出生前マウス胚の回収:妊娠マウスから胚を採取する手順

マウス胚は、初期の哺乳類の胚形成を研究するためのモデルシステムとして使用されます。胚発生の望ましい段階で周産期マウス胚を回収するには、安楽死させた妊娠中のマウスを仰臥位で行うことから始めます。

次に、腹部を滅菌し、腹壁を横方向に切開して、下にある子宮角を明らかにします。子宮角は、一連の胚を含む長い管状構造です。次に、子宮角を周囲の組織から切除して、腹部から慎重に分離します。

採取した子宮角を緩衝液の入った皿に移します。子宮の角をすすぎ、組織の破片や血液を取り除きます。さらに、子宮の角に沿って着床部位を切開して、各胚を分離します。脱落膜、母体の胎盤層、および胚由来の胎盤を切除します。

次に、胚に栄養を提供する胚を取り巻く小さな胚外膜構造、つまり卵黄嚢を取り除きます。最後に、羊膜(胚を取り囲んで保護する液体で満たされた嚢からなる最も内側の胚外膜)を除去して、マウス胚を解放します。

回収された周産期胚は、哺乳類の初期発生の研究に使用できます。

70%エタノールで解剖用はさみと鉗子をきれいにします。E18.5またはE19.5で周産期胚を採取するには、まず、二酸化炭素吸入を使用して妊娠中のマウスを安楽死させます。次に、NIHのガイドラインに従って頸部脱臼を行います。

次に、動物の腹側腹面に70%エタノールをスプレーします。次に、滅菌解剖ハサミと鉗子を使用して、最終的に腹腔を開きます。子宮全体を持ち上げ、子宮角の先端で体から分離します。次に、ペトリ皿で1x PBSで子宮全体をすすぎます。

解剖

はさみで子宮を分節的に切断し、解剖鉗子で胎盤脱落膜を除去して、卵黄嚢の胚を露出させます。最初に卵黄嚢を取り除き、次に解剖鉗子で羊膜を取り除き、周産期胚を解放します。