組織切片の脱パラフィンと再水和:FFPE組織スライドからパラフィンワックスを除去するための2段階の手順とそれに続く組織再水和

ホルマリン固定パラフィン包埋またはFFPE技術により、固定、脱水、および透明化された組織標本をパラフィンブロック内に保存して長期保存することができます。FFPEは、組織の形態を損なうことなく、タンパク質やその他の重要な細胞内成分を保存します。

脱パラフィン化、つまり包埋組織を取り巻くパラフィンワックスの除去は、下流の分析のためにFFPE組織検体を処理する前の重要なステップです。脱パラフィン化を開始するには、適切な厚さの未染色のFFPE組織切片を運ぶスライドガラスから始めます。

組織切片をキシレン浴に浸し、所望の時間インキュベートします。有機溶媒であるキシレンは、組織に埋め込まれ浸透したパラフィンワックスを溶解します。パラフィンワックスを完全に除去すると、固定および脱水された透明な組織標本が露出します。

脱パラフィン化後、検体を無水エタノールで処理します。エタノールは、組織切片から微量のキシレンを置換して除去します。続いて、組織を濃度を下げたエタノールに浸します。このプロセスは、下流の組織学的分析のために組織を再水和します。

最後に、スライドを好きな時間そのままにしておきます。このステップにより、エタノールと水が蒸発し、乾燥した再水和組織切片が得られます。

まず、10マイクロメートルの未染色ホルマリン固定パラフィン包埋切片を準備します。スライドをスライドガラスホルダーに入れ、キシレンで満たし、スライド上のすべての組織が水没していることを確認します。スライドをキシレンに15分間放置します。次に、スライドが落ちないようにピペットチップでスライドを持ちながらキシレンを注ぎます。以前と同じレベルまでキシレンをさらに注ぎ、インキュベーションを繰り返します。

キシレンを注ぎ、スライドホルダーに100%エタノールを入れ、スライド上のすべての組織が完全に水没していることを確認します。スライドをエタノールに3分間放置します。次に、エタノールを新鮮なエタノールに置き換え、さらに2分間インキュベートします。エタノールを注ぎ、スライドを取り外します。清潔なペーパータオルの上に慎重に上向きに置き、10分間乾かします。