Name: 子育てに最適化されたプロトコル Fopius arisanus、Tephritid果実の寄生ハエ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min
Description: 学ぶFopius arisanusの飼育プロトコル。熱帯果実ハエの卵期に寄生する天敵ハチの効率的な増殖法を解説。小規模飼育から雌個体の選抜まで、持続可能な防除プログラムの構築に役立つ実践的技術を紹介する。

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我々は、コンピュータグラフィックスのヘルプは昆虫館とナターシャSostromの援助のためにキースShigeteniに感謝。この作品は、USDA - ARSによって賄われていた。本書で述べられた意見、所見、結論または勧告は著者のものであり、必ずしも米国農務省の見解を反映するものではありません。 USDAは、機会均等のプロバイダや雇用主です。

1。寄生虫感染のためにホストのミバエの卵を準備します。 <ol><li>いっぱいに料理、サイドあたりの長さが10センチと1.5センチの深さ、寒天（よりコスト効果の高いオプションを代わりに、Gelcarin GP812、FMCバイオポリマー、ユーイングNJ）を準備することによって寄生さに、ショウジョウバエの卵のために基板を準備します。水1リットル当たり9グラムの濃度で寒天を準備します。 </li><li>液体培地（約70ミリリットル）とリムに料理をご記入のうえ、（少なくとも45分）、それらが冷却固化することができます。 </li><li>寒天ブロックが固体になれば、各ブロックの上部を覆って、ティッシュペーパーの単層（ジョージアパシフィック"環境設定"のバッチ組織の単層）を適用します。組織は、理由の表面の水分の寒天に容易に守らなければならない。 </li><li>寒天ブロックの組織覆われた表面に水に懸濁し、0.5mlの体積のミバエの卵を適用します。私たちの昆虫館では、これはBactrocera背 （ml当たり12000卵）の約6000の卵と同等です。 </li><li>幅広いブラシは組織の表面に均等にミバエの卵を広げるために水に浸した清潔な2.5センチメートルを使用してください。 </li><li>産卵を可能にするために寄生ケージの下画面の下のミバエの卵を置きます。卵の妨げになる死んだ寄生虫を除去するために底画面の下側をタップします。下の画面が卵に触れていない場合、それが最善です。 </li><li>寄生虫は、一晩と翌日に約21時間を産卵することができます。これは、寄生する卵の割合が高いのに十分な時間です​​。より長い曝露リスクのsuperparasitization。 </li></ol> 2。寄生宿主のショウジョウバエの孵化と蛹化<ol><li>面を上に卵とショウジョウバエの食事療法19の1.25リットル当たりの寄生卵の3から3.5準備寒天ブロックを配置することにより、コンテナの飼育準備。 </li><li>大きな蛹化容器に細かいグレードのバーミキュライトまたは洗浄砂の1.5奥行き層以上ライザーの卵でダイエットの容器を置きます。とマスキングテープの端蓋とテープで蛹化容器をカバーしています。バーミキュライトは、（下記参照）ふるい分け後に再利用できます。 </li><li>食事の容器と下vemiculiteに20を "ポップ"からクロールしに、ショウジョウバエの幼虫の蛹化容器の蓋の上部の間に十分なスペースがあることを確認してください。 </li><li> 27で部屋に蛹化容器を移動℃、一週間では80％の相対湿度（RH）。最初の4日間の暗い布でカバーのコンテナは、残りの日のための布を取り除く。 </li><li>一週間後に幼虫の食を削除、一度幼虫がポップされ、蛹化のためのバーミキュライトを入力している。バーミキュライトの幼虫がある場合、それらは一晩蛹になることができます。 </li><li>ふるいバーミキュライトからサナギ。粗いふるい（約3mm）で始まるは、バーミキュライトの残りの塊を除去するために手のふるいを使用してください。 </li></ol> 3。ソートと選択<ol><li>蛹含むF. arisanusは部分的にサイズがunparasitizedショウジョウバエから分離することができます。これらは寄生ハエの濃縮されるように、直径で1.65、2.26ミリメートルの間で蛹を収集する。主に小柄な寄生を含む、より大きなさなぎが主にハエが含まれているより小さいは12 pupariumの複数形は。寄生蛹のために女性の割合はサイズ12で正の相関があることに注意してください。 </li><li>様々な方法は、サイズがサナギをソートするために用いることができる。我々は、カスタムサイズソーター21を用いて機械的な方法を説明します。 </li><li>徐々にサイズ選別機を供給する振動フィーダーの上部に漏斗で蛹を置きます。 </li><li> 30 °の角度で少し発散圧延棒のペアで構成される大きさの選別、中に蛹を養う。漏斗を通してten別の容器に空のスロットの配列へのサイズによって個別にサナギのドロップ。 </li><li> 1.65〜2.26ミリメートルの大きさの範囲内のコップからサナギを収集し、ほとんどのハエがunparasitizedサナギから出てまで、さらに7日間出現ケージの中に置いてください。 </li><li>次に、それらはまだ含まれている昆虫から空のpupariumの複数形を区別するためにファンを使用してください。 </li></ol> 4。F. arisanusの出現とメンテナンス<ol><li> F.のコロニーを維持するためにarisanusは 、取り外し可能なガラスのフロントとサイドあたりの長さが約25cmの寄生保持するケージを使用してください。ケージは、1mm 2の上にスクリーニングし、側面の二つがあります。ケージの背面には、アクセス9 cmの穴とゴムシートで覆われている。ケージの底には、外寄生産卵するため、ショウジョウバエの卵を持つ2つの寒天ブロックの配置を可能にするために十分な大きさ1〜2ミリメートル2画面で内側に覆われてカットされています。 </li><li>保持しているケージはまた上昇率で、その結果、ケージの前面に沿って寄生混雑を作成することができる光を最小限に抑えるためにガラスの前面の底部四半期に沿って色を付けられた部分を持つ必要があります。 </li><li>これらの選択範囲の約11 gを置きますプラスチック容器にテッド蛹直径約9センチメートル。これはケージあたり600から700程度の寄生虫を生成する必要があります。サイズの選択は、約60％の女性になるはずです。 </li><li>コンテナへのスクリーン蓋を取り付けます。蓋は、成人F.できるようにする2ミリメートル2スクリーニング、で覆われるべきarsianus出現時にコンテナを残すことが、残りのミバエが含まれます。 </li><li> 24で寄生虫を維持° Cと12時12分日長と通気性のいいRH約45％。高い死亡率が観察されている場合は、1日に数時間または増加させる換気のために屋外にケージを移動すると、それを減らすことができます。寄生虫は、1つの追加週間で産卵する準備が整っているはずですし、さらに2週間のための生産的でなければなりません。 </li><li>ストリークは、ケージの上部に沿って週または使用可能な場合は蜂蜜が乾燥して少なくとも3回のスピン蜂蜜を原液。指先を使って幅の狭い縞で紡糸蜂蜜を適用します。縞が重すぎる場合は蜂蜜は、ケージに滴下することに注意してください。明るすぎる場合蜂蜜はすぐに乾燥して頻繁に再適用が必要になります。 </li><li>寄生虫に水分を提供するために、ケージの上部の上に置いて寒天ブロック（10センチ× 10センチメートル× 4cm）を。これらは、2回週を変更する必要があります。 </li></ol> 5。代表的な結果： ここでは、USDA - ARS F.に実施した品質管理手順の結果を報告する1月5日およ ​​び2010年6月22日の間にヒロ、ハワイでarisanus飼育操作。このビデオの記事とプロトコルで説明されているスケールでヒロの場所で飼育すると、2009年8月に開始され、そして新しい場所で最初の問題との調整は主に月までに解決されていた。したがって、これらのデータは、結果の代表的な他の研究者が説明したように彼らがプロトコルに従えば、そのコロニーを開始入手し、一般的に昆虫を飼育経験がある場合があります。この期間中、F.の小さなコロニーを維持していたarisanus：約3600 F.に相当する週当たりの生産4寄生蜂保有ケージ、 arisanus。 ホールディングケージ（幼虫食が削除された直後に、すなわちとの開発のさらに1週間前に2.26ミリメートル（濃縮） - 豊かな寄生虫感染率の最初のチェックは1.65の大きさの範囲内の蛹の2gのサンプルを取ることによって実施された蛹は、ふるいにかけたとサイズはソートさ。私たちは、"初期のサナギ"としてこれらを参照してください）​​。 2010年の最初の三ヶ月の間に濃縮されたサンプルの平均割合の寄生虫は0.46（SD = 0.18）であった。次の四半期中にこの平均値は、新しい場所での植民地と飼育手続の安定化を反映し、0.58（SD = 0.08）であった。が正常に寄生されなかった濃縮サナギがemergentsを生成しなかったものとハエを生産するものが含まれることに注意してください。 空のpupariumの複数形の保持ケージの取り外しでさらに1週間後に別の2グラムのサンプルが（"後半蛹'）取られた。ミバエは、この2番目のサンプルの1％未満の表現。ショウジョウバエの低い割合が以前の寄生虫と比較してハエの出現、その保持する容器に残ったほとんどのハエに部分的に原因です。 最後に、図1は、1月から6月2010サナギの質量の収率が得られる。利回りは、利息の大きさの範囲内で蛹濃縮、1.65〜2.26ミリメートルから測定されます。調整が新たな施設に対して行われていた間、今年の初めに"早期蛹"の大きな質量は、その時のミバエとunemerged蛹の高い割合を示している。 <img src="/files/ftp_upload/2901/2901fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図1"> 図1初期の濃縮（蛹の直径1.65〜2.26ミリメートル）の収率（すぐにサイズの選択後）とヒロ、ハワイでARS - USDA F. ariasnusの植民地での"遅い"（一週間のために保持し、空のケーシングを取り除いた後）サナギ、2010年1月〜6月

