スライド切片の弾性繊維染色:胃がん転移の観察技術

弾性線維染色は、腹膜弾性層または中皮下弾性組織を超えたがん細胞の浸潤を調べるのに役立ちます。

まず、処理された組織切片に過マンガン酸カリウム溶液を加え、続いてシュウ酸に浸します。過マンガン酸カリウムとシュウ酸の組み合わせの強力な酸化特性は、組織切片から天然色素を漂白し、弾性繊維の形態を覆い隠すことによる染色プロセスへの干渉を防ぎます。

スライドを水とエタノールですすぎ、残留漂白剤を取り除きます。次に、鉄-ヘマトキシリン複合体を含むエラスチン染色で検体をインキュベートします。主要な弾性繊維成分であるエラスチンは、鉄とヘマトキシリン複合体に対して強い親和性を持っています。

スライドをエタノールと水で洗浄し、残留汚れを取り除きます。最後に、ピクリン酸とポンソーSを含む対比染色で標本を処理します。より小さなピクリン酸分子は、すべての組織タイプに浸透しますが、密接なテクスチャーの筋肉細胞と癌細胞によってしっかりと保持されます。対照的に、大きなポンソーS分子は多孔質テクスチャーのコラーゲン中のピクリン酸を置換し、コラーゲンの染色を筋肉細胞やがん細胞とは異なるもの

にします。

顕微鏡で観察すると、弾性繊維は青黒色のフィラメントとして現れます。コラーゲンは赤く染まり、筋肉細胞やがん細胞は黄色に見えます。青黒色の弾性層を貫通する黄色のがん細胞は、転移性浸潤を確認します。

まず、ティッシュペーパーを使用して、スライド上またはティッシュの周囲の余分な溶液を拭き取ります。スライドを室温と湿度に合った条件に置きます。各スライドに過マンガン酸カリウムを数滴加えて酸化し、追加した量が各スライドの組織切片を覆うのに十分であることを確認します。5分後、酸化したスライドをコプリンジャーの蒸留水ですすぎ、すすぎを2〜3回繰り返し、すすぎごとに新しい水の入った瓶を使用します。組織は観察可能な茶色でなければなりません。

次に、各スライドにシュウ酸を数滴加えて漂白し、追加した量が各スライドの組織切片を覆うのに十分であることを確認します。5分後、漂白剤スライドを蒸留水ですすぎ、すすぎを2〜3回繰り返し、すすぎごとに新しい水の入った瓶を使用します。スライドを95%アルコールで短時間洗浄します。

洗浄したスライドをエラスチン溶液に8〜24時間浸します。次に、スライドを95%エタノールに直接1〜2分間浸漬して、各組織切片をよく区別します。スライドを蒸留水で完全にすすいでください。

青黒色の弾性繊維の染色と灰色の背景を顕微鏡で確認します。その後のヴァンギーソンの対比染色も弾性染色をいくらか抽出できるため、組織をわずかに過小に区別することをお勧めします。

スライドをヴァンギーソン溶液で1分間対比染色し、使用する量が各スライドの組織切片を完全に覆うのに十分であることを確認します。次に、95%エタノールを組織スライスに数秒間急速に滴下し、各組織切片をよく区別します。