約30回攪拌して組織を破砕します。その後、出力70%で10秒間のパルスを8回繰り返し、クロマチンをソニケーションします。サンプルを解析し、DNAが約200〜1000 base pairsの長さに断片化されていることを確認することをお勧めします。断片化したクロマチンサンプルを新しいチューブに等量ずつ分注します。実施する免疫沈降反応ごとに、チップバッファーとプロテアーゼ阻害剤カクテルを用いて、各チューブの容量を500 µLまで調整します。次に、希釈したサンプルから5 µLを取り出し、新しいチューブに移します。これは1%の入力サンプルであり、必要になるまで-20 °Cで保存します。その後、各チューブに抗体またはノーマルIgGコントロールを加え、4 °Cで一晩回転させながらインキュベートします。翌日。30 µLのProtein G磁気ビーズを添加し、4 °Cで2時間回転混和しながらインキュベートして、複合体を免疫沈降させます。次に、チューブをマグネットラックに設置し、結合したクロマチンビーズ複合体を回収します。上清が透明になったら、注意深く上清を除去し、1 mLの低塩バッファーを用いてビーズを3回洗浄します。各洗浄において、4 °Cで3〜5分間回転混和しながらインキュベートしてください。次に、1 mLの高塩濃度バッファーで1回洗浄します。この時点で、-20 °Cから1% inputサンプルを取り出し、150 µLのチップ溶出バッファーを加えます。チューブを室温に置き、後で使用します。IPサンプルに戻り、各チューブに1x chip elution bufferを150 µL加えます。ビーズからクロマチンを溶出させるため、サンプルを65 °Cで30分間、緩やかにボルテックスしながらインキュベートします。マグネットラックでビーズを回収し、溶出したクロマチンを、インプットサンプルを含むすべてのチューブから新しいチューブへ慎重に移します。200 mMの塩化ナトリウムと、1反応あたり40 µgのプロテアーゼKを加え、65 °Cで2時間インキュベートします。インキュベーション後、標準的な手順を用いてDNAを回収し、以降の解析に使用します。坐骨神経損傷後のDRG組織におけるセミクオンティタティブPCRの結果を以下に示します。レーン1および2は、インプットサンプルのPCRシグナルを示しています。レーン4のPCRシグナルは、坐骨神経損傷後にのみ、アセチル化P 53がgap 43近位プロモーター領域に結合することを示しています。レーン3に見られるように、動物に擬似損傷（sham injury）を与えた場合、およびレーン5と6に示すように通常IgG血清を用いた場合には、PCRシグナルは認められません。同一のDRG組織を用いたコントロールPCRでは、アセチル化P 53がgap 43遺伝子の3'非翻訳領域に位置するコントロールDNA領域には結合しないことが示されています。本手順を実施する際は、成功のために重要な3つのステップを念頭に置くことが大切です。まず、十分な量の組織から開始すること、次に、DNA-タンパク質複合体の効率的な断片化と可溶化を確実に行うこと、そして、目的のタンパク質に対して適切な免疫沈降用抗体を選択することです。

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神経科学

我々は、ミエリンを解放し、残りの軸索に富む材料の抽出に続いて、非軸索の構造を、溶解する低張培地で神経の束とインキュベーションの解剖に基づいて、成体ラットの坐骨神経からの軸索原形質分離のためのプロトコルを示す。...

ラット坐骨神経からの軸索原形質分離

根切断術後の後根の軸索のライブイメージング

培養大人の背根神経節ニューロンの軸索再生の遺伝学的研究

出典: Li, Q., et al.ほ乳類の軸索再生の研究 成体マウス後根神経節のin vivoエレクトロポレーションJ. Vis.

圧死後のマウスの坐骨神経における軸索再生

出典: Li, Q. et al.ほ乳類の軸索再生の研究 成体マウス後根神経節のin vivoエレクトロポレーションJ. Vis.

感覚軸索再生を促進するマウス後根核のエレクトロポレーション媒介トランスフェクション

中枢神経系の再生および修復を調査するために、ショウジョウバエの幼虫腹神経索を用いた傷害のパラダイムが記載されている。意図的に開発されたソフトウェアと遺伝との定量的な分析と組み合わせタイムラプスおよび固定標本でレーザー走査共焦点顕微鏡法、続いて刺すことは中枢神経系の再生および修復の分子メカニズムを解明するために使用されます。...

中枢神経系の修復を調査するために傷害パラダイム<em&gt;ショウジョウバエ</em

このプロトコルは、感覚軸索再生を研究するためのモデルとして、ウイルスベクターによる後根神経節(DRG)注射の使用と成体ラットの同時後根挫傷を示しています。このモデルは、感覚軸索再生を促進するための遺伝子治療の使用を調査するのに適しています。...

後根神経節インジェクションおよび後根感覚軸索再生のためのモデルとして傷害をつぶします

エレクトロポレーションは、興味の遺伝子を細胞に提供する効果的なアプローチです。このアプローチは生体内で成体マウス後根神経節 (DRG)...

成体マウス後根神経節の調査の哺乳類の軸索の再生: In Vivoエレクトロポレーション

ここでは、高品質な後根神経節クライオスタット切片を安定的に取得するための開発を紹介します。...

マウス背根神経節凍結切片の手順

このプロトコルは、軸索損傷後のニューロン代謝ダイナミクスをモデル化するマイクロ流体システムを記述し、内因性代謝リモデリングのイメージング、マルチオミクス分析、およびメカニズム研究を可能にします。...

軸索損傷モデル用マイクロ流体チップの構築とマルチオミクス解析の実現

背根神経節(DRG)は一次感覚神経細胞体を含み、末梢感覚信号を脊髄に中継します。このプロトコルは、構造的に完全な神経節の標準化された分離、解剖学的節節識別、初心者ユーザー向けの直感的な指導、そして手技的組織損傷の軽減を支援するマウスDRG解離の方法を説明しています。...

マウス背根神経節の解離と分離

学ぶ 軸索損傷後の脊髄後根神経節組織からのクロマチン免疫沈降法。転写因子結合部位とエピジェネティック修飾を同定し、軸索再生における遺伝子発現制御メカニズムを解明する。

軸索損傷後の脊髄後根神経節の組織からのクロマチン免疫沈降

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