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</ol>

我々は報告書への関心の競合はありません。

このプロトコルとそれに付随する映像の記事ではF.を飼育するための最適化されたプロトコルを説明し、実証しているariasnus、実験室の設定でTephritidショウジョウバエの寄生蜂、。このプロトコルは、コロニーを維持するために必要な労働力と専門的な機器の量を最小限に抑えるために長年にわたって洗練されています。我々は、ホストのミバエの十分に確立、生産性と安定したコロニーは、寄生の飼育におけるすべての試みのために必要であることに注意してください。私たちの昆虫館では、ホストのミバエとしてBactrocera背を使用していますが 、他の種も同様に14から17有能なホストであることが示されている。 F.のいくつかの側面arisanusのコロニーの維持が検討されずに残っている。これらは、この種の10の研究室の適応の速度、22学習のメカニズムと適応とホストのミバエの可塑性に関与することができるメカニズムで発生する可能性のある遺伝的変化が含まれています。 フランス領ポリネシア、BにB.背：過去10年間、特に世界中Dacineのハエの蔓延の複数の例は、属Bactroceraのものが行われている南米の一部でcarambolae、B.アフリカとBのinvadensアフリカと地中海北岸でzonata。3,23,18は、F.などの生物的防除剤の有効性をテストする他のBactrocera種に対するarisanusは高い優先順位でなければ、そしてそれは、このプロトコルとそれに付随する映像資料に記載の方法のアプリケーションは、F.に関する研究を加速することを願っています場所24の多種多様でarisanus。最後に、出発点としてこの方法を用いてさらなる研究がまた新たな卵寄生25,1の植民地化に重要な情報を提供することがあります

子育てに最適化されたプロトコル fopius arisanus、tephritid果実の寄生ハエ

An Optimized Protocol for Rearing Fopius arisanus, a Parasitoid of Tephritid Fruit Flies

