脱細胞化ブタ食道足場調製:ブタ食道から無細胞足場を生成する技術

特定の組織の細胞外マトリックスに由来する脱細胞化足場は、それらの天然の細胞外微小環境を模倣します。これらの足場は、構造的完全性と生化学的組成を維持し、組織工学の有望なプラットフォームとして機能します。

脱細胞化されたブタ食道足場を準備するには、切除したばかりのブタ食道から始めます。食道を縦方向に二等分し、適切な緩衝液ですすぎ、破片を取り除きます。次に、食道の粘膜表面、つまり最内層を上に向けて

固定します。

食道の一端にある下にある粘膜下層から粘膜を分離します。固有層と呼ばれる粘膜の緩い結合組織に沿って食道を縦方向に解剖し、粘膜表面を下にある粘膜下層から完全に分離します。

さらに、粘膜下腺の密度が高く、固有層層が厚い粘膜の近

位および遠位領域を切除します。粘膜組織を均一な大きさに切ります。

抗生物質を添加した高張生理食塩水で組織を治療します。抗生物質は細菌の増殖を防ぐのに役立ちます。溶質濃度が高いと、水が細胞から排出され、細胞が収縮します。このステップは、細胞死と細胞外マトリックスからの剥離をさらに助けます。

次に、緩んだ上皮を下にある組織からそっと切り離します。組織を緩衝液ですすぎ、細胞破片を除去します。最後に、組織をグリセロール中でインキュベートし、基底膜の完全性を維持しながら細胞を脱水および溶解することにより、組織の脱細胞化をさらに促進します。

脱細胞化されたブタ食道足場を準備するには、ハサミとピンセットを使用してブタの食道を縦方向に切り開くことから始めます。次に、100ミリリットルの滅菌PBSを含む180ミリリットルの滅菌ポットで食道を10分間洗浄し、軽く振とうて破片を取り除きます。

組織をすすぎながら、コルク解剖板に70%エタノールをスプレーします。コルクが乾いたら、粘膜面を上にして食道をボードに固定します。次に、滅菌ピンセットを使用して食道の一端の粘膜表面をつかみ、組織をボードから引き離して、粘膜を下にある粘膜下層から分離します。

次に、滅菌メスの刃を使用して、固有層に沿って食道を縦方向に解剖し、解剖が進行するにつれてピンを取り外して粘膜を持ち上げます。下にある粘膜下層を捨て、メスを使って残りの粘膜を5センチ四方に切ります。先ほど示したように、150ミリリットルの滅菌PBSで穏やかに攪拌しながら破片を洗浄します。

5分後、摂氏37度で抗生物質を添加した150ミリリットルの1モル塩化ナトリウム溶液を含む180ミリリットルのポットに組織を移します。72時間後、組織を150ミリリットルの滅菌PBSに移し、その時点で上皮が下にある組織から目に見えて分離し始めます。

滅菌鉗子とメスの刃を使用して剥離した上皮を除去し、残りの組織を150ミリリットルの滅菌PBSの新鮮なポットに入れ、穏やかに攪拌しながら5分間3回洗浄します。足場を完全に滅菌するには、組織をグリセロールで最低 4 か月間保存する必要があります。