流体力学的腎骨盤注射:マウスモデルの腎臓細胞にDNAを直接送達する技術

プラスミドDNAをマウス腎細胞に直接送達するには、まず麻酔をかけたマウスを側臥位に置きます。マウスの背側の毛皮を側面から取り除いて準備します。胸郭の下の左脇腹に適切な切開部位を見つけます。

皮膚とその下の筋肉層に小さなスリットを入れます。次に、腹腔に優しく圧力をかけて、切開部位から腎臓を露出させます。重ね合わせている腎周囲脂肪組織を部分的に除去して、腎盂を視覚化します。

次に、プラスミドDNAを含むシリンジを流体力学的デリバリーバッファーに取ります。腎盂(腎臓の尿管の三角形の拡張部分)に直接針を挿入します。DNAが腎実質(血液をろ過する腎臓の機能部分)に直接到達するように、プラスミド溶液を急速に注入します。

腎盂を通る大量の体液が素早く供給されると、高圧が蓄積され、腎実質細胞の原形質膜に一時的な細孔が形成されます。これにより、プラスミドの細胞への侵入が容易になります。最終的に、これらの細孔は閉じ、プラスミドを細胞内に閉じ込めます。

最後に、針を引っ込めて腎臓を腹腔に戻します。切開部位の皮膚と筋肉層を縫合します。

滅菌手術用手袋を着用し、切開部の側面から始めて、新しいクロルヘキシジン/アルコール綿棒で動物を円を描くように3回綿棒で拭きます。次に、切開部位を見つけます。ピンセットで皮膚をつまみ、はさみを使用して、胸郭の下の背骨から約1センチの皮膚層を切り取ります。筋肉層の下に別のセンターカットを作成します。腎臓を見つけ、触れずに、指で腹部に安定した穏やかな圧力をかけて、腹腔からそっと露出させます。

腎臓を露出させるのは難しい場合があります。脾臓を損傷しないように、腹部と背骨に穏やかな圧力をかけます。腎臓以外の臓器が出てきた場合は、必要に応じて閉じた鉗子を使ってそっと体腔に戻してください。

次に、腎臓を周囲の脂肪からそっと分離し、小さな白い点として見える腎盂を視覚化します。腎盂を視覚化した後、閉じた鉗子を使用して腎臓の右側を押し下げ、腎盂が視界に留まるようにします。次に、装填されたインスリン注射器を作業面と平行に持ち、右手で握り、針を腎盂に慎重に挿入します。

針を挿入したら、3秒以内に素早く溶液を注入します。溶液の逆流を防ぐために、針を約10秒間所定の位置に置いてください。次に、ゆっくりと慎重に針を抜き、閉じた鉗子を使用して切開部位を優しく伸ばして臓器を腹腔に戻します。次に、5〜0本の吸収性縫合糸で筋肉層を縫合し、2〜4個の独立した結び目を置きます。同様に、5-0または6-0の非吸収性ナイロン縫合糸で皮膚層を縫合し、2〜4個の独立した結び目を配置します。