Fopius arisanus（Sonan）は、少なくとも二つの理由Tephritidミバエの重要な寄生蜂である。最初に、それは卵のステージ1の間にホストに感染することが知られてわずか3 opiineの寄生の一つです。第二に、それは潜在的なショウジョウバエのホストの広い範囲を持っています。おそらく、その生活史、F.によるarisanusは正常に複数の熱帯地域で2-4のショウジョウバエの生物学的制御のために使用されています。 F.の広い使用には1つ障害ミバエの制御のためのarisanusは、安定した実験室コロニー5-9を確立することが困難なことです。この困難性にもかかわらず、1990年代に米国農務省の研究者は、F.の実験室個体群を維持するために信頼性の高い方法を開発arisanus 10-12。 F.に大きな関心があるarisanus生物学13,14、特にTephritidホスト14から17までの様々なコロニーを形成する能力については、関心は、特に過去10年間18の新たな大陸へBactroceraのミバエの害虫の驚くべき普及により駆動されます。 F.に関するさらなる研究arisanusと生物的防除剤としてのこの種の追加の展開では、飼育方法の最適化と改善の恩恵を受ける。このプロトコルと関連するビデオの記事ではF.を飼育するための最適化方法を説明します。 arisanusは、前述のアプローチ12に基づいて。我々はここで説明する方法により、F.の飼育世界中の、比較的低い肉体労働を必要とする熱帯地域で入手可能な材料を使って果物を使用せずに小規模でarisanus、。

Fopius arisanusは正常にこれらの重要な熱帯の害虫の生物的防除に使用されているTephritidミバエの卵-幼虫寄生蜂である。ここではFを飼育するための最適化されたプロトコルを記述する容易に入手できる材料を使って小規模のarisanus。

子育てに最適化されたプロトコル Fopius arisanus、Tephritid果実の寄生ハエ

Fopius arisanus (Sonan) は、少なくとも2つの理由から、ミバエ科の果実蠅にとって重要な寄生蜂である。第一に、本種はオピウム亜科（opiine）の中で唯一の3種の……

FOIA Ausは、熱帯地方全域、特にここハワイにおいて深刻な経済的害虫である果実実蠅を攻撃するため、ハワイにおける重要な生物学的防除剤となっています。FOIA Ausの優れた点は、害虫の卵の段階を攻撃し、それによって早期に害虫を抑制できることです。以下のクリップでは、研究室環境でFOIA Ausをどのように飼育しているかの接写映像をご覧いただけます。そして本プログラムの最後には、この特定の寄生蜂がフランス領ポリネシアの放出プログラムでどのように活用され、成功を収めたかについての議論を紹介します。まず、ホストとなるミバエの卵に寄生可能な成虫の寄生蜂を用いてプロトコルを開始します。最初のステップは、寄生蜂に供するためのミバエの卵を準備することです。次に、ショウジョウバエの幼虫を孵化させ、成長させ、蛹化させます。ショウジョウバエが蛹の段階に達したら、寄生虫を濃縮するためにサイズによって選別します。最後に、寄生虫を羽化させ、成熟するまで維持します。その後、彼らは出会い、再び新しい果実のバッチに産卵する準備が整います。ハエの卵です。これでサイクルが完了します。1辺が約10 cmの寒天ブロックを作成し、ショウジョウバエの卵用の基質を調製します。寒天は、水1 Lに対して寒天粉末9 gの濃度で調製します。水平な場所で、ディッシュの縁まで液体オーガーを満たし、少なくとも45分間凝固させます。オーガーブロックが固まったら、各オーガーブロックの上面を覆うようにティッシュペーパーを1層重ねます。表面の水分により、ティッシュはオーガーに容易に密着します。2回目のローリングを行います。ショウジョウバエの卵を、オーガーブロックの組織で覆われた表面に塗布します。懸濁液状態のショウジョウバエ卵 0.5 mLあたり、1ブロックにつき約6,000個の卵が得られます。水に浸した幅 2.5 centimeter の絵筆を用い、ショウジョウバエの卵を組織表面に均一に広げます。次に、寄生虫による産卵を可能にするため、ショウジョウバエの卵を寄生虫ケージの底面スクリーン下に配置します。スクリーンの下面を叩くことで、ショウジョウバエへのアクセスを妨げる可能性のある死滅した寄生虫を除去します。ショウジョウバエの卵に寄生虫を一夜かけて産卵させます。ショウジョウバエの卵の大部分に寄生させるには、約21時間で十分です。曝露時間を長くしすぎると、過寄生（Super parasitizing）のリスクがあります。寄生虫への曝露後に卵を飼育するために必要な主な構成要素は、ショウジョウバエ幼虫用餌、幼虫用餌容器、および蛹化容器です。寄生卵をセットした3〜3.5個のオーガーブロックを、1.25 Lのショウジョウバエ幼虫用培地に配置します。卵を入れた培地容器をライザーの上に置き、その上に、1.5 cmの深さの細粒バーミキュライトまたは洗浄砂を敷いた蛹化容器を被せます。マスキングテープで蛹化容器の縁を固定します。幼虫が餌容器から這い出し、下のバーミキュライトに入り込めるよう、餌容器の上端と蛹化容器の蓋の間に十分な隙間があることを確認してください。蛹化容器を温度27°C、相対湿度80%の室内に移し、1週間保持します。1週間後、最初の4日間は容器を厚手の布で覆います。蛹化容器を開け、幼虫用の餌を取り除きます。foia Airisを飼育するためのホストショウジョウバエとして、Bre Dorsalsを使用します。Asfa属およびSitis属の他の種も潜在的な宿主となります。バーミキュライト中に未蛹化の幼虫がいる場合は、一晩置いて蛹化させます。バーミキュライトから蛹を回収するには、粗いふるいと大きな容器を使用してください。次に、手 sieve を使用して、残っている vermiculite Eria containing opia の塊を取り除きます。寄生されていないショウジョウバエから Ais を部分的に分離させます。先行研究に基づき、直径 1.65 から 2.26 millimeters の aria のみを回収します。それより小さいものは、ほとんどがサイズ不足の寄生蜂を含んでいます。サイズの大きいariaには主にハエが含まれています。蛹をサイズ分けするために、さまざまな方法を用いることができます。ここでは、収集した寄生ariaに対してカスタムサイズのソーターを使用した機械的な分級方法について説明します。雌の割合はサイズとともに増加します。機械式サイズ選別機の頂部にあるファンネルにプイを入れます。振動フィーダーによって、30度の角度でわずかに開いた一対のローリングバーの頂部へと移動させます。個々の個体がスロットの配列に落下し、ファンネルを通って10個の個別の容器に分かれて回収されます。1.65 millimetersから2.26 millimetersのサイズ範囲の蛹を羽化ケージに入れ、ほとんどのハエが寄生された蛹から羽化するまで、さらに7日間保持します。次に、ファンを用いて、空になった蛹殻と、まだ生存している寄生蜂が含まれている蛹を分離します。Opia Ausのコロニーを維持するには、一辺が約25 centimetersで、前面が取り外し可能なガラス製となっている寄生蜂保持ケージを使用してください。ケージの上面と側面の2面には、1 mm² のメッシュが張られています。ケージの背面はゴムシートで覆われており、アクセス用の 9 cm の穴が開いています。ケージの底面には切り欠きがあり、内側は 1〜2 mm² のメッシュで覆われています。果実を入れた2つのオーガーブロックと、寄生虫を配置するためのハエの卵を設置できる十分な広さを確保してください。また、保持ケージの前面ガラスの下部4分の1には、ケージ前面への寄生虫の密集を最小限に抑えるため、着色部分を設ける必要があります。選定したaria約11 gを、直径約9 cmのプラスチック容器に入れます。これにより、ケージあたり約600から700匹の寄生虫が得られるはずです。サイズ選別を行うことで、雌の割合を約60%にすることができます。容器にスクリーン付きの蓋を取り付けます。蓋には2平方ミリメートルの網目があるスクリーンを被せ、これにより羽化した個体が容器から脱出できるようにしつつ、残っているショウジョウバエを閉じ込めます。寄生虫を24 °C、相対湿度約45%、12時間明期/12時間暗期の光周期、および良好な換気条件下で維持し、ケージの上部に遠心分離ハチミツを少なくとも週3回、線状に塗布します。または、塗布済みのハチミツが乾燥した際に、指先を用いて狭い線状に遠心分離ハチミツを塗布してください。塗布量が多すぎるとハチミツがケージ内に滴り落ちるため注意してください。逆に塗布量が少なすぎると、ハチミツがすぐに乾燥し、頻繁な塗布が必要になります。寄生虫に水分を供給するため、10 cm四方、深さ4 cmのアガーブロックをケージの上部に配置します。これらのブロックは週に2回交換する必要があります。2001年、私たちは、当時ミカンキイロショウジョウバエがすべての熱帯果実に信じられないほどの被害をもたらしていたため、状況を改善するためにフレンチポリネシアに生物学的防除を導入できるかを確認するための少額の助成金を受け取りました。ここハワイの研究所から、私たちは10回の輸送を行いました。通常、これらの出荷の1回あたり約10万匹のFopius arisanusが含まれていました。実際にはそれよりもかなり多かったのですが、寄生蜂を中に入れたミカンキイロショウジョウバエのパペット（蛹）の状態で輸送し、その後、羽化させました。そこでタヒチに小規模な研究室を設置し、これらを受け取ってからFopius arisanusを羽化させました。その結果、約1年ほどの期間で、100万匹近いFopius arisanusを放逐しました。全体として、これはハワイ以外で最も成功した事例です。FOIA Ausがハワイで最初に導入された際、それは太平洋全域におけるミバエの生物学的防除の最良の例となりました。過去10年間で、Bactrocera dorsalis complexは世界中で激しく拡散しています。このように、Bactrocera Carboは南米のスリナムに広がり、現在はブラジル北部にも浸透しています。また、Bacter Inanceと呼ばれる別の種がアフリカ全域に広がり、甚大な被害をもたらしています。さらに、bacter papayaの拡大も見られます。したがって、今回の成功により、南米、アフリカ、およびアジアのその他の地域にこれらのFOIA Ausを展開する機会が開かれました。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

無菌およびノトバイオート条件の下でショウジョウバエを飼育するための方法が提示されています。フライ胚は、次亜塩素酸ナトリウムでdechorionated無菌の食事に無菌的に移し、密閉容器で飼育されています。細菌にダイエットや胚を接種すると、ノトバイオート団体を招き、細菌の存在が全身ショウジョウバエホモジネートをめっきすることによって確認されました。...

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下部双翅目バエ Bradysia(Sciara)coprophilaの実験室維持:新/古い新興モデル生物

このプロトコルの目的は、 アソバラ・ジャポニカ およびショ ウジョウバエメラノガスター...

内寄生蜂Asobara japonicaおよびその宿主Drosophila melanogasterの効率的な飼育および機能解析のためのプロトコル

ショウジョウバエの勉強攻撃（ミバエ類）

このビデオでは、実験室で背面ハマダラカに使用される一般的なテクニックを示しています。実験室での蚊の世話をするための方法は、吸血性の成人に蛹に幼虫から生物のライフサイクルの全段階を経て実証されています。...

モスキート子育てのためのプロトコル（A. gambiae）

果実の揮発性化合物分析のための迅速な方法が記載されている。サンプルのホモジネートのヘッドスペース内に存在する揮発性化合物は急速に分離し、弾性表面波（SAW）センサと相まって超高速ガスクロマトグラフィ（GC）で検出されています。データ処理と分析のための手順についても説明されています。...

電子鼻を使用した果実の揮発性の分析

学ぶFopius arisanusの飼育プロトコル。熱帯果実ハエの卵期に寄生する天敵ハチの効率的な増殖法を解説。小規模飼育から雌個体の選抜まで、持続可能な防除プログラムの構築に役立つ実践的技術を紹介する。

子育てに最適化されたプロトコル Fopius arisanus、Tephritid果実の寄生ハエ